大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验
氨基酸类似物的掺入越来越有用。非天然氨基酸的定点掺入，使得运用化学生物学对特定蛋白质的研究和应用成为可能。但是，非天然氨基酸的整体掺入也检验着蛋白质组和基因编码假定。例如，有机体对非天然氨基酸的适应可能会导致新的基因编码。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料大肠杆菌菌株色氨酸类似物寡核苷酸引物试剂、试剂盒结合缓冲液清洗缓冲液洗脱缓冲液仪器、耗材Luria-Bartani 培养基Microcon 浓缩器实验步骤下述方法包括：( 1 ) 大肠杆菌在色氨酸类似物中的生长。( 2 ) 含 fW 取代氨基酸的蛋白质的表达和纯化。( 3 ) 对非天然氨基酸进行深入水平的分析。3.1 大肠杆菌在非天然氨基酸（培养基）上的生长色氨酸类似物掺入大肠杆菌是直截了当的。因为色氨酰转移 RNA 合成酶没有编辑结构域，天然氨基酸与类似物的区分只是在结构上。枯草杆菌色氨酰转移 RNA 合成酶可以相对更有效地结......阅读全文
大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验
大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入 实验材料 大肠杆菌菌株 色氨酸类似物 寡核苷酸引物
大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验
氨基酸类似物的掺入越来越有用。非天然氨基酸的定点掺入，使得运用化学生物学对特定蛋白质的研究和应用成为可能。但是，非天然氨基酸的整体掺入也检验着蛋白质组和基因编码假定。例如，有机体对非天然氨基酸的适应可能会导致新的基因编码。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实
大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验
实验材料 大肠杆菌菌株色氨酸类似物寡核苷酸引物试剂、试剂盒 结合缓冲液清洗缓冲液洗脱缓冲液仪器、耗材 Luria-Bartani 培养基Microcon 浓缩器实验步骤 下述方法包括：( 1 ) 大肠杆菌在色氨酸类似物中的生长。( 2 ) 含 fW 取代氨基酸的蛋白质的表达和纯化。( 3 ) 对非天
氨基酸代谢标记实验_辅助方案 TCA沉淀测定标记掺入量
实验材料被标记的细胞悬液（见基本方案或备择方案 1～4）试剂、试剂盒0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN310%TCA 溶液冷冻乙醇仪器、耗材连接真空管道的滤过装置2.5 cm 玻璃微纤维滤膜（Whatman GF／C）实验步骤1. 加 10～20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1
氨基酸分析仪检测牛乳中掺入的大豆蛋白
方案优势 别利用近红外光谱法、高 效液相色谱法以及聚合酶链式反应等结合化学测定方法或质谱法可以定性定量检测牛乳中的大豆蛋白，但是检测成本较高。本实验使用氨基酸分析仪，利用牛乳和大豆蛋白质的氨基酸组成含量差异对牛乳中掺入的大豆蛋白进行定性定量检测，弥补了现有方法耗时长检测不灵敏的不足
蛋白中放射性物质掺入率测定实验
三氯乙酸沉淀法 实验方法原理 实验材料
以3H-TdR 掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平 实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中） 3H-TdR ，0.4 MBq /ml (
以3H-TdR 掺入测定DNA合成实验
实验方法原理用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中） 3H-TdR ，0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)
蛋白中放射性物质掺入率测定实验
实验方法原理 实验材料 样品试剂、试剂盒 预冷三氯乙酸乙醇乙醚仪器、耗材 Whatman GF-C玻璃纤维膜多功能真空仪（Fisher)20 ml 闪烁瓶闪烁计数器实验步骤 1. 加入 20 μl 预冷的 10% TCA 停止反应，充分混匀，冰浴 10 min 以沉淀蛋白质。2. 将样品点在真空仪中
以3H-TdR 掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料无菌处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中）3H-TdR ，0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)，每毫升