ADC单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(二)

2.1.3 数据分析方法采用 Protein Deconvolution 2.0 软件对原始质谱图进行去卷积处理,得到完整的蛋白质分子量信息。 2.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点测定 2.2.1 仪器和试剂质谱仪器:Q-Exactive(赛默飞世尔科技,美国);色谱仪器:Accela 液相色谱系统(赛默飞世尔科技,美国);色谱柱:Thermo Scientific, C18, 100Å ,1.9 μm, 2.1×100 mm试剂:二次去离子水,色谱级乙腈,色谱级甲酸。 2.2.2 仪器方法色谱分析条件:具体见表 3; 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件流动相A:0.1% 甲酸水溶液;B:0.1% 甲酸乙腈溶液流速300 μL/min柱温35℃色谱梯度时间/minB相浓度/%054545355090529052.55605 质谱分析条件:具体见表 4;&nb......阅读全文

ADC-单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(二)

2.1.3 数据分析方法采用 Protein Deconvolution 2.0 软件对原始质谱图进行去卷积处理,得到完整的蛋白质分子量信息。 2.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点测定 2.2.1 仪器和试剂质谱仪器:Q-Exactive(赛默飞世尔科技,美国);色谱仪器:Acce

ADC-单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(三)

经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子量分布图如下所示(图 4),根据单抗的氨基酸理论序列分子量进行计算,将观察到的质谱峰进行归属,从图中我们观察到,该 ADC 单抗分子之间存在 956 Da 左右的质量增加,由此推断该单抗分子结合了不同数目的

ADC-单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(四)

3.2 糖基化位点确定ADC 单抗蛋白与其他单抗蛋白相同,也都包含 N-糖基化修饰,一般发生在保守序列 NXS 或 NXT 中(X 为除脯氨酸外的任意氨基酸)。在糖链完整的情况下,直接进行 trypsin 酶解,我们在搜库时进行 G0F 糖基化可变修饰设定,可以直接获得该 N 糖基化位点:重

ADC-单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...(一)

ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以及ADC 药物结合位点鉴定1. 前言单克隆抗体药物是具有高度特异性的靶向药物,能够特异性作用于肿瘤细胞,被誉为治疗恶性肿瘤的“生物导弹”。ADC 抗体药,则是在抗体蛋白的特定天然氨基酸上非定点偶联具有抗肿瘤作用的化疗药物(或称小分子药物),以增加

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定-二

质谱分析条件:具体见表 4; 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件表 4. 氨基酸序列测定的质谱分析条件 2.2.3 数据分析方法采用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索,具体搜库参数为:包含单抗氨基酸序列的数据库;半胱氨酸(C)烷基化(+57.021

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定-一

1. 前言单抗药物主要是由两条重链和两条轻链通过链内和链间二硫键以及非共价键组成,分子质量大约在 150 kD 左右,每条重链和轻链在 N 端都包含一个可变区域,在 C 端都包含一个恒定区域,并且在每条重链上还存在一个 N 糖基化位点,该位点含有不同的糖链结构,如图 1 所示。目前,在生

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定-三

经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子质量分布图(图 3),根据单抗的氨基酸序列理论分子质量进行计算,将观察到的质谱峰进行归属,可以初步推断该单抗药物存在多种形式的糖链结构,主要包括 G0、G0F、G1F 和 G2F,该结论与常见的单抗组成基本

质谱技术在抗体药物分析中的应用

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理,主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物,所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快

质谱技术在抗体药物分析中的应用

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理,主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物,所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快

序列标签位点的简介

任何DNA序列,只要知道它在基因组中的位置,都能被用作STS标签。作为基因组中的单拷贝序列,是新一代的遗传标记系统,其数目多,覆盖密度较大,达到平均每1kb一个STS或更密集。这种序列在染色体上只出现一次,其位置和碱基顺序都是已知的。在PCR反应中可以检测出STS来,STS适宜于作为人类基因组的一种

序列标签位点的定义

序列标签位点(sequence-tagged site),是已知核苷酸序列的DNA片段,是基因组中任何单拷贝的短DNA序列,长度在100~500bp之间。

什么是序列标签位点?

