细胞凋亡小体和梯状DNA的观察(1)
一、实验目的 1 掌握诱导细胞凋亡和观察细胞凋亡小体的方法 2 掌握DNA电泳检测方法，证明凋亡细胞DNA Ladder的存在。 细胞死亡作为生物体的一种常见现象，一般可分为两种类型：细胞坏死（necrosis）和细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。后者也称细胞凋亡（apoptosis）。细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细胞死亡，以细胞质膜的破裂为特征，造成内含物的炎性泄露，是一种非正常死亡。细胞凋亡是细胞的一种“主动性”死亡行为，由基因控制，表现为细胞染色质凝集并边缘化、细胞浓缩、凋亡小体产生及DNA片段化等。由于片段化而形成的DNA Ladder被认为是细胞凋亡的典型特征。 细胞程序性死亡被分为两类：受体介导的细胞程序性死亡和线粒体介导的细胞程序性死亡。本实验主要涉及到线粒体介导的凋亡途径。线粒体可以进行氧化磷酸化并产生ATP，同时它还可以诱导产生PCD发生的物质-细胞色......阅读全文
细胞凋亡小体和梯状DNA的观察(2)
四、实验程序 1． 取样 1）直接撕取洋葱内表皮和刮取人口腔上皮细胞 2）烟草悬浮细胞的培养 烟草(Nicotiana tabacum)悬浮细胞在改良的MS液体培养基（内含MS基本培养基, KH2PO4 200 mg/L，2，4-D 1 ml/L，Gly 1.8 mg/L，VB1
细胞凋亡小体和梯状DNA的观察(1)
一、实验目的 1 掌握诱导细胞凋亡和观察细胞凋亡小体的方法 2 掌握DNA电泳检测方法，证明凋亡细胞DNA Ladder的存在。 细胞死亡作为生物体的一种常见现象，一般可分为两种类型：细胞坏死（necrosis）和细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。后者也
凋亡小体的概述
程序性死亡细胞的核DNA在核小体连接处断裂成核小体片段，并向核膜下或中央异染色质区聚集形成浓缩的染色质块。随着染色质不断聚集，核纤层断裂消失，核膜在核孔处断裂，形成核碎片。同时在程序性死亡过程中，由于不断脱水，细胞质不断浓缩，但仍有选择透过性。细胞体积减小。凋亡细胞经核碎裂形成的染色质块(核碎片
DNA梯状标志的概念和用途
中文名称DNA梯状标志英文名称DNA ladder marker定 义由一系列含碱基对数目不同的DNA片段组成，凝胶电泳后DNA条带呈阶梯状分布，可作为样本DNA分子大小的标志物。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
细胞凋亡实验注意事项
诱导培养HL-60细胞时间要准确； 2. 荧光显微镜下观察细胞时，由于荧光易碎灭，观察时要尽量快。细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段，实验证
细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体片段，实验证
概述细胞凋亡的生物化学变化
1)DNA的片段化 细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数，而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产生不同长度的寡聚核小体
凋亡小体的来源介绍
凋亡小体的形成可以通过两种方式。 (1) 通过发芽脱落机制：凋亡细胞内聚集的染色质块，经核碎裂形成大小不等的染色质块，然后整个细胞通过出芽、起泡等方式形成一个球形的膜包小体，内含胞质、细胞器和核碎片，脱落形成凋亡小体。 (2) 通过自噬体形成机制：凋亡细胞内线粒体、内质网等细胞器和其它胞质成
凋亡细胞的主要特征
凋亡细胞的主要特征是：①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂（但是核膜不破裂），细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体；②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有膜封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症；③凋亡细胞中仍需要合成一些蛋白质，但是在坏死细胞中
细胞凋亡的生化特征主要有哪些
1．形态学变化 形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的,细胞凋亡往往涉及单个细胞,即便是一小部分细胞也是非同步发生的.首先出现的是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离,然后是细胞质密度增加,线粒体膜电位消失,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆,核质浓缩,核膜核仁破碎,DNA降解成为约180bp-20
细胞凋亡的生化特征主要有哪些
1．形态学变化 形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的,细胞凋亡往往涉及单个细胞,即便是一小部分细胞也是非同步发生的.首先出现的是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离,然后是细胞质密度增加,线粒体膜电位消失,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆,核质浓缩,核膜核仁破碎,DNA降解成为约180bp-20
细胞凋亡的免疫检测技术1
一、概述 细胞凋亡（apoptosis,Apo）是细胞增殖的反面，探讨的是细胞死亡的方式与机制。凋亡一词来源于希腊语。原指花瓣、叶片的脱落。自1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念以来，随着细胞生物学、免疫学和肿瘤学的研究发展，最近几年人们对细胞凋亡的重大理论意义和实际意义有了更深的理解。细胞
