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前剪接体和剪接体的分离及分析实验

实验方法原理 剪接体是由 RNA 和蛋白质构成的核糖核蛋白体(RNP),它在前体 mRNA 的剪接过程中可去除前体 mRNA 的内含子。snRNP 是由 snRNA 及其结合蛋白组成,在前体 mRNA 的剪接过程起着重要作用。 实验材料 PIP 10 载体 核苷酸 焦磷酸酶 RNasin T7 RNA 聚合酶 mRNA 试剂、试剂盒 转录缓冲液 高盐缓冲液 NaAc 乙醇 ......阅读全文

酵母剪接体分析实验

前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体,它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成,每一种 snRNP 由一个 snRNA 和几种蛋白质构成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋

酵母剪接体分析实验

            实验方法原理 前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体,它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成,每一种 snRNP 由一个 snRNA 和

年终盘点:2016年国内不容错过的重磅生物研究

  时间总是过得很快,2016年马上就要过去了,迎接我们的将是崭新的2017年,2016年,我国有很多优秀科研机构的科学家们都做出了意义重大、影响深远的研究成果,发表在国际顶级期刊上。本文中小编盘点了2016年我国科学家发表的一些重磅级研究,以饕读者。   --结构生物学 --  1.清华大学 施一

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

酵母前体mRNA剪接提取物实验

真核生物前体 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分为两步,即先从前体切去内含子,然后将两个外显子连接在一起形成成熟的  mRNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组

U系列小核糖核蛋白颗粒的纯化实验

剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒(snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理剪接体 ( splicc

酵母前体mRNA剪接提取物实验

            实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体

2019年中国学者86篇Cell,Nature及Science文章汇总

  2019年上半年很快就结束了,iNature盘点了中国学者在Cell,Nature及Science发表的成果,我们发现总共有86篇(截至2019年6月24日),具体介绍如下:  4-6月发表的文章  【1】2019年6月21日,西北工业大学王文,中科院昆明动物研究所/BGI 张国捷及丹麦哥本哈根

空间蛋白质组学:一种强大的细胞生物学发现工具

真核细胞高度区室化,生物过程被分隔在不同的区室进行。蛋白质功能与亚细胞定位密切相关,不同的区室提供不同的化学环境(例如pH和氧化还原条件)、不同的潜在作用配体或底物。因此,对蛋白质亚细胞定位的严格控制是细胞生理学的重要调控内容。大多数细胞生物学过程涉及蛋白质亚细胞定位的变化,例如转录因子在细胞核-胞

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

盘点:Nature杂志5月亮点研究速览

  【1】合成生物学:一个用来控制转基因生物的内置毁灭开关  Nature Communications DOI:10.1038/ncomms7989  Nature Communications在线发表的一篇论文介绍了一个基于CRISPR的内置器件,它设计用来专门破坏转基因生物的特定DNA序列。控

2016年度中国科学十大进展发布!

  钴/氧化钴杂化二维超薄结构电催化还原CO2为液体燃料01  1、研制出将二氧化碳高效清洁转化为液体燃料的新型钴基电催化剂  将二氧化碳在常温常压下电还原为碳氢燃料,是一种潜在的替代化石原料的清洁能源策略,并有助于降低二氧化碳排放对气候造成的不利影响。实现二氧化碳电催化还原的关键瓶颈问题是将二氧化

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

中科院多项成果入选2016年中国科学十大进展

   2月20日,科学技术部基础研究司与高技术研究发展中心联合召开“2016年度中国科学十大进展解读会”,发布了2016年度中国科学十大进展。中国科学院相关单位独立或合作取得的7项重大科学成果入选,包括:研制出将二氧化碳高效清洁转化为液体燃料的新型钴基电催化剂;开创煤制烯烃新捷径;揭示水稻产量性状杂

U系列小核糖核蛋白颗粒的纯化实验

            实验方法原理 剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒

哺乳动物细胞体外剪接分析实验

剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S10

哺乳动物细胞体外剪接分析实验

            实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体

纯化剪接因子SR蛋白实验

前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR(serine/argininc rich,富含丝/苏氨酸)蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子,该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑

2012国家自然科学基金评审结果名单之复旦大学(生物类)

  来自国家自然科学基金委员会的消息,国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录

酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用

摘要  蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新兴的研究领域, 它的主要任务是识别鉴定细胞、组织或机体的全部蛋白质, 并分析蛋白质的功能及其模式。 因此, 揭示蛋白质组中蛋白质间的相互作用关系也是蛋白质组学的重要内容之一。 酵母双杂交技术是用来检测蛋白质间是否相互作用的一

酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用

     作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相

包涵体的纯化-2

1.2.7重组融合蛋白的纯化 PrP-pET-32a(+)转化表达菌E.coli BL21(DE3),TB培养基中,25℃,AMP 200 ug/ml,摇床(250 r/min)培养至OD600约为1.5,更换等体积新鲜TB培养基,加入IPTG至终浓度1 mM,AMP 200 ug/ml,

常用的分子生物学基本技术1

DNA重组技术(或基因工程)是20世纪生物学的伟大成就,并已渗透到生命科学包括医学 各个领域,为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用,着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分

纯化剪接因子SR蛋白实验

            实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR(serine/argininc rich,富含丝/苏氨酸)蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要

包涵体的纯化和复性总结-2

8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性,一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始,到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言,可以从4M开始,到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定,这些需要你在实验过程中不断试验,确定合适的缓冲系统;不过复性过程主要

RNA-蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验

寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物(RNP,核糖核蛋白颗粒)的方法,无论是对于粗提物还是提纯后的样品,对分析 RNP 的结构域的结构都非常有效。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合

RNA-蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验

            实验方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物(RNP,核糖核蛋白颗粒)的方法,无论是对于粗提物还是提纯后的样品,对分析 RNP 的结构域的结构都非

汇全国显微学精英 2018全国电子显微学学术年会在蜀开幕

  分析测试百科网讯 2018年10月24日,2018年全国电子显微学学术年会在四川成都隆重举行,本次大会共有千余位专家学者以及200余位厂商代表参与。本次年会旨在了解电子显微学及相关仪器技术的前沿发展,交流基础研究与应用研究新进展。分析测试百科网与中国电子显微镜学会将共同全程跟踪报导本次年会的盛况

包涵体的纯化-4

9、什么叫复性成功 复性效果的检测: 根据具体的蛋白性质和需要,可以从生化、免疫、物理性质等方面对蛋白质的复性效率进行检测。 1,凝胶电泳:一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的蛋白质,或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对