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植物基因转化常用方法4

1.2 其它的基因附加工程在水稻、棉花、马铃薯、番茄和其它作物上也进行了δ-内毒素工程,获得昆虫抗性也不仅仅是指有着一种方法。蛋白酶抑制剂也是较好的选择,它可以一只昆虫肠道内的蛋白酶活性,阻止或减缓害虫生长,许多植物能产生蛋白酶抑制剂,如豇豆和common bean, 他们的基因已经被成功的转移到其他植物中,但一般蛋白的表达量比较低。这种抑制剂对甲虫的效果非常明显,所以对需要长期贮存的种子作物是一种很好的选择。 2、基因扣除基因扣除这一词语不是很恰当,因为并不去除基因,只是让基因失活。有许多方法可以使基因失活,最成功的是反义技术。我们将以延长货架期的工程番茄为例进行说明。2.1 反义技术的原理在一个反义实验中,克隆的基因是反向的连接到载体中,这意味着当克隆的基因转录成mRNA后,与正常的mRNA是反向互补的。我们称这种反向互补为反义RNA,有时缩写为asRNA。一......阅读全文

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

说说转基因植物“那点事儿”

设想,你要把一台机器,从生产厂里运输到需要这台机器的工厂里,并让它顺利工作,要通过几个步骤呢?首先呢,我们要先把这台机器生产出来,然后打包,装到汽车上并运输到目的工厂内,安装机器,最后经过一系列调试,才能让工厂使用这台新机器进行新产品的生产。和这一过程相似,生产转基因植物,也需要上面一系列步骤。在一

基因敲除的原理与方法

基因敲除可以说是基因组 学、细胞分离培养以及转基因技术的组合。那么基因敲除的原理是什么呢? 基因敲除的方法有哪些呢?在此,做个小结,以供大家学习。一.概述:基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子 生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用D

用化学常识解释转基因

  河南日报退休高级编辑,大河健康报退休总编,河南农大兼职教授,中国新闻奖获得者。  各位女士、各位先生:  大家好。大家都是经常来图书馆借书、看书的读者,如今喜欢看书的人真是难能可贵。看年龄,大家多数是60后、50后,少数是70后、40后。大家可能都不是生物专业的大学生,但是大家在中学阶段都学过化

遗传修饰(转基因)风险评估(二)

3. 慎重向环境释放未经事先批准的转基因植物是不能够释放到环境中去的。在欧洲,2001/18 号欧盟指令( 见注 7 ) 专门规定了慎重向环境中释放转基因植物。该指令涵盖了两种类型的环境释放: 实验释放 ( B 部分)和投放市场的商业释放( C 部分)( 见注 8) 。对于每个授权的 B 释

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

基因插入位点和模式实验

实验材料dCTP                                        

基因插入位点和模式实验

实验材料dCTP试剂、试剂盒乙醇次氯酸钠β-葡萄糖醛酸酶基因活性测定液溴化乙锭仪器、耗材培养室MS 培养基实验步骤一、转基因插入位点的数目第一代( T0)转基因植株外源基因的插入位点数目,一般都是通过遗传方法进行鉴定。虽然遗传分析可以在任何世代进行,但是一般选择转基因植株自交,或与野生型测交后得到的

转基因作物田间试验的设计与管理实验

实验材料:转基因株系    实验步骤:3.1 释放试验的地理位置要求释放地点应是宜于种植该作物的一个隔离区,其动植物区系与周围农田没有差别,而且没有稀有或受保护的植物或动物物种,也必须确保释放地点较远的区域没有政府机构认定的群落生境或保护区。试验区要求地势平坦,既要能减少基因逃逸

转基因作物田间试验的设计与管理实验

实验材料转基因株系实验步骤3.1 释放试验的地理位置要求释放地点应是宜于种植该作物的一个隔离区,其动植物区系与周围农田没有差别,而且没有稀有或受保护的植物或动物物种,也必须确保释放地点较远的区域没有政府机构认定的群落生境或保护区。试验区要求地势平坦,既要能减少基因逃逸的危险,又要便于耕作,使试验尽可

实质等同性(转录组学)实验2

3.9 芯片数据介绍对简单的实质等同性实验来说,一个比较转基因系与对照之间基因表达的散点图就已足够了。文献 [ 5 ] 中参与两个实验的样品都标注在图15. 2中。结果用 GeneSpring 软件包显示,绘制了每组比较小麦系之间每个基因成对的平均强度,并突出显示少数感兴趣的基因(统计上显著差异表达

植物组织RNA提取的难点及对策

植物组织RNA提取的难点及对策  从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究

植物组织RNA提取的要点与技巧

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA 。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看

RAPD技术应用中的一些问题及对策

摘要:综述了RAPD技术的一些理论性问题,包括RAPD与其它分子标记技术相比的优点,影响结果重复性的因素,显性标记产生的原因,条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法:严格控制反应条件,采用单倍体和单剂量标记,系统学研究中要结合其它方法进行分析,定位基因时要选用合适的群体等。 