序列标签位点(sequence-tagged site),是已知核苷酸序列的DNA片段,是基因组中任何单拷贝的短DNA序列,长度在100~500bp之间。

序列标签位点图的定义

中文名称序列标签位点图英文名称sequence tagged site map定  义标明序列标签位点在基因组上位置的物理图。应用学科遗传学(一级学科),基因组学(二级学科)

糖基化的概念和举例

指在糖基转移酶作用下,非糖生物分 子与糖共价结合的过程或反应。根据连接方式可将 糖基化分为D连接糖基化和Ⅳ-链糖基化。上市的重组单克隆抗体(单抗)药物除不含Fc段的 5个片段抗体为非 糖基化抗体外,其余全部为N-连接糖基化单抗,Fc 融合蛋白(如Etanercept等)还存在有连接糖基 化。N-糖基

关于糖基化的基本概念介绍

  指在糖基转移酶作用下,非糖生物分 子与糖共价结合的过程或反应。根据连接方式可将 糖基化分为D连接糖基化和Ⅳ-链糖基化。上市的重组单克隆抗体(单抗)药物除不含Fc段的 5个片段抗体为非 糖基化抗体外,其余全部为N-连接糖基化单抗,Fc 融合蛋白(如Etanercept等)还存在有连接糖基 化。N-

人用抗体偶联药物制品

  随着生物制药行业的不断发展及抗体类药物的持续创新,国内已经批准上市的ADC药物越来越多,新版药典更新人用抗体偶联药总论。ADC药物在主要利用公用靶点、偶联方式、偶连比、偶连的药物分子及Payload上都有更新。靶点,抗体,毒性分子,连接子的选择与表征成为药物是否成功的关键,检测与表征技术的不断完

单抗糖基化调控之参数篇(二)

  关键质量参数是单抗仿制药研发的标杆,包括糖基化修饰、聚体、电荷异质性等,其中如糖基化修饰对单抗的生物活性、免疫原性、药物代谢动力学、构象、稳定性及溶解度具有重要的影响。细胞培养过程中细胞所处环境,如pH、温度、渗透压、溶氧等参数会影响到单抗糖基化表现,本文从pH着手就文献中不同pH设置及调节pH

抗体偶联药物(ADC)浅析(二)

目前,ADC药物采用人源化单抗,对可结晶片段(Fc)进行修饰,以降低ADCC和CDC等。首先抗体分子作为生物大分子,存在一般生物大分子的毒性风险,如免疫原性和免疫毒性,以及单抗可能的ADCC作用、CDC作用、肾基底膜免疫复合物沉积等。其次,在ADC药物中,抗体分子最重要的作用是靶向作用,即将小分子化

解析糖基化修饰及位点分析

  经常听到糖基化修饰,今天带大家一探究竟。什么是糖基化修饰呢?糖基化是在糖基转移酶的控制下,蛋白质或脂质附加上糖类的过程,发生于内质网和高尔基体。糖基化修饰是一类非常重要的翻译后修饰,大部分膜蛋白和分泌蛋白均为糖蛋白,糖基化修饰不仅影响蛋白质的空间构象、活性、运输和定位,同时在信号转导、分子识别,

《自然·癌症》重磅综述:抗体靶向药物全攻略!

提问:对抗癌症的第一种精准靶向药物,属于哪一类药物呢?答案:1997年进入临床的利妥昔单抗。自此之后的二十多年里,凭借高特异性、高亲和力、长半衰期和强力杀伤等众多优势,基于单克隆抗体的靶向药物一个接一个问世,变革了许多癌症的治疗,用“丰功伟绩”来夸赞,似乎都略显苍白了。而且最近几年,基于抗体的靶向新

解析为何纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样

蛋白质作为生命活动中起重要作用的生物大分子,与一切揭开生命奥秘的重大研究课题都有密切的关系。蛋白质是人类和其他动物的主要食物成分,高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要标志之一。以下针对纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样作分析:客户问:用大肠杆菌表达纯化的蛋白,和人血清中这种蛋白的分子量不同,wester

