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ADC单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(二)

2.1.3 数据分析方法采用 Protein Deconvolution 2.0 软件对原始质谱图进行去卷积处理,得到完整的蛋白质分子量信息。 2.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点测定 2.2.1 仪器和试剂质谱仪器:Q-Exactive(赛默飞世尔科技,美国);色谱仪器:Accela 液相色谱系统(赛默飞世尔科技,美国);色谱柱:Thermo Scientific, C18, 100Å ,1.9 μm, 2.1×100 mm试剂:二次去离子水,色谱级乙腈,色谱级甲酸。 2.2.2 仪器方法色谱分析条件:具体见表 3; 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件流动相A:0.1% 甲酸水溶液;B:0.1% 甲酸乙腈溶液流速300 μL/min柱温35℃色谱梯度时间/minB相浓度/%054545355090529052.55605 质谱分析条件:具体见表 4;&nb......阅读全文

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(二)

2.1.3 数据分析方法采用 Protein Deconvolution 2.0 软件对原始质谱图进行去卷积处理,得到完整的蛋白质分子量信息。 2.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点测定 2.2.1 仪器和试剂质谱仪器:Q-Exactive(赛默飞世尔科技,美国);色谱仪器:Acce

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(四)

3.2 糖基化位点确定ADC 单抗蛋白与其他单抗蛋白相同,也都包含 N-糖基化修饰,一般发生在保守序列 NXS 或 NXT 中(X 为除脯氨酸外的任意氨基酸)。在糖链完整的情况下,直接进行 trypsin 酶解,我们在搜库时进行 G0F 糖基化可变修饰设定,可以直接获得该 N 糖基化位点:重

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(一)

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以及ADC 药物结合位点鉴定1. 前言单克隆抗体药物是具有高度特异性的靶向药物,能够特异性作用于肿瘤细胞,被誉为治疗恶性肿瘤的“生物导弹”。ADC 抗体药,则是在抗体蛋白的特定天然氨基酸上非定点偶联具有抗肿瘤作用的化疗药物(或称小分子药物),以增加

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(三)

经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子量分布图如下所示(图 4),根据单抗的氨基酸理论序列分子量进行计算,将观察到的质谱峰进行归属,从图中我们观察到,该 ADC 单抗分子之间存在 956 Da 左右的质量增加,由此推断该单抗分子结合了不同数目的

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定 二

质谱分析条件:具体见表 4; 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件表 4. 氨基酸序列测定的质谱分析条件 2.2.3 数据分析方法采用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索,具体搜库参数为:包含单抗氨基酸序列的数据库;半胱氨酸(C)烷基化(+57.021

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定 一

1. 前言单抗药物主要是由两条重链和两条轻链通过链内和链间二硫键以及非共价键组成,分子质量大约在 150 kD 左右,每条重链和轻链在 N 端都包含一个可变区域,在 C 端都包含一个恒定区域,并且在每条重链上还存在一个 N 糖基化位点,该位点含有不同的糖链结构,如图 1 所示。目前,在生

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定 三

经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子质量分布图(图 3),根据单抗的氨基酸序列理论分子质量进行计算,将观察到的质谱峰进行归属,可以初步推断该单抗药物存在多种形式的糖链结构,主要包括 G0、G0F、G1F 和 G2F,该结论与常见的单抗组成基本

质谱技术在抗体药物分析中的应用

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理,主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物,所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快

质谱技术在抗体药物分析中的应用

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理,主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物,所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快

序列标签位点的简介

任何DNA序列,只要知道它在基因组中的位置,都能被用作STS标签。作为基因组中的单拷贝序列,是新一代的遗传标记系统,其数目多,覆盖密度较大,达到平均每1kb一个STS或更密集。这种序列在染色体上只出现一次,其位置和碱基顺序都是已知的。在PCR反应中可以检测出STS来,STS适宜于作为人类基因组的一种