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细胞组分的分析方法

实验概要本文介绍了细胞组分分析方法的原理及操作流程等。实验原理核酸分子杂交技术是目前分子生生物学、细胞生物学和生物化学研究中应用最广泛的技术之一,是定性、定量和定位检测两条来源不同的聚核苷酸链上碱基顺序同源性的一种手段。DNA分子是高度有序的双键分子。一条链的碱基与另一条链的碱基以氢键配对相连.形成腺嘌呤与胸腺嘧啶(A.T),鸟嘌呤与胞嘧啶(G.C)的特定碱基对;在RNA中则为A与U(尿嘧啶),G与C配对。在碱性环境加热或加入变性剂的条件下,核酸分子双链之间的氢键被破坏,解链成两条单链(称为变性)。此时如果加入已知DNA和RNA片段(称为探针),在一定的离子强度和温度下,两条具有互补碱基顺序的DNA与相应的cDNA或RNA,RNA与相应的RNA或cDNA均可形成双链分子结构(称为复性),这种由互补碱基顺序的任何单链核酸分子片段形成双链的过程称为分子杂交(Molecular hybridization)。核酸分子杂交可......阅读全文

MSC无血清培养基与血清培养基有何区别?

在描述产品区别之前,先简单描述下间充质干细胞无血清培养基。间充质干细胞无血清培养基是怎么开发出来的?研发人员根据近几十年来,中国及国外的科研人员在间充质干细胞研究方面取得的一些成果,比如什么样的物质可以很好的促进干细胞生长,什么样的物质可以抑制间充质干细胞的分化,什么样的物质有更好的贴壁效果等等。在

亚细胞结构的分离与鉴定-1

细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分,观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为,转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机;转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/mi

亚细胞结构分离的技术

分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆(Homogenization)是在低温条件下,将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质(即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液)研磨,使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。分离亚细胞组分的第一步是分级分离。它通过

RNA通过激活肺泡上皮TLR3嗜中性粒细胞肺预转移微环形成

  研究背景   1889年,Stephen Paget通过对大量肿瘤的解剖学研究发现,特定的肿瘤细胞总是倾向于转移到特定的组织器官。假说认为肿瘤细胞只能在适宜的组织器官环境中才能形成转移灶。尽管该发现意义重大,此种现象产生的原因却直到2015年才最终得到解答。Nature杂志在2015年在线刊登

RNA 激活肺泡上皮TLR3招募嗜中性粒细胞促进肺预转移形成

  肿瘤外泌体RNA通过激活肺泡上皮TLR3招募嗜中性粒细胞促进肺预转移微环境形成   研究背景   1889年,Stephen Paget通过对大量肿瘤的解剖学研究发现,特定的肿瘤细胞总是倾向于转移到特定的组织器官。假说认为肿瘤细胞只能在适宜的组织器官环境中才能形成转移灶。尽管该发现意义重

肿瘤外泌体RNA通过激活肺泡上皮TLR3招募嗜中性粒细胞

  研究背景   1889年,Stephen Paget通过对大量肿瘤的解剖学研究发现,特定的肿瘤细胞总是倾向于转移到特定的组织器官。假说认为肿瘤细胞只能在适宜的组织器官环境中才能形成转移灶。尽管该发现意义重大,此种现象产生的原因却直到2015年才最终得到解答。Nature杂志在2015年在线刊登

肿瘤外泌体RNA通过激活肺泡上皮TLR3招募嗜中性...(二)

2. TLR3缺失降低嗜中性粒细胞招募至肺组织由于BMDCs会被招募到转移器官中形成转移微环境。因此,研究人员还对肺的Tlr3以及野生型进行了细胞组分观察。结果发现,野生型细胞组分与Tlr3细胞组分相差甚大。野生型细胞中,CD11b+ 骨髓细胞在预转移的肺中显著扩散,CD45+ CD11b+ L

肿瘤标志物-特殊蛋白质类标志

大多数实体瘤是由上皮细胞衍生而来,当肿瘤细胞快速分化、增值时,一些在正常组织中不表现的细胞类型或组分大量出现,如作为细胞支架的角蛋白,成为肿瘤标志。一、角蛋白(一)生物化学特性细胞角蛋白(Cytokeratin.CK)是细胞体间的中间丝,在正常及恶性的上皮细胞中起支架作用,支撑细胞及细胞核。肿瘤细胞

无血清细胞培养基与血清细胞培养基哪个好?

很难一句话来说。但可以从几个方面分别比较。1. 产品性能方面无血清培养基更好。血清并不是生来就为养细胞而来的。血清是全血的一部分,组分很复杂,有150多种已知组分组分,多种未知组分。这些组分中,有些对细胞生长是有利的,有些对细胞生长是无作用的,有些对细胞生长反而是有害的。另外,不同的牛,由

无血清细胞培养基与血清细胞培养基哪个好?

很难一句话来说。但可以从几个方面分别比较。1. 产品性能方面无血清培养基更好。血清并不是生来就为养细胞而来的。血清是全血的一部分,组分很复杂,有 150 多种已知组分组分,多种未知组分。这些组分中,有些对细胞生长是有利的,有些对细胞生长是无作用的,有些对细胞生长反而是有害的。另外,不同的牛

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

实验方法原理 差异去垢剂分离法(differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提,首先是毛地黄皂苷,其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

基本方案 附加方案:去垢剂提取物中RNA的分离 附加方案:用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白             实验方法原理

金属基质增强飞行时间二次离子质谱用于单细胞脂质分析

  1引 言   单个细胞在结构、组成及代谢等方面存在差异,这种差异带来的影响在组织、器官等的功能上均有所体现。针对多个细胞的常规分析方法测得的结果通常无法保留这些个体差异信息,难以准确评估及预测细胞的生理学行为,因此,单细胞分析引起越来越多的关注[1]。单细胞分析的一个重要内容是单细胞脂