液相色谱耦联Q-Exactive-台式轨道阱质谱仪分析利...(七)

  图 11. 将利妥昔抗体还原、烷基化、胰蛋白酶切后,酶切后肽段的基峰色谱图。  图 12. 利妥昔单抗轻链和重链的氨基酸序列。黑色字母显示的氨基酸代表通过二级质谱图鉴定到的部分。绿色显示的序列是仅通过完整肽段一级全扫描数据鉴定到的。红色显示的是重链部分的两个氨基酸(AK),他们既不能用一级也

关于白血病抑制因子的结构和基因介绍

  人和小鼠LIF基因分别定位于第22号和第11号染色体,基因长度分别人6.0kb和6.3kb,均含有3个外显子和2个内含子,基因编码区域具有高度的保守序列,其同源性在78~94%。LIF为180个氨基酸,核心蛋白分子量为20kDa,有7个糖基化位点,6个Cys,分子内部二硫键对于维持LIF分子的结

白血病抑制因子的分子结构和基因

人和小鼠LIF基因分别定位于第22号和第11号染色体,基因长度分别人6.0kb和6.3kb,均含有3个外显子和2个内含子,基因编码区域具有高度的保守序列,其同源性在78~94%。LIF为180个氨基酸,核心蛋白分子量为20kDa,有7个糖基化位点,6个Cys,分子内部二硫键对于维持LIF分子的结构和

白血病抑制因子的分子结构和基因

人和小鼠LIF基因分别定位于第22号和第11号染色体,基因长度分别人6.0kb和6.3kb,均含有3个外显子和2个内含子,基因编码区域具有高度的保守序列,其同源性在78~94%。LIF为180个氨基酸,核心蛋白分子量为20kDa,有7个糖基化位点,6个Cys,分子内部二硫键对于维持LIF分子的结构和

关于LIF的分子结构和基因的介绍

  人和小鼠LIF基因分别定位于第22号和第11号染色体,基因长度分别人6.0kb和6.3kb,均含有3个外显子和2个内含子,基因编码区域具有高度的保守序列,其同源性在78~94%。LIF为180个氨基酸,核心蛋白分子量为20kDa,有7个糖基化位点,6个Cys,分子内部二硫键对于维持LIF分子的结

LIF的分子结构和基因相关介绍

  人和小鼠LIF基因分别定位于第22号和第11号染色体,基因长度分别人6.0kb和6.3kb,均含有3个外显子和2个内含子,基因编码区域具有高度的保守序列,其同源性在78~94%。LIF为180个氨基酸,核心蛋白分子量为20kDa,有7个糖基化位点,6个Cys,分子内部二硫键对于维持LIF分子的结

上海交大朱建伟:自主创新是生物药物研发的根本道路

  生物类药物发展现状  自2000年以来,生物药物市场平均每年以10%以上的增长率发展,这一趋势将持续到2020年甚至到更长的时间。最近生物药物市场最畅销的前10种药物中,大概有7~8个是生物类药物,其中大部分是抗体药物。由此可知,生物类药物(抗体药物)主导了药物发展趋向。  从最近15年中国单抗

新一代抗体药物大盘点

  抗体药物已成为整个制药行业中发展最快的领域之一,目前,基于新一代技术平台,有70只产品正在进行临床开发。本文盘点了新一代抗体药物,包括ADC、工程抗体、多特异性抗体、非免疫球蛋白配体等。  新一代抗体药物盘点  目前,基于新一代技术平台,有70只产品正在进行临床开发,绝大多数都处于Ⅰ期研究中。肿

操纵MCU-SPI接口以访问非标准SPI-ADC(二)

图4.AD7768 FORMATx = 1×时序图,仅通过DOUT0输出。STM32F429微控制器SPI通过一条DOUT线读取AD7768代码如图4所示,当FORMATx = 11或10时,通道0至通道7仅通过DOUT0输出数据。在标准工作模式下,AD7768/AD7768-4作为主机工作