细胞死亡与细胞凋亡的区别
区别点坏死凋亡起因病理性变化或剧烈损伤生理性或病理性范围大片组织或成群细胞单个散在细胞细胞膜破损保持完整，一直到形成凋亡小体染色质呈絮状凝聚在核膜下呈半月状细胞器肿胀、内质网崩解无明显变化细胞体积肿胀变大固缩变小凋亡小体无，细胞自溶，残余碎片被巨噬细胞吞噬有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬基因组DNA随机
细胞坏死与细胞凋亡的区别
区别点坏死凋亡起因病理性变化或剧烈损伤生理性或病理性范围大片组织或成群细胞单个散在细胞细胞膜破损保持完整，一直到形成凋亡小体染色质呈絮状凝聚在核膜下呈半月状细胞器肿胀、内质网崩解无明显变化细胞体积肿胀变大固缩变小凋亡小体无，细胞自溶，残余碎片被巨噬细胞吞噬有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬基因组DNA随机
检测凋亡四妙招，一招还比一招“狠”
第一招：雾里看花——形态学观察方法 （一）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。（二）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。（三）台盼
几种检测凋亡的方法
一、形态学观察方法（一）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。（二）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。（三）台盼蓝染色：如果细胞膜
几种检测凋亡的方法
一、形态学观察方法（一）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。（二）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。（三）台盼蓝染色：如果细胞膜
DNA－ladder法检测细胞凋亡
发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。一、材料与试剂凋亡细胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸钾白细胞裂解液：pH8.0，10
DNA－ladder法检测细胞凋亡
发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。一、材料与试剂凋亡细胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸钾白细胞裂解液：pH8.0，10
DNA－ladder法检测细胞凋亡
实验概要发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。主要试剂蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸钾白细胞裂解液：pH8.0，10mmol
DNA片断化检测细胞凋亡
细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩， 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂， 形成50~300kbp长的DNA大片段， 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段， 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA,进行琼脂糖凝胶和溴
细胞凋亡、非程序性和程序性细胞坏死的区别
区别点细胞凋亡非程序性细胞坏死程序性细胞坏死起因生理或病理性病理性变化或剧烈损伤死亡受体与肿瘤坏死因子结合，大多由于病毒侵染细胞膜保持完整，一直到形成凋亡小体破损破损染色质凝聚在核膜下呈半月状呈絮状同左细胞器无明显变化肿胀、内质网崩解同左细胞体积固缩变小肿胀变大同左凋亡小体有，被邻近细胞或巨噬细胞吞
关于细胞凋亡细胞DNA－含量的测定
细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于
植物凋亡细胞的形态学观察
一、实验目的 1、掌握细胞凋亡的概念、生物学意义。 2、掌握细胞凋亡与细胞坏死的区别。 3、掌握诱导和观察细胞凋亡的方法。 二、实验原理 （一）概念 凋亡(apoptosis)一词来自希腊语，apo指分离，ptosis指落下。凋亡的原意是枯萎的树叶或花瓣自然
细胞凋亡的检测方法综述3
4、DNA 5’末端32P标记（1）将脱磷酸样品DNA置冰浴上，再加双蒸水10μl，10×缓冲液2μl，T4多核苷酸激酶10U，32P-ATP 740kBq（20μCi），双蒸水加至20μl。（2）混合后，37℃水浴60min。（3）加入1μl的0.5mol/L EDTA，90℃灭活5min。5、观
细胞凋亡检测实验——DNA－ladder法
实验方法原理发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。 实验材料凋亡细胞试剂、试剂盒蛋白酶K醋酸钾白细胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS
凋亡小体的形成方式介绍
(1) 通过发芽脱落机制：凋亡细胞内聚集的染色质块，经核碎裂形成大小不等的染色质块，然后整个细胞通过出芽、起泡等方式形成一个球形的膜包小体，内含胞质、细胞器和核碎片，脱落形成凋亡小体。(2) 通过自噬体形成机制：凋亡细胞内线粒体、内质网等细胞器和其它胞质成分一起被内质网膜包裹形成自噬体，与凋亡细胞膜
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