亚细胞结构的分离与鉴定-2

第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离

细胞总蛋白质的分离提取

细胞器是一种动态的结构,如内质网、细胞核和高尔基体等,其蛋白质组成除了驻留蛋白质之外,还包括穿梭蛋白质和瞬间相互作用的蛋白质。对于这些组成成分的研究,即亚细胞蛋白质组研究将有助于对这些蛋白质做全面的挖掘,从而对细胞器的功能作深入的阐述。蛋白质提取与制备具体操作方法如下:一、材料的选择早年为了研究的方

细胞和亚细胞提取物的制备实验9

实验方法原理差异去垢剂分离法(differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢剂的 PIPES 缓冲液对细胞进行连续抽提,首先是毛地黄皂苷,其次是 Triton, 最后是 Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生 4 种在生化和电泳上相异的组

蛋白质提取与制备(Protein Extraction and Preparation)-2

三、蛋白质提取与制备具体操作方法1、原料的选择早年为了研究的方便,尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小,如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料,因而对提取要求更复杂一些。原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑,注意选含量高、来源丰

抗原制备

不管是制备单抗还是多抗,抗原的设计与制备都是一个非常重要的问题,设计或者制备得不好的抗原有可能完全不能免疫出抗体来。一个良好的抗原必须具体的条件:(1)分子足够大。对于多肽或蛋白质类的抗原来说,一个抗原决定簇(又叫表位,epitope),通常由6-8个氨基酸残基组成。而平均每5-10kD才有一个表位

蛋白质提取与制备

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验——基本方案

实验方法原理差异去垢剂分离法(differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提,首先是毛地黄皂苷,其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3.

CHO细胞无血清培养入门技术手册

CHO细胞无血清培养入门技术手册——深圳百恩维生物1、CHO细胞背景CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得,为

DNA碱基编辑:基因编辑工具“升级版”

  美国哈佛大学14日宣布,将授予光束疗法(Beam Therapeutics,下称BT)公司全球专利许可,对可用于治疗人类疾病的一套革命性DNA碱基编辑技术进行开发和商业化。  BT公司同日宣布,已经筹集了高达8700万美元由F-Prime资本和ARCH风投牵头的A轮融资。BT公司由基因编辑技术领

DNA碱基编辑:基因编辑工具“升级版”

  美国哈佛大学14日宣布,将授予光束疗法(Beam Therapeutics,下称BT)公司全球专利许可,对可用于治疗人类疾病的一套革命性DNA碱基编辑技术进行开发和商业化。   BT公司同日宣布,已经筹集了高达8700万美元由F-Prime资本和ARCH风投牵头的A轮融资。BT公司由基因编辑技

细胞水平的代谢调节(一)

  一、细胞内酶的分隔分布  从物质代谢过程中可知,酶在细胞内是分隔着分布的。代谢上有关的酶,常常组成一个酶体系,分布在细胞的某一组分中,例如,糖酵解酶系和糖元合成、分解酶系存在于胞液中;三羧酸循环酶系和脂肪酸β-氧化酶系定位于线粒体;核酸合成的酶系则绝大部分集中在细胞核内。这样的酶的隔离

微流控芯片在细胞生物学中的应用

  随着微流控芯片的不断发展,,微流控分析芯片技术正不断地向细胞组学的研究领域进行渗透。微流控芯片在细胞生物学中的应用主要包括细胞的培养、细胞的分离与操纵,细胞组分分析以及细胞全分析系统。  如,Carlson等报道了用静水压力驱动的方法对血液样本中的细胞进行分离。由于红细胞的体积远小于白细胞,且粘

机体长寿奥秘:细胞回收蛋白质或是关键!

  近日,一项刊登在国际杂志Nature Communications上的研究报告中,来自Sanford Burnham Prebys医学发现研究所的科学家们通过研究发现,蠕虫(线虫)如果能够产生过量的蛋白p62,其寿命就会更长,蛋白p62能够识别毒性蛋白并将其标记为摧毁对象,相关研究结果或能帮助开

流式细胞术简介

一、流式细胞术发展简史  流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是:①测量速度快,最快可在1秒种内计测数万个细胞;②可进行多参数测量,可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量,并具有明显的统计学意义;③是一

低速离心机在分离细胞的应用

离心机是一种结构复杂的高速旋转机械,它是利用离心力,不同物质在离心场中沉淀速度的差异,对混合溶液进行快速分离的专门设备,是一种将装有样品溶液的离心管、瓶或袋通过离心机转子置于离心轴上,利用转头绕轴高速旋转所产生的强大离心力,使样品中不同性质颗粒相互分离的特殊装置。可以实现样品的分析、分离。从转速看,

你一定不知道T细胞的这些最新功能!

  T细胞作为免疫系统中的重要组分和效应细胞,在抵抗细菌病毒等外来病原体和杀伤癌细胞等方面扮演着不可或缺的重要角色。因此本文为大家带来近期关于T细胞的最新研究进展,与大家一些学习进步!  【1】Nat Immunol:在慢性病毒感染期间,杀伤性T细胞引发恶病质产生  DOI:10.1038/s415

Science:干细胞维持“干”性的秘诀

  Whitehead研究所的科学家们发现,干细胞在分裂的时候能够区分衰老和年轻的线粒体,并将它们不对称的分配给子细胞。继续保持“干”性的子细胞主要分到年轻的线粒体,而分化的子细胞主要分到衰老的线粒体。这项研究发表在本周的Science杂志上。  这种细胞内容物的不对称分配,可能是干细胞防止损伤累积