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神经干细胞的培育流程!!

一、 神经干细胞的定向诱导分解将一部分次代神经球机械别离制成单细胞悬液后别离参与条件培育液和有血清培育基(含10%胎牛血清的DMEM/F12)中对照贴壁培育,7d后均行ChAT免疫细胞化学染色。二、BrdU符号将BrdU溶于无血清培育基,过滤除菌后参与神经球构成后再次机械别离克隆制作的单细胞悬液中(BrdU终浓度为5μmol/L),培育7d待新的神经球构成后,将神经球转移到预先涂布有多聚赖氨酸的培育板中,贴壁2h行BrdU免疫细胞化学染色。三、 神经干细胞的诱导分解选取部分上述传代后构成的次代神经球培育于预先涂布有多聚赖氨酸的24孔培育板中,并参与有血清培育基(含10%胎牛血清的DMEM/F12),一部分神经球于贴壁2h后行Nestin免疫细胞化学染色,另一部分神经球继续培育,调查其生长分解情况。另将一部分次代神经球机械别离制成单细胞悬液后参与有血清培育基贴壁培育,7d后别离行Tuj1 、GFAP 、Ga......阅读全文

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

流式细胞术在血液学中的应用

  DNA倍体分析及细胞周期分析    在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成,但DNA含量仍为2N,为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)

为规范和指导按照药品研发及注册的细胞治疗产品的研究与评价工作,国家食品药品监督管理总局组织制定了《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》(见附件),现予发布。特此通告。食品药品监管总局2017年12月18日细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)一、前言近年来,随着干细胞治疗、免疫细胞治疗和

NK细胞介导的细胞溶解作用的研究

前言自然杀伤细胞(Nature Killer Cells, NK)是骨髓衍化的淋巴细胞,其最初通过巨大的颗粒性状被识别。NK细胞能自发杀灭多种肿瘤细胞,同时还可保护正常的细胞,从而被认为是癌症的克星。最重要的是,不管是在胞内还是胞外,NK细胞不需要免疫接种或提前激活,就能够自发溶解特定的肿瘤靶细胞,

单克隆抗体的制备(三)

3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°C无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得

全面解读细胞培养基!

细胞培养基(cell culture medium)是人工模拟动物细胞的体内生长环境,维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础,其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压,以及细胞本身不能合成的各种营养物质。本文将对细胞培养基的种类、成分及理化性质,以及相关问题等方面进行介绍。1. 细胞培养基的种类按照细

免疫学知识提纲(六)

第三篇 免疫器官与免疫细胞中枢免疫器官,由骨髓及胸腺组成,多能造血干细胞在这些部位发育成熟为免疫细胞,即执行生成免疫细胞的功能;外周淋巴器官,由淋巴结、脾脏及扁桃腺组成,成熟免疫细胞在这些部位执行应答功能。单核细胞和淋巴细胞经血液循环及淋巴循环,进出外周淋巴组织及淋巴器官,构成免疫系统的完整网络。&

检测细胞凋亡的实验方法比较

  ◆ TUNEL 与 ELISA 检测凋亡的方法比较  TUNEL法  细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'

动物细胞大规模培养技术 (二)

第三节 大规模培养技术的操作方式深层培养可分为:分批式、流加式、半连续式、连续式、连续式和灌注式五种。一、分批式培养(batch culture) 是细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式,也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器,将细胞扩大培养后,一次性转入生物反应器内进行培养,在培

检测细胞凋亡的实验方法比较

◆ TUNEL 与 ELISA 检测凋亡的方法比较TUNEL法   细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3

深度完整版:CAR-T的现状和未来

  CAR-T(T细胞嵌合抗原受体)作为一种免疫细胞治疗方案,在全球范围内吸引了包括学者、医生、患者、投资人的大量关注。然而CAR-T具体是什么,它的背后有什么样的故事、目前的研究状况如何,未来又将走向何方呢?  CAR-T带来的新曙光  自古以来,人们不断地与癌症进行斗争。科学家们考古发现的木乃伊

流式细胞技术基本原理应用和发展趋势

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成

养细胞的细胞生物学

一、体内、外细胞的差异和分化1、差异:细胞离体后,失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响,生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中,日久天长,易发生如下变化:分化现象减弱;形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡;或发生转化获得不死性,变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此,培养中的细胞可视为一种

细胞培养的基本方法(二)

第四节 细胞计数及活力测定一、原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分

原代细胞的培养与建系-3

下面为美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)入库细胞的基本要求:   (1)培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态,细胞已传代数等。   (2)冻存液 培养基和保护剂名称。 &

癌症免疫细胞治疗知识:CAR-T与TCR-T的区别在哪里?

