等电聚焦

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上,电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响,随着时间和所走的距离加长,区带越走越宽,而电聚焦能抵消扩散作用,使区带越走越窄;由于这种电聚焦作用,不管样品加在什么部位,都可聚焦到其电点,很稀的样品也可进行分离;可直接测出蛋白质的等电点,其精确度可达0.01pH单位。电聚焦技术的缺点是:一是电聚焦要求用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀,二 是样品中的成分必需停留于其等电点,不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。 电聚焦技术要求有稳定的pH梯度,要求极防止对流和防止已分离区带再混合的措施,其办法有三:密度梯度,聚丙烯酰胺凝胶和区带对流聚焦,以第一种方法为常用。一、基......阅读全文

等-电-聚-焦

 等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上,电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用

等-电-聚-焦

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上,电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的

细管等电聚电泳的相关介绍

  由于不同的蛋白、多肽的等电点(PI)不同,因此在具有不同pH 梯度的电泳槽中,其可在等电点pH 条件下聚集沉淀下来,而与其他肽类分离开来。CIEF 在分离、分析混合多肽物质中应用不多,主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离,如对rHG 不同异构体分离。由于在CIEF 柱表面覆盖物的不稳定性限制

固相pH梯度等电聚焦实验——等电聚焦

试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液实验步骤打开循环水浴,设置冷却温度,一般为 10℃。将制好的固相 pH 梯度凝胶铺在冷却板上,注意正负极。其间涂以液体石蜡或煤油,避免气泡陷入,以保证胶板和冷却板之间的良好接触。用合适的电极溶液(参见表 7.7) 润湿滤纸电极条,分别放置凝胶的酸、碱侧。有的仪

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦(Isoelectric focusing,简称 IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点             实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的

芯片等电聚焦分离

芯片等电聚焦分离蛋白质的原理与常规毛细管等电聚焦基本相同,都是依据蛋白质的等电点(pI)不同而进行分离。Hofmann等首次将毛细管等应用于蛋白质分析。Li等在PDMS芯片和聚碳酸酯(PC)芯片上,采用等电聚焦模式分离厂牛血清白蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。Das等。26 3采用高聚物芯片,

等电点聚焦电泳

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

什么是等电聚焦?

等电聚焦是一个物理学名词。等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

等电聚焦(isoelectric-focusing)

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上,电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的

等电点小知识

小知识:等电点等电点(pI,isoelectric point)等电点:两性离子所带电荷因溶液的pH值不同而改变,当两性离子正负电荷数值相等时,溶液的pH值即其等电点。两性与等电点氨基酸具有氨基和羧基的典型反应,例如氨基可以羟基化、酰基化,可与亚硝酸作用;羧基以成酯或酰氯或酰胺等。此外,由于分子中同

等电聚焦电泳(IEF)分离蛋白及测定蛋白质等电点

一、原理等电点聚焦(IEF)是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展,等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质,当加上电场后,由于两性载体移动的结果,在两极间逐步建立稳定的pH梯度,当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时,这种

等电聚焦注意事项

1.等电聚焦后可用一根染色的细线(0.1mm)标出染料前沿的位置; 2.不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别,使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异,若要获得最好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌; 3.通常,窄范围的pH梯度可以提高分辨率,但是需要时间也比较

等电点聚焦电泳的定义

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

等电聚焦电泳的梯度组成

  pH梯度的组成方式有二种,一种是人工pH梯度,由于其不稳定,重复性差,现已不再使用。另一种是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物,在正极端引入酸液,如硫酸、磷酸或醋酸等,在负极端引入碱液,如氢氧化钠、氨水等。电泳开始前两性电解质的

等电聚焦凝胶电泳原理

等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在电场中移

等电聚焦电泳的技术特点

是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中,当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷,向负极移动;若其处在高于其本身等电点的环境中,则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置,形成一个个清晰的区带,分辨率极高。

关于等电点的应用介绍

  1、蛋白质的沉淀  同种蛋白质在水溶液中带有同种电荷,互相排斥,且蛋白质表面能形成水化膜,这就使得蛋白质溶液(实际上是胶体)十分稳定。要想破坏其稳定性让其沉淀则需要从这两方面入手,也就是除去水化膜和表面电荷。  比如,可以先将蛋白质的pH调整至等电点,这时的蛋白质分子呈等电状态,虽不很稳定,但还

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点1

实验原理所有的氨基酸均为两性物质,即它们至少含有一個羧基(carboxyl)及一個氨基(α-amino)。這些可游离的基团随着pH变化可以三种形式存在,即正电荷(cation)、两性离子(zwitterion)及负电荷(anion)等三种,在酸性溶液中带正电荷,在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一p

载体两性电解质pH梯度等电聚焦实验—薄层分析等电聚焦

实验方法原理利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同,在一个稳定的、连续的、线性 pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析。所以利用等电聚焦技术分析的对象只限于蛋白质和两性分子。分析的条件是凝胶中有稳定的、连续的和线性的 pH 梯度。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液仪器、耗材注射器水浴实验步骤一

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点2

四、固定、,染色和脱色将凝胶板放在培养皿中,加入固定液,浸泡数小时后,用脱色液清洗两次,每次10min, 然后加入染色液,室温下放置15-30min,再用脱色液洗脱数次,直至谱带清晰,放入保存液中浸泡10min,可制干板。五、制作干胶板1. 取完全浸湿的平整玻璃纸一张,于玻璃板上铺平,纸与板之间不可

聚势-聚力-聚合-新材料、新能源、节能环保等产业联盟成立

  金融,通俗指钱在闭环设计下的流动过程。资本先天具有逐利性,但无论是原始形态金融诞生后的300多年间,还是现代金融产生后的半个多世纪以来,其服务于实体经济的定位和使命从未动摇过。政策如风、金融如水、实业如舟。在国家大力支持金融为实体经济服务的劲风中,石油和化工业界齐聚北国明珠黑龙江安达市,共襄石化

聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点

一、目的:学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。二、原理:等电点聚焦(isoelectric focusing, IEF)或简称电聚焦(electrofocusing),也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术,克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来,等电点聚

原生质等电点测定实验

实验方法原理:原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:(1)在酸性介质中:(2)在碱性介质中:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。不同的植物

固相pH梯度等电聚焦实验

制胶 等电聚焦 pH 梯度的测定 检测             实验方法原理 固相 pH 梯度凝胶是由固相 pH 梯度介质(丙烯酰胺衍生物)共价结合到聚

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

原生质等电点测定实验

原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。原生质等电点测定实验实验方法原理 原生质的主要组成物质──蛋白质

原生质等电点测定实验

实验方法原理原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:(1)在酸性介质中:(2)在碱性介质中:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。不同的植物组