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实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱制备完成后，抗原溶液即可以上样，接着洗去污染物，然后洗脱抗原。如果不能利用特异的配基破坏抗原抗体之间的相互作用来洗脱，只好釆用非特异洗脱方法。但是非特异洗脱方法一定要小心应用，以免目的蛋白失活。单克隆抗体通常在免疫亲和纯化中比多克隆抗体更有用。单抗代表与目的蛋白具有单一特异结合部位的均一抗体，因而它的结合是确定一致的。洗脱也如此，因为只需破坏单一类型的相互作用就能释放目的蛋白。应当说，多克隆抗体在亲和纯化中也是可用的，特别是用很纯的抗原免疫动物产生的多克隆抗体。总之，进行有效......阅读全文
实验方法原理 在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonuc
实验方法原理 在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 结合形成 hnRNP 复合物。实验材料 HeLa S3 细胞抗体试剂、试
在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 结合形成 hnRNP 复合物。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000～10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明，并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤，那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法，特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱制备完成后，抗原溶液即可以上样，接着洗去污染物，然后洗脱抗
实验概要实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱，比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。实验原理以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必
实验概要实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱，比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。实验原理以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必
以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分
以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分
实验步骤 基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀材 料未标记或标记的细胞悬液P B S ，冰预冷非变性裂解缓冲液，冰预冷5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。（一）超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同，离心的转速和时间也不同
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。（一）超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同，离心的转速和时间也不同
抗体的纯化 实验方法原理 利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法
实验方法原理利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力，所以应根据免疫球蛋白的种类和类
实验方法原理 利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力，所以应根据免疫球蛋白
人肿瘤抗原可以：（1）用于肿瘤诊断；（2）免疫治疗。实验方法原理 本实验用Dynabeads protein A 进行免疫复合物的纯化。Dynabeads A 蛋白 （Dynabeads Protein A） 在免疫沉淀中有以下作用：（1）将方案时间减少到 30 分钟。（2）显著降低非特异
实验方法原理本方案以人 RNA 聚合酶 II（Pol II）为例，描述抗原表位标记蛋白的纯化。RNA 聚合酶 II 是一个具有 12 个多肽（RPB1-12）的多亚基蛋白复合体。Pol II 最大的亚基（RPBl）具有一个唯一的七肽序列 Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser（YSP
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。免疫沉淀要求抗原的纯度尽可能提高。降低本底，用不与待检抗原结合的非特异性抗体预处理，可以从抗原溶液中除去非特异性结合蛋白，即此法次是用非免疫抗体降低本底，第二次再用所研究的抗体，这样进行二次免疫沉淀是达到纯化免疫沉淀物*有效的方法。今天上海劲马
实验方法原理 剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒
实验方法原理 剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 PBS-Earle缓冲液磷酸盐缓
羟基磷灰石 (hydroxyapatite,HA) 是一种以磷酸钙为原料的羟基化物, 其大量地用于蛋白质的层析分离主要是在 1991?2009 年，并且最初只是用于重组蛋白的纯化。HA 的使用方法参照 Tiselius 等（1956) 的论述和 Gorbunoff(1985) 的综述。实验步骤一、机
实验步骤 一、机制 从 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已经幵始定期发表关于 HA 对蛋白质吸附与解吸附的综述。最近的一篇文献 (Kandorietal.，2004) 引用了较早阐述的
免疫组织化学的概念： 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。 免疫组化实验所用的抗体有哪些？ 免疫组化实验中
我们的HA-PrecipHen®由共价附着于琼脂糖珠上的鸡抗HA表位标签抗体制成。它设计用于在免疫沉淀（IP），染色质免疫沉淀（ChIP）和蛋白质纯化应用中与HA表位标记的蛋白质一起使用。我们的IgY-PrecipHen®由山羊抗鸡IgY制成。共价附于琼脂糖珠的抗体。它设计用于免疫沉淀（IP），染色
定量蛋白试剂盒 在蛋白分析相关的试剂消耗品方面，Thermo Fisher Scientific都是直接在仪器上开发的。由于试剂和仪器时配套的，从而能够提高分析效率。例如细胞培养氨基酸稳定同位素标记技术（SILAC）和串联质谱标签（tandem mass tag）试剂盒。 细胞培养氨基酸稳定
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，但大多数
针对外来抗原的抗体分子（Ab1)可变区上Id可刺激机体产生相应的抗Id抗体（Ab2)。Ab2β具有与外来抗原相似的氨基酸排列顺序或空间构型，它能够在体内模拟始动抗原的作用。应用Ab2β的这一特性，可有目的地制备Ab2β，将其作为抗原的替代物用于基础和临床医学研究。 一、抗独特抗体的制
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用，通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用，是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上，免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用，不同的部分在于, 层析后需要回收
剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接体 ( splicc
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，但大多数