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点突变不易扩增突变系统(简称ARMS)分析实验

实验材料 正常 ARMS 引物 突变 ARMS 引物共 同(普通)引物试剂、试剂盒 4dNTP10 X PCR 反应缓冲液已知基因型 DNA 模板轻矿物油Taq DNA 聚合酶loading缓冲液DNA 分子大小标记DNA 样本仪器、耗材 Perkin-Elmer Cetus thermal cyler (480 或 TC ) 和合适的反应管实验步骤 基本方案 ARMS 试验检测单个突变1.根据已介绍的 ARMS 引物指导栏,设计正常的、突变的和共同的 ARMS 引物以适合相应的突变。选择一个合适的参照引物,由此获得所有的引物并准备 50 umol/L 的各种溶液。2.根据表9.7.2的指导方法准备正常和突变的 ARMS 反应体系,配40 ul预先混匀的反应体系至反应管中用于一个循环,如有必要可在室温放置几天或-20°C冻存几个月。3.室温下加 5W已准备好的 10~50 ng/ul 对照DNA至每含有N和M混合引物的管中。如有......阅读全文

点突变不易扩增突变系统(简称ARMS)分析实验

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动物行为轨迹分析平台

1. Morris水迷宫(Morris water maze, MWM)Morris水迷宫实验是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳,学习寻找隐藏在水中平台的一种实验,Morris水迷宫主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习记忆能力,被广泛应用于学习记忆、老年痴呆、海马/外海马研究

SuperMaze动物行为视频分析软件原理及应用领域(二)

3. 八臂迷宫(Radial Arm Maze)   Subjects are placed in the center of an eight-arm radial maze.  Four randomly chosen arms are baited with

基于数字PCR的甲状腺乳头状癌BRAF V600E突变检测新方法

近日,华山医院关明教授团队在《Clinica Chimica Acta》杂志发表题为”Detection of BRAF V600E mutation in fine-needle aspiration fluid of papillary thyroid carcinoma by drop

基因检测技术: 契合临床多元化需求, 推动精准医疗前行

  生物医学新技术的发展极大地推动了疾病诊治的水平,同时也带来医疗资讯的大爆炸和临床应用的混乱。从近期液体活检共识、NGS共识、卫计委发文规范临床应用等可知,在生物医学技术日新月异的今天,如何应用医学技术进行精准医疗,满足不断增长的多元化的临床需求,已成为生物医学领域不可避免的话题。  以临床需求为

JEM:B细胞形成中新特殊蛋白的关键作用

  近日,刊登于国际杂志The Journal of Experimental Medicine上的一项研究论文中,来自弗莱堡大学的研究人员通过研究在B细胞中发现了一种名为Kidins220/ARMS的新型蛋白质,同时研究者还表示,该蛋白在机体抗体的产生和B细胞形成过程中扮演着决定性的角色;目前来自

全国ctDNA基因突变检测室间质量评价调查活动结果报告

  二O一六年十一月,国家卫生计生委临床检验中心发布了2016年全国肿瘤游离DNA(ctDNA)基因突变检测室间质量评价调查活动结果报告。内容如下。  肿瘤游离DNA(ctDNA)基因突变检测对肿瘤靶向治疗、早期治疗应答评估和耐药监测的实时评估等都具有一定的临床应用价值。由于组织样本的局限性,临床上

多元化检测技术助力液体活检(ctDNA)临床应用

  传统的组织活检,因其局限性,如肿瘤的异质性、肿瘤患者无法进行手术、某些肿瘤解剖位置不便进行穿刺及穿刺自身的临床风险等,可能导致患者无法获得针对性治疗;液体活检(Liquid biopsy)作为组织活检的补充,通过非侵入性取样降低活检危害,在动态监测肿瘤进展和治疗反应等领域获得临床认可,已成为肿瘤

Genomic Cloning Technical Manual

Genomic Cloning Technical ManualAn optimal strategy for genomic cloning should meet three requirements: 1) a maximum number of recombinants should be

PNAS: 融合基因组学揭示横纹肌肉瘤细胞起源

  基因融合一直被认为是肿瘤独有的特征。基因融合是指染色体上两个异位的基因嵌合在一起,由于染色体发生易位、缺失或者倒置造成的,通常在癌症的发生发展扮演着重要的角色,并且可以作为诊断和治疗癌症的靶标。基因融合现象最早在慢性粒细胞白血病中发现 BCR-ABL基因融合(费城染色体)。除血液系统肿瘤外,在实

规范中国EGFR血液检测,推动肺癌精准治疗

  近年来,随着医学诊断技术特别是分子诊断技术的不断提高,针对肺癌的新的驱动基因不断被发现,基于驱动基因的新型靶向药物不断涌现,肺癌精准治疗成为了关注的热点。在此背景下,《非小细胞肺癌(NSCLC)血液EGFR基因突变检测中国专家共识》于2015年12月8日在中华医学会会刊《中华医学杂志》上发表。该

解读《肿瘤个体化治疗检测技术指南》:9大检测技术

  肿瘤的个体化治疗基因检测已在临床广泛应用,实现肿瘤个体化用药基因检测标准化和规范化,是一项意义重大的紧迫任务。  为进一步提高肿瘤个体化用药基因检测技术的规范化水平,7月31日,国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会,在广泛征求意见的基础上,制订了《肿瘤个体化治疗检测技术指南(试行)》。  

