WB实战之抗体孵育
由于抗原和抗体特异性结合的效率是非特异性结合的数百万--数十亿倍，所以当特异性抗体与非特异性'抗体'（不好描述，指添加在抗体稀释液中的封闭蛋白，我们可以把它们看成非特异性的一抗）竞争时，尽管抗体稀释液中封闭蛋白的浓度是一抗浓度20K：1以上，在碰撞几率相同的条件下，由于时间的积累加孵育过程中反复漂洗（孵育抗体要摇晃，对吧），特异性一抗积累了识别、结合优势。 同样在TBST等漂洗的情况下，由于亲和力等原因，使得一抗很牢靠并进一步增加对比优势，再经过2抗特异性积累和ECL的最终放大形成特异性条带和非特异性背景之间荧光信号的巨大差异。 由以上碰撞结合、亲和力差异这些基本现象，我们可以解释WB中出现的现象。 1.在样品制备时， PBS漂洗目的时去除培养基中BSA。不漂洗的后果，是在BSA位置任何抗体都可以非特异性的结合从而显影。用碰撞的原理去解释：当杂带很浓的时候，抗体的特异性已经毫无意义，它只符合物理定律中的......阅读全文
wb二抗怎么融化
wb 二抗融化，wb 抗体用5%的脱脂奶粉或者1%的BSA （千分之一的TBST的溶液 )配置，可以先让抗体和奶粉或者BSA 蛋白非特异结合，这样就不会与PVDF 膜上的蛋白结合了。
wb二抗室温几小时
二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。
wb二抗室温几小时
二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或
二抗孵育时间
二抗孵育时间为1至2小时。参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温在摇床上缓慢摇动孵育1至2小时。回收二抗。二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例。一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景的深浅。要严格保证反应时间，
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗 二抗选择 二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗选择要考虑的问
做wb时，一抗和二抗浓度是怎么确定的
一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度（义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果），如果样品与厂家的不是一种细胞，可以尝试上下摸索一两个浓度梯度；二抗的用量，和你所在实验室常规的用量就可以，如果出现效果不理想的状态
做wb时，一抗和二抗浓度是怎么确定的
一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度（义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果），如果样品与厂家的不是一种细胞，可以尝试上下摸索一两个浓度梯度；二抗的用量，和你所在实验室常规的用量就可以，如果出现效果不理想的状态
western－blot－二抗时间要多久
37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
western－blot－二抗时间要多久
一般是室温下一个小时即可。也可适当长些时间！
western－blot－二抗时间要多久
37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
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37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
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37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
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37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
wb膜甲醇活化时间
不超过15秒。根据该物质简介可知，该物质的活化时间不超过15秒。pvdf膜在使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。pvdf膜具有较高的机械强度。
wb膜甲醇活化时间
不超过15秒。根据该物质简介可知，该物质的活化时间不超过15秒。pvdf膜在使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。pvdf膜具有较高的机械强度。
做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少
【1】抗体的说明上，都给出了一个范围，可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块，每一块用不同的一抗二抗浓度，这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的
做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少
【1】抗体的说明上，都给出了一个范围，可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块，每一块用不同的一抗二抗浓度，这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的
WB一抗用什么稀释
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下，可以溶解
WB一抗用什么稀释
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下，可以溶解
二抗孵育时间及注意事项
二抗孵育（Secondary antibody inucubation） 参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动
二抗孵育时间及注意事项
参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3
做WB需要多长时间
做WB如果从组织/细胞开始提取蛋白来计算，起码需要三个工作日。如果已有蛋白质样品，从做胶开始算，则为两个工作日。每张膜的样品数与所使用的跑胶系统有关，最常见的是10-15个上样孔的型号，一个孔放marker，剩下可以测n-1个样品。我用过最多的是25个孔。能够在一张膜上测几种不同蛋白，跟目标蛋白分子
一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
流式做简标抗体一抗，二抗分别孵多长时间
(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。(2)单
流式做简标抗体一抗，二抗分别孵多长时间
(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。(2)单