  肿瘤免疫治疗,实际上分为两大类。一种把肿瘤的特征“告诉”免疫细胞,让它们去定位,并造成杀伤;另一种是解除肿瘤对免疫的耐受/屏蔽作用,让免疫细胞重新认识肿瘤细胞,对肿瘤产生攻击(一般来说,肿瘤细胞会巧妙伪装,逃脱免疫的监视)。  第一种情况,因为要利用机体自身的免疫细胞,因此,目前多为免疫细胞治疗

exFoxp3 Th17细胞对自身免疫关节炎的作用机制研究

  “我是谁?我从哪里来?我要到哪里去?” 是柏拉图提出的经典哲学三大问,小编每天早上起床前都要用这个问题叫醒我沉睡的灵魂。在本期带来的经典文献回顾中,请跟随本文作者一起听一听ex Foxp3 TH17细胞的深刻哲学独白吧!   一、故事背景   自身免疫性疾病通常由调节性T细胞(Treg细胞)

检测细胞凋亡的实验方法比较-2

二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面(细胞膜)的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围,又可分为细胞群休和单个细胞测定两种,以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞

你一定不知道T细胞的这些最新功能!

  T细胞作为免疫系统中的重要组分和效应细胞,在抵抗细菌病毒等外来病原体和杀伤癌细胞等方面扮演着不可或缺的重要角色。因此本文为大家带来近期关于T细胞的最新研究进展,与大家一些学习进步!  【1】Nat Immunol:在慢性病毒感染期间,杀伤性T细胞引发恶病质产生  DOI:10.1038/s415

肿瘤细胞培养

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正

微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验

实验步骤 一、材料 1. 胞质分裂阻滞微核试验 2. 微核的着丝点检测 (1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。 (2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 过氧化物酶

脱落细胞检查(二)

  (四)常见癌细胞类型形态特征  1.鳞癌  鳞状上皮细胞癌变称为鳞状上皮细胞癌简称鳞癌。根据细胞分化程度,可分为高分化鳞癌和低分化鳞癌。  (1)高分化鳞癌:癌细胞分化程度较高,以表层细胞为主。癌细胞的多形性和癌珠是高分化鳞癌的标志。  (2)低分化鳞癌:癌细胞分化程度较低,以中、底层细胞为主。

Nauter子刊:个月增长87%、375项临床研究、753种癌症细胞疗法!

   细胞免疫疗法是癌症治疗的最新领域,在其中诞生PD-1免疫检查点抑制剂以及CAR-T疗法都在癌症治疗上取得了重大的突破。通过采集外周血中的免疫细胞进行分离体外培养,再进行基因工程修饰之后再回输到体内的过继性细胞免疫疗法在血液瘤方面的治疗效果显著。  2016年,以CAR-T免疫细胞治疗为代表的细

李汉杰博士等开发新型测序技术及揭示肿瘤T细胞的转录

  肿瘤组织中免疫细胞的组成在免疫治疗中起关键作用,然而人类肿瘤组织中免疫细胞的异质性和分化途径还有待研究。李汉杰博士等通过对25名黑色素瘤患者肿瘤中免疫细胞的单细胞转录组测序和单细胞TCR测序分析,发现大量的CD8 T细胞的转录组呈连续性梯度分布,跨越了从“过渡态”到“功能失调状态”的分化途径。相

【综述】脂肪组织巨噬细胞:免疫治疗肥胖的新靶点?

  一、引言  巨噬细胞广泛分布于人体多个组织器官,它能识别外来病原体,在固有免疫、炎症反应中发挥重要作用。1993年Hotamisligil等发现肥胖动物模型脂肪组织的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌增加,首次将肥胖与炎症相联系,直到2003年Xu

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术

1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。  制备单克隆抗体包括动物免疫

组织学研究方法

(一)一般光学显微镜术应用一般光学显微镜(简称光镜)观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块,先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的蛋白质迅速凝固,防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等,一般常将几种固定剂配制成混

热休克蛋白HSP对细胞凋亡的调节作用

  细胞凋亡是生物发育过程中或在正常生理状态下清除衰老及受损细胞的一种普遍现象。细胞凋亡的发生受胞外或胞内的多种刺激源所诱导,其中热休克蛋白(热激蛋白)是细胞凋亡的调控因子之一。细胞是通过调节自身的防御系统来适应环境胁迫,并且根据胁迫程度的强弱,利用自身遗传机制或调控自身状态抵抗胁迫,或主动诱发细胞