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

常用的分子生物学基本技术(二)

PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二

Science特刊!石远凯教授:肿瘤精准医疗在中国

  人口老龄化和生活方式的改变导致了中国癌症发病率的上升。在2015年,新发肿瘤患者数和死亡人数分别达到了430万和280万。手术、放疗和化疗仍然是癌症患者的标准治疗方式,但是,分子靶向治疗因其能够对患者进行有效的个体化治疗已经成为癌症治疗中的热门领域。  中国政府在精准医学方面的举措  2015年

或将改变肿瘤治疗临床路径的血液EGFR突变检测技术?

  一、血液EGFR检测:临床肿瘤治疗新选择  在非小细胞肺癌(NSCLC)里,EGFR基因的突变频率非常高,尤其是亚裔非吸烟的女性患者,其突变比例可高达60-70%。NSCLC临床治疗实践中,明确EGFR基因状态对指导后续靶向用药治疗至关重要。  目前,EGFR基因突变NSCLC的临床治疗主要通过

Size and Shape of Protein Molecules-3

The Kirkwood/Bloomfield CalculationThe understanding of how protein shape affects hydrodynamics is elegantly extended by an analysis originally develo

精确诊断助力实现肺癌精准治疗

   随着医学诊断技术,特别是分子诊断技术的不断进步,越来越多的肺癌驱动基因被发现,肺癌精准诊疗成为关注热点。近日,在第二十届全国临床肿瘤学大会期间,复旦大学附属中山医院潘柏申教授主持了“罗氏诊断肺癌专题卫星会”,首都医科大学宣武医院支修益教授通过视频进行致辞,北京大学肿瘤医院赵

CDNA文库

 CDNA文库(主要内容如下)·         Construction of cDNA Library·       &nbs

一管血检测8种癌症 液态活检助力反映肿瘤基因图谱

  约翰霍普金斯大学医学院的科研人员1月18日在《Science》上发表了一篇文章,报道了一种名叫“CancerSEEK”的癌症早期筛查新方法,只需要从检测对象体内抽取一管血,便可检测出8种癌症。这一消息迅速“刷屏”,包括新浪医药在内的广大媒体纷纷转发。  首先得说,“CancerSEEK”作为液体

Principles of Aseptic Technique——4

P REPARATION OF THE SURGEONIn a laboratory setting, the extent of surgeon preparation will depend on the facilities and the need for strict attention

Mapping Protein Distributions on Polytene Chromosomes by Immunostaining-2

12. Hold the salivary glands at the common duct with tweezers.Transfer the glands to a drop of fixing solution on a siliconizedcoverslip.&nb

李辉教授PNAS:融合基因组学揭示横纹肌肉瘤细胞起源

基因融合一直被认为是肿瘤独有的特征。弗吉尼亚大学的一组研究人员从干细胞肌肉分化发生的融合基因事件入手,分析了横纹肌肉瘤细胞的起源,这是首次从融合基因的角度来研究肿瘤细胞的起源。这项研究在线发表于10月31日《美国国家科学院院刊》(PNAS)杂志上,文章的第一作者谢仲秋博士毕业于湖南大学,博士期间从事

基本无菌化技术4

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二代基因测序对癌症治疗究竟是奢侈品,还是标配?

  Bryce Olson是英特尔的一名员工,几年前,非常突然的,Bryce被诊断出了IV期前列腺癌,肿瘤的侵袭性很强,而且已经发生了多处转移。一开始,Bryce尝试了手术、化疗和放疗,然而这些传统疗法都不能阻止肿瘤的发展。Bryce想,按照这样发展,自己大概看不到女儿小学毕业了。  传统疗法的大门

Can Pipetting Damage Your Health?

The Art of Ergonomics: Making the Work Fit the WorkerIn a working environment, use of ergonomic principles reduces levels of physical and mental s

染色体核型分析

一、实验目的 掌握染色体核型分析的各种数据指标,学习染色体核型分析的基本方法。二、实验原理 染色体核型是指将动物、植物等的某一个体或某一分类群(亚种、种、属等)的体细胞整套染色体按它们相对恒定的特征排列起来的图像。核型分析通常需辨析每条染色体的特征。它包括染色体的数目、长度、

Construction and Manipulation of Large-Insert Bacterial Clone Libraries

Acknowledgements The organizer of the workshop acknowledges Dr. Murray Milford, Professor and Interim Head, and Dr. Mark Hussey, Professor and In

Yale University Policy for Aseptic Amphibian Survival Surgery

Background: Aseptic surgery by definition is surgery performed without contamination or exposure to pathogens. According to the AWR's and the

中国发现肺癌多类型基因突变精准检测

  近日,来自广州医科大学第一附属医院何建行教授团队联手华大基因,率先联合实现肺癌多基因突变检测,并在Nature 子刊Scientific Reports上联合发表文章 。文献提出基于BGISEQ—100平台的DNA高通量测序技术可实现对肺癌多种类型靶点基因的准确、快速、全面的检测。在该项最新发表