蛋白分离的缓冲液系统(LaemmlibuffersystemLaemmli)比较1
解离/非解离native缓冲液系统 很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）,一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量的SDS和巯基试剂的蛋白质样品，100℃加热时，二硫键被打开，蛋白质完全解离成它的亚单位。在这些情况下，大部分的多肽以一个恒定的重量比率（1.4g SDS:1g多肽）结合多肽。与去污剂所提供的负电荷相比较，多肽固有的电荷变得微不足到。因而，根据多肽的大小，相同大小的SDS-多肽复合物基本上具有相同的负电荷、形状和凝胶中的迁移率。这种方法简洁而快速，加之只需要微克量蛋白这一事实，使SDS-PAGE成为最广泛使用的，用来确定多肽样品分子量的方法。由于几乎任何来源的蛋白质很容易被SDS溶解，所以这种方法通常都可以适用。 ......阅读全文
蛋白分离的缓冲液系统(Laemmli－buffer－system－Laemmli)比较1
解离/非解离native缓冲液系统 很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）,一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在
蛋白分离的缓冲液系统(Laemmli－buffer－system－Laemmli)比较2
堆积和pH值在SDS PAGE系统的相对的重要性 我们经常被问到，是否Novex®预制胶有浓缩胶，如果有，pH是多少。答案是肯定的，有浓缩胶（Novex®，Tris-glycine，和Trince胶)，但是浓缩胶和分离胶之间的pH值相同。 pH值的变化依赖于胶的成分。请参看每一个产品以确定pH值
蛋白分离的缓冲液系统比较
解离/非解离native缓冲液系统很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）,一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量
Protein－concentration－of－Laemmli－gel－samples
Protein concentration of Laemmli gel samplesTo 10 µl boiled lysate (in Laemmli sample buffer) add 40µl water + 50µl 50% TCA. Ppt. 10 min. on ice. Spin
蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——用Tris缓冲液分离多肽
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDSTris·Cl仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤1~4，配制并灌制分离胶。2. 参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤5~7，配制并灌制积层胶，但在移去分离胶顶层覆盖的异丁醇 时，以2×Tris·Cl/SDS，pH8.8而不用1
蛋白质单向SDS凝胶电泳实验——连续SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物，研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等，还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，凝胶的孔径，蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS磷酸仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 按“Laemm
于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验
实验方法原理 去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液中应除去二硫苏糖醇，并建议使用非还原/无脲的凝胶实验材
用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂
基本方案 实验方法原理 去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种
用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验
实验方法原理去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液中应除去二硫苏糖醇，并建议使用非还原/无脲的凝胶实验材料
蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——Laemmli凝胶电泳法
电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物，研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等，还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，凝胶的孔径，蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris·ClSDS仪器、耗材电泳仪离心机真空泵实验步骤1.
肽类的电泳－(TricineSDSPAGE)－实验
实验方法原理在定量分析蛋白质混合物方面，最广泛采用的蛋白质组学方法就是 SDS-PAGE。因为它根据蛋白质的大小不同分离蛋白，所以对于检测蛋白纯度特别有用，同时也应用于蛋白质相对分子质量（Mr) 的测定。影响到 SDS-PAGE 蛋白分离效果的因素有：①丙烯酰胺与交联剂（双丙烯酰胺）的比例；②用于制
细菌中重组蛋白的大量提取实验
实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French加压罐高压剪切细胞和溶菌酶处理。这些方法适用于从各种革兰阴性菌和革兰阳性菌中制备蛋白提取物。通常是使用酶的方法破坏细胞，因为细胞在悬浮液中能获得相对均一的处理
细菌中重组蛋白的大量提取实验
基本方案 实验方法原理 利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French加压
细菌中重组蛋白的大量提取实验
实验方法原理 利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French加压罐高压剪切细胞和溶菌酶处理。这些方法适用于从各种革兰阴性菌和革兰阳性菌中制备蛋白提取物。通常是使用酶的方法破坏细胞，因为细胞在悬浮液中能获得相对均一的处
磷酸缓冲液（phosphate－buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解14
凝胶选择指导
Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶，包括不同的成分，百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度，缓冲系统，上样孔格式以及胶的厚度，对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。E-PAGE™ 96 High-Throughput System是整合的
聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide－gel)选择指导
Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶，包括不同的成分，百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度，缓冲系统，上样孔格式以及胶的厚度，对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。E-PAGE™ 96 High-Throughput System是整合的
Western－Blot样品制备注意事项及步骤
Western Blot样品制备是这个实验的第一步。而且是关键步骤，要求尽可能的获得所有蛋白质。所以我们在做wtstern blot实验应注意以下问题：1：在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。2：选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成
AKTA快速蛋白分离系统和HPLC－的优劣比较
HPLC 优点：高压 速度快 分析精度高 所需样本量少，主要用于分析 纯化多肽类缺点：柱子较贵 有些需要用乙氰甲醇等有毒有害试剂 不能或只能纯化 很小量的蛋白AKTA 系统 优点： 中低压 容易放大 可大规模纯化蛋白类 常规只用无机盐类试剂 可配备各种介质纯化不同蛋白 可自己灌胶 费用较少缺点：分析
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDSPAGE－...（一）
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 实验试剂、试剂盒 分离缓冲液增溶缓冲液洗脱缓冲液Laemmli 样品缓冲液胶段冲洗缓冲液酶解缓冲液肽抽提缓冲液实验步骤 3.1 膜的分离因为在研磨材料时，要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋白质混合在
细胞和亚细胞提取物的制备实验3
方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验实验方法原理去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液
Immunoprecipitation
实验概要In the IP method, the protein from the cell or tissue homogenate is precipitated in an appropriate lysis buffer by means of an immune complex
Bacic－Immunoprecipitation
实验概要 Immunoprecipitation (IP) is one of the most widely used immunochemical techniques. Immunoprecipitation followed by SDS-PAGE and immunoblot
细胞凋亡－WB－没成功，你是不是用了－RIPA？
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程，通常表现为核浓缩，起皱，膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一，但是 WB 也不是谁都能做成功的，因为有可能你的第一步就做错了！用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步，样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备
反转录病毒原液检测实验——在TrisTricine缓冲系统中电泳
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tricine样品缓冲液考马斯亮蓝染色液乙酸仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7，配制溶液并灌制分离胶和积层胶。 2. 制备样品，但采用2×Tricine的样品缓冲液，加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合
Tris缓冲液（TrisHCl－buffer）的配制
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2
蛋白纯化的binding－buffer－和elution－buffer能用多久
蛋白纯化的bindingbuffer和elutionbuffer一般是现配现用的，因为bindingbuffer和elutionbuffer一般都是浓度比较低的溶液，长时间放置容易长菌污染，可以配置成高浓度的母液，在使用时稀释就可以了。
Native－gel－electrophoresis（非变性电泳）
Native gel electrophoresis Under native PAGE conditions, polypeptides retain their higher-order structure and often retain enzymatic activity and inte
免疫复合物的纯化
实验概要本实验介绍了免疫复合物纯化的基本操作步骤。主要试剂裂解缓冲液抗体蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％叠氮钠裂解缓冲液配成10％(V／V)的混悬液，4℃保存)不含DTT的Laemmli样品缓冲液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚蓝)1mol／LDTT(
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDSPAGE－和－MALDI...
试剂、试剂盒：分离缓冲液 增溶缓冲液 洗