有关TILLING技术介绍及相关的文献下载

TILLING 技术是于上个世纪 90年代末期,美国 Fred Hutchinson癌症研究中心基础科学研究所的 Steven Henikoff领导的研究小组发展起来的( 1)。目前, TILLING技术作为种研究方法已经应用于多种生物中,如拟南芥、玉米、水稻、百脉根、小鼠、斑马鱼、果蝇、线虫等。对

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

作物氮素诊断技术的研究综述

氮素是对作物生长发育、产量品质形成影响最为显著的营养元素。作物体内的全氮含量约为干重的0.3%-5.0%氮素参与叶绿素的 组成,不仅是蛋白质的主要组成成分,也是核酸和植物体内许多酶的重要组成成分。此外,植物体内一些维生素、某些生物碱以及部分植物激素如生长素、细胞分裂 素均含有氮素。在生产中,缺氮时,

2020版药典大纲出来了,一起来目睹

   一、前言   《中国药典》2020 年版的编制,正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间,是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期,也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动,编制好新 版《中国药典》,对于保障公众用药安全有效,推进

2020版药典大纲出来了,一起来目睹

  一、前言  《中国药典》2020 年版的编制,正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间,是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期,也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动,编制好新 版《中国药典》,对于保障公众用药安全有效,推进医药

微生物细胞、植物细胞与动物细胞在培养上的主要区别

微生物细胞培养,简称微生物培养,包括原核细胞培养(细菌培养)和真核细胞培养(霉菌培养和酵母培养)。这些细胞小、且具有细胞壁,细胞周期非常短,如细菌每20-30min增殖1次。植物细胞培养指原生质体培养。未考虑分离出原生质体的植物细胞培养,无论是游离的单细胞或组织块,都称作植物组织培养。动物组织细胞培

转基因植物的分子检测与鉴定方法(二)

1.1.2.2  降落PCRTD-PCR是一种在一个反应管或少数几个反应管中通过一系列退火温度逐渐降低的反应循环来达到最佳扩增目的基因的PCR方案。它通过体系自身的代偿功能弥补以反应体系和并非完美的循环参数所造成的不足。此策略保证了最初形成的引物模板杂交体具最强的特异性。尽管最后一些循环采

植物原生质体融合的原理及进展

  摘要  本文对植物的原生质体融合技术得研究进展进行了综述。阐述原生质体制备、培养方面的研究进展,随后介绍了原生质体融合方法、融合机理和融合方式等的研究进展,最后对其今后的应用前景进行了展望,为原生质体融合技术的发展提供了参考。  关键词  原生质体 融合技术 研究进展  01  —  原生质体制

植物原生质体融合技术的研究进展

  01  —  原生质体制备  1.材料的选择及预处理  许多研究表明,在原生质体分离之前,先对植物材料进行预处理能够有效提高原生质体的游离效率,在同等材料用量下可以分离出较多的原生质体。柳玉晶等[1]的研究表明,在分离百合叶片原生质体前对其进行13%甘露醇预处理和黑暗处理能显著提高原生质体产量。

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体

原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来,基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行,在技术方法上得到了很大发展,时至今

土壤重金属污染现状与修复技术研究进展

土壤是人类赖以生存的主要自然资源之一,也是人类生态环境的重要组成部分。随着工业、城市污染的加剧和农用化学物质种类、数量的增加,土壤重金属污染日益严重,目前,全世界平均每年排放Hg约1.5万吨,Cu 340万吨,Pb 500万吨,Mn 1500万吨,Ni 100万吨。据我国农业部进行的全国污灌区调查,

植物愈伤组织培养以及再分化

实验概要了解培养基母液的配制方法和注意事项;掌握培养基的配制和灭菌方法,掌握植物组织培养的一般方法实验原理(一)植物细胞的全能性  植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。这个概念虽然在本世纪初已经

原生质体的培养

原生质体(Protoplast):指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞。一、原生质体的应用 由于没有细胞壁,原生质体为作物遗传改良和植物学研究提供了极为有利的试验材料。原生质体可以用于下面几种研究。1.  用作细胞杂交服务于作物改良2.  用作遗传转化的对象3.  研

基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)

一、受体细胞 :受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达,特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系,即原核表达载体适合原核细胞,真核载体则适合真核细胞,而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒,也应注意选择合适的菌种。例如,当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时,由于T7

玫瑰组织培养研究进展

[摘 要]玫瑰组培苗已投入大规模生产中,已取得显著经济效益。本文对玫瑰的组织培养进行了较为全面的综述。目前,玫瑰采用根、茎、叶片、叶柄、茎尖、原生质体、合子胚、花药、花萼、花托、腋芽进行组织培养取得成功;主要采用MS培养基,添加低浓度的激素BAP03~05mg/L,NAA0004~03mg/L或NA