免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱制备完成后，抗原溶液即可以上样，接着洗去污染物，然后洗脱抗原。如果不能利用特异的配基破坏抗原抗体之间的相互作用来洗脱，只好釆用非特异洗脱方法。但是非特异洗脱方法一定要小心应用，以免目的蛋白失活。单克隆抗体通常在免疫亲和纯化中比多克隆抗体更有用。单抗代表与目的蛋白具有单一特异结合部位的均一抗体，因而它的结合是确定一致的。洗脱也如此，因为只需破坏单一类型的相互作用就能释放目的蛋白。应当说，多克隆抗体在亲和纯化中也是可用的，特别是用很纯的抗原免疫动物产生的多克隆抗体。总之，进行有效......阅读全文
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱制备完成后，抗原溶液即可以上样，接着洗去污染物，然后洗脱抗
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱
免疫纯化实验
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000～10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明，并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤，那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法，特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共
免疫球蛋白纯化技术——盐析法纯化免疫球蛋白
在大多数情况下，免疫血清、杂交瘤细胞培养上清以及腹水中的抗体需经纯化后再用于各种免疫学检测中去。免疫球蛋白常用的纯化方法有盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析以及高效液相色谱等方法。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）实验方法原理蛋白质在水
免疫复合物的纯化
实验概要本实验介绍了免疫复合物纯化的基本操作步骤。主要试剂裂解缓冲液抗体蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％叠氮钠裂解缓冲液配成10％(V／V)的混悬液，4℃保存)不含DTT的Laemmli样品缓冲液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚蓝)1mol／LDTT(
免疫球蛋白纯化技术
盐析法纯化免疫球蛋白 DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白 Sepharose CL-4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类 高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体 单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素（rHuIFN-
免疫球蛋白纯化技术—DEAESephadexA50柱层析纯化免疫球蛋白
实验方法原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白（等电点为PH6.85～7.5），其余均属酸性蛋白。在PH7.2～7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephad
从免疫印迹到抗体纯化
一、材料和试剂 1. PVDF或硝酸纤维素膜（Amersham，GEhealthcare）2. 透析袋（PierceCat#68035）3. 丽春红S（Sigma，Cat#P7170）4. 脱脂奶粉（Carnation，any your favorite brand in local st
从免疫血清纯化抗体
1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于滤纸上干燥。3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。4． 移去Buffer
从免疫血清纯化抗体
从免疫血清纯化抗体1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于滤纸上干燥。3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。4． 移
免疫球蛋白G(IgG)的纯化
抗大鼠ic链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶亲和层析实验步骤 一般情况下，单 克 隆 抗 体（尤其是大鼠源性）不能用 蛋 白A 或 蛋 白 G 交联琼脂糖凝胶层析纯化，在此情况下，可使用抗大鼠Ig 轻链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶层析柱来结合组织培养上清或腹水中的大鼠单克隆抗体，然后用逐步降低洗脱液p H 的方
T、B及其他免疫细胞的纯化
经密度梯度离心法获得的单个核细胞是不均一的细胞群，还可根据各种细胞的生物学特性、表面标记等进一步纯化。例如单核细胞等具有粘附和吞噬作用，可用玻璃或塑料容器的粘壁法和吞噬羰基铁颗粒的磁铁吸引法除去或获得。绵羊红细胞能与人T细胞形成E花环，藉此可通过花环沉降法分离T与B淋巴细胞。此外，利用B细胞具有
免疫球蛋白提取分离纯化技术
实验概要免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。本实验对禽血清IgG和IgA进行了分离纯化。实验原理免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和I
免疫球蛋白纯化技术——纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验方法原理根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。实验材料PBS试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材层析柱高效液相色谱仪实验步骤1. 腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使
免疫亲和纯化与coip有什么区别
IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下，直接用这种抗体将目标蛋白质提取出来，是一种提纯蛋白质的方法。 Co-IP主要用于检测蛋白质与蛋白质之间连接作用，如你想检测蛋白质A与蛋白质B之间是否有相互作用，你手中又有蛋白质A的特异抗体，就将蛋白质A和抗体加入到含有蛋白质B的细胞解液中去，利用抗体提纯，如果蛋白
免疫球蛋白G－(－I－g－G－)－的纯化
硫酸铵沉淀可纯化小鼠抗体的所有亚类和其他种属抗体，本方案也可用于纯化任何种 属 的 IgM、 IgG 和 IgA。材 料腹水 或 MAb 上 清（单 元 1.4)VPBS饱 和 硫 酸 铵（SAS)硼 酸 盐 缓 冲 液（可选）聚丙燏酰胺葡聚糖凝胶 S-200 Superfine (Pharmaci
盐析法(salting－out－method)纯化免疫球蛋白
(一) 原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量
免疫球蛋白纯化技术——Sepharose－CL4B亲和柱层析纯化IgG
实验方法原理葡萄球菌A蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。实验材料SPA-Sepharose C
免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白D(IgD)－的纯化
基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)PBSS
免疫球蛋白纯化技术——纯化重组人α2a干扰素（rHuIFNα2a）
实验方法原理重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90 ％以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb
多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳2
⒊ 注射抗原 ⑴ 准备两只成年兔，将100µg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射
放射免疫分析标记物的纯化及鉴定
(1)纯化不论使用何种制备方法,要获得合格的标记化合物,都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外,一些标记化合物,经过一定时间的存放后,可发生脱碘和自身辐射造成蛋白质被破坏形成碎片,会出现不纯物,故需对标记物重新纯化。125I标记反应后的混合液需进行分离纯化以除去游离 I 和其他试剂,纯化标记物的方
多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳1
一、多克隆抗体的制备【实验原理】当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。将抗原导入敏感动物体内
DEAESephadex－A50柱层析纯化免疫球蛋白
(一) 原理DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85～7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2～7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephad
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定3
一、试剂和器材1．试剂(1）消化液30％过氧化氢与硫酸与水的比例为3:2:1，即在1 份的蒸馏水中缓慢加入2 份的硫酸，待冷却后，将其加到3 份的过氧化氢中。临用时配制。(2) 催化剂 硫酸铜（CuSO4·5H2O ）与硫酸钾（K2SO4）以1 : 3 配比研磨混合。(3）40 ％氢氧化钠溶液 (4
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定6
VI 凝胶层析法分离纯化蛋白质一、目的了解凝胶层析的基本原理，并学会用凝胶层析分离纯化蛋白质。二、原理凝胶层析也称凝胶过滤、凝胶过滤层析、分子排阻层析和分子筛层析。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，凝胶层析是一种分子筛效应，主要用于分离分子大小不同的生物大分子以及测定其相对分子质量。相对分子质量小的
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定7
7．低相对分子质量标准蛋白质（上海产），开封后溶于200ml 重蒸水，加200ul2 倍样品缓冲液（还原缓冲液），分装20 小管，-20℃ 保存。临用前沸水浴3-5min。其相对分子质量如下： 标准蛋白质 Mr 兔磷酸化酶B 97400 牛血清白蛋白 66 200 兔肌动
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定5
（五）操作1．直接测定法在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm 和260nm 两种波长的吸光度。将280nm 及260nm 波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度。C = 1.45A280 — 0.74A260式中C：蛋白质质量浓度（mg/m
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定2
二、组织样品在生化实验中，经常利用离体组织研究各种物质代谢途径和酶系的作用。或者从组织中分离、纯化核酸、酶以及某些有意义的代谢物质进行研究。但是，在生物组织中，因含有大量的催化活性物质，离体组织的采集必需在冰冷条件下进行，并日需尽快完成测定。否则其所含物质的量和生物活性都将发生变化。一般采用断头法处
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定1
血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律，经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织，也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品，有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。一、血液样品(一）采血测