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近年来，免疫学方法与电镜技术相结合，形成了一种免疫电镜技术(Immunoelec-tronmicroscopy，IEM)，使抗原定位达到了亚细胞水平。该技术由以下环节组成：(一) 组织准备 用于免疫电镜检测的组织多种多样，所以各自在组织制备时都具有其特点。一般讲，组织力新鲜并进行无活动力状态处理，例如树胶包埋等，避开高温(55-56℃)，所用溶液都应是中性缓冲液。1.固定 常用的固定液有甲醛和戊二醛。使用时要注意固定试剂pH值，渗透压应调整到“生理”状态。另外四氧化锇也是一种良好的表面膜稳定剂。2.固定后处理 组织块长时间浸于脱水溶剂、液相树脂中时会抽走分子较小的可溶性抗原，另外超薄树脂包埋切片长时间与免疫试剂使用(如24-48h)会引起形态学的改变，而采用冰冻切片在很大程度上弥补了这一缺点。近年来，有人在后处理时对组织进行急冻，然后真空抽干，再用锇蒸气固定后，可用阿朱伯树脂包埋。(二) 切片制备1.冰冻超薄切片是免疫电镜技术中......阅读全文
免疫电镜技术关键的几个问题 免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体，能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置，已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长，操作程序烦锁，因此，要得到满意的免疫金染色切片，必须在关键环节上给予注意，以下我们就免疫电镜染色技术中的几
免疫电镜技术关键的几个问题免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体，能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置，已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长，操作程序烦锁，因此，要得到满意的免疫金染色切片，必须在关键环节上给予注意，以下我们就免疫电镜染色技术中的几个问题进行探
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白（ferritin）标记抗体的方法，为在细胞超微结构水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上，相继发展了杂交抗体
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白（ferritin）标记抗体的方法，为在细胞超微结构水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上，相继发展了杂交抗体
第七章 电子显微镜免疫细胞化学技术第一节 电子显微镜免疫细胞化学技术概述免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白（ferritin）标记抗体的方法，为在细
（一） 原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合，在电子显
（一） 原理 免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标
（一） 原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结
实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤，扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法，为在细胞超微结构水平研究抗原 抗体反应提供了可能。在此基础上，相继发
实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤，扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集
免疫细胞化学的发展对许多领域的研究起到很大的推动作用，在神经科学的研究中尤为突出。本章 仅就免疫细胞化学在神经科学的基础研究方面的应用做一简要介绍。 一、确定神经递质的性质、定性和分布 早期的神经科学工作者应用传统的神经解剖学研究方法如甲基蓝染色法、镀银染色法等对中枢及外周神经系统的结构做了大量
第一节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围在肾脏疾病时，免疫细胞化学技术主要应用于肾脏穿刺组织的检查，也可应用于血清或肾脏洗脱液及尿液的特殊检查，兹分述如下：一、肾脏组织的检查肾穿刺组织一般应切割为三小块，分别作冰冻切片、石蜡切片及超薄切片，进行荧光显微镜、光学显微镜及透射电镜观察。所应用的免疫
二、 免疫细胞化学技术 免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是根据免疫学原理，利用抗原抗体特异结合的特性定位组织和细胞中特异大分子的一类技术。它包括光镜水平（简称免疫组化）和电镜水平(简称免疫电镜)的免疫细胞化学技术。应用免疫细胞化学技术可在原位检测细胞的各种大分子，
实验概要本文介绍了冷冻蚀刻免疫电镜技术，包括：冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术和断裂—标记免疫电镜技术。实验原理冷冻蚀刻法(Freeze Ftching)，也称冷冻复型法(Freeze Replica)或冷冻切断(Freeze Fracture)，是研究生物膜结构的重要方法之一。其主要步骤首先是
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽
病毒是极微小的生物体，用电镜观察时，由于其变形、损伤或杂质的存在，以及标本中病毒的数量有限，只靠其形态特点较难确切辨认。为了提高辨认的准确性，可应用特异性抗体，使其与病毒结合，在电镜下可清晰地辨认特异性抗体及其结合的病毒。这种将免疫学检测方法应用于电镜检查的技术就是免疫电镜技术 (Immunoele
金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金标
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
第四节 免疫电镜胶体金标记法 金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，
电镜样品取材方法 1 动物及人体组织的取材 动物组织的取材，应在麻醉（1%戊巴比妥钠按5ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖剪刀剪取一小块组织，放在干净的纸板上，滴一滴冷却的固定液，用新的、无油污锋利的（双面）刀片将材料切成大约1㎜宽，2～3㎜长的小块，从中挑选损伤小的小条
2．LR White 和Lr gold 是一种混合的丙烯酸单体的透明树脂，具有极低的粘度（8cps）和较强的嗜水性，因此有较强的穿透性，有利于抗体（或抗原）和免疫化学物质穿过LR树脂，达到组织结合部位。在免疫细胞化学的光镜（半薄切片）和电镜水平应用都具有良好效果。标本脱水至70%乙醇即可，能较好
免疫电镜技术与光镜免疫细胞化学染色方法的基本原理和试剂准备基本相同，相关内容可参考本书第四章，这里仅介绍免疫电镜的几种染色方法，包括包埋前染色、包埋后染色和冰冻超薄切片免疫染色三种。1．包埋前染色 包埋前染色即在进行常规电镜包埋处理前先行免疫组织化学染色，然后于解剖显微镜下将免疫反应阳性部位取出
这是一篇有关电子显微镜的综述，是根据75篇发表使用实验的文章归纳的。可以帮助读者找到最适合的电子显微镜。日立高新Hitachi High Technologies America为研究碳酸酐酶可通过spidroin蛋白末端功能域促进蜘蛛丝的形成，采用Hitachi的H7100 electr
作者：周宗 审核：吴洪巧2016年7月28日是第六个世界肝炎日，7月28日是已故诺贝尔奖得主巴鲁克·布隆伯格的诞辰日，为纪念这位乙肝病毒发现者，世界卫生组织将每年的世界肝炎日变更为7月28日。肝炎一直是全球性重要公共卫生问题之一。世卫组织最新数据显示，世界上有4亿人感染乙型和丙型肝炎，
胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique, PAg法） PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A
（一）一般光学显微镜术应用一般光学显微镜（简称光镜）观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块，先用固定剂（fixative）固定（fixation），使组织中的蛋白质迅速凝固，防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等，一般常将几种固定剂配制成混