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(三) 操作实例1.赤羽病病毒(AKV)的滴定或纯化 (1) 于55mm直径的灭菌塑料培养皿中培养绿猴肾细胞(Vero)，使形成单层。细胞培养时间约3－4天，接种量约为2 000 000/ml个细胞。选取单层细胞全部覆盖，不留有空洞的培养皿用作试验。 (2) 用细胞培养液对AKV病毒作10倍倍比稀释至10-7并保存于4℃。 (3) 每个稀释度的病毒液接种3个平皿。 (4) 接种前弃去细胞培养液,用5mlPBS或细胞培养液冲洗单层细胞,然后弃去冲洗液。 (5) 每个平皿分别加入0.2ml病毒稀释液，对照组只用细胞培养液代替，置37℃二氧化碳培养箱吸附一小时，每15分钟摇动一次，以便使病毒均匀分布。 (6) 按第4步骤冲洗未被吸附的病毒。 (7) 取2倍浓缩的细胞培养液加入等量的1.5％琼脂(预热)中，每个平皿加入7ml，置平台待冷却凝固后于37℃二氧化碳培养箱培养约2天，平皿需倒置。 (8) 取2倍......阅读全文
1952年，Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，从而使病毒蚀斑技术 (Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。(一) 原理 病毒感染细胞后，由于固体介质的限制，释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期，便形成一个局限性病变细胞区
1952年，Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，从而使病毒蚀斑技术（Virus plaque formation）成为许多病毒的滴定和研究方法。 1、原理 病毒感染细胞后，由于固体介质的限制，释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期，便形成一个局限性病变
Disucssion这里所介绍的使用荧光检测的自动蚀斑计数方法有助于加快蚀斑检测的速度。但是，有几种类型的感染性病毒滴度实验不会形成蚀斑。半数组织培养感染剂量（TCID50）就是另一种常用的病毒滴定方法。TCID50是终点稀释测定法，用于确定感染50％接种细胞所需的病毒样品稀释度。由于蚀斑和TCID
Biogen于1978年由几位著名的生物学家，包括爱丁堡大学的Kenneth Murray、麻省理工学院的Phillip Allen Sharp，以及哈佛大学的Walter Gilbert和Charles Weissmann在日内瓦成立。后来，Walter Gilbert和Phil
蚀斑实验流程示例见下图：经典的病毒感染滴度就是通过蚀斑实验来测定的。通常，将细胞接种在多孔培养板中形成汇合的单细胞层。在第二天，将细胞用稀释的病毒样品接种一段特定的时间（时间取决于滴定的辅助病毒）。除去接种物并用新鲜培养基换液，再将细胞孵育若干天，直到形成大到足以通过肉眼观察和计数的蚀斑。传统的蚀斑
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90~180 Kb 之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。实验材料杆状病毒试剂、试剂盒琼脂糖仪器、耗材解剖显微镜倒置显微镜实
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂糖仪器、耗材 解剖显微镜倒置显微镜实验步骤 解剖显微镜下筛选 1. 倒转蚀斑平皿，使其处于显微镜的黑色背景下，以锐角向平皿照射一束亮光。2. 检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑，这种蚀斑看上去折光性强，带有轻微的黄色。3.
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，可用于（1）作为基因工程病毒杀虫剂 ,提高害虫防治效率（2）作为超高效的真核基因表达载体 ,生产有用的工程蛋白（3）研究杆状病毒基因组的结构与功能（4）研究真核基因表达的调控机制。实验方法原理由于昆虫杆状病毒环状双链DNA基因组很大 (约 13
实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1. 接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥ 2 h。从
实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1. 接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑
实验方法原理 空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感
病毒滴度检测（巴斯德所）病毒的滴度是通过蚀斑实验来检测的。将Vero E6细胞以7.5x10^4/孔的密度接种于24孔板。第二天，加入10倍稀释的含病毒培养基，于37˚C孵育1小时。随后，加入0.005%琼脂糖形成半固体覆盖层。于37˚C孵育3天后用4%多聚甲醛固定和结晶紫染色，肉眼观察和计数每
实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位
要想确定样本里的细菌或病毒数，标准方法是进行系列稀释并涂布平板，然后对平板上的菌落或蚀斑进行计数。“蚀斑是展现病毒完成感染循环的重要途径，”哥伦比亚大学的病毒学家Vincent Racaniello说，他主要在动物细胞中研究脊髓灰质炎病毒和鼻病毒。 这项工作看起来简单，不过一
梅洁，英国马尔文仪器NanoSight产品专家纳米颗粒跟踪分析技术（简称：NTA），是近年来新兴的纳米级别测量技术之一，原理如图1所示。纳米颗粒在其悬浊液中受到周边溶液分子的撞击而做无规则的布朗运动，然后通过斯托克斯-爱因斯坦方程，这些颗粒在单位时间内 (ts) 的移动速度（2）与其本身的粒
纳米颗粒跟踪分析技术（简称：NTA），是近年来新兴的纳米级别测量技术之一，原理如图1所示。纳米颗粒在其悬浊液中受到周边溶液分子的撞击而做无规则的布朗运动，然后通过斯托克斯-爱因斯坦方程，这些颗粒在单位时间内 (ts) 的移动速度（2）与其本身的粒
纳米颗粒跟踪分析技术（简称：NTA），是近年来新兴的纳米级别测量技术之一，原理如图1所示。纳米颗粒在其悬浊液中受到周边溶液分子的撞击而做无规则的布朗运动，然后通过斯托克斯-爱因斯坦方程，这些颗粒在单位时间内 (ts) 的移动速度（2）与其本身的粒度（dh）、溶液的粘度（Ƞ）和温度
COVID-19 的出现，使全球的公共卫生面临了严峻的挑战。尽快开发针对SARS-CoV-2的药物和疫苗是科学家们的当务之急。根据以往的经验，具有病毒中和能力的单克隆抗体在这两方面应用都具有很好的潜力。本文将为大家介绍由美国国立卫生研究院（NIH）, 美国疾病预防控制中心（CDC）, Med
病毒会感染几乎每一种生物机体，无论是人、老鼠、跳蚤还是细菌，都逃脱不了病毒的攻击。但是这些寄生生物无法独立生活：它们需要进入宿主细胞内部，这也就是为什么病毒学家也需要培养细胞，不过要想掌握这种细胞培养技术，就必须对病毒和宿主细胞都有所了解。 因为这个过程并不是简单的把病毒和细胞都放到培养皿中就
英国Huges首先提出边界病是一种独立的疾病。 由于首先发 生于苏格兰和威尔士的边界地区，故有此名。 Dickinson应用典型病羔的脑、脾乳剂，经腹腔、 皮下或肌肉接种于怀 孕早期的母羊，使其流产或产出边界病羔羊，从而证明边界病是一种可以传递的疾病， 可由感染母羊经胎盘传给胎儿。病
流感病毒由68%～70%的蛋白质、1%～2%的核糖核酸(RNA)、20%～25%脂质和5%～8%的糖组成。病毒蛋白质含有5种多肽，即血凝素、神经氨酸酶、基质蛋白、核蛋白和多聚酶。 (1) 正粘病毒基因组组成 〖HT5SS〗流感病毒的基因组是由8个分节段的单链、负股RNA组成，
培养活细胞可用相差显微镜，也可用缩时摄影直接记录活细胞的动态变化，还可将离体活细胞染色。 一、相差显微镜直接观察法： 活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。为了观察活细胞的结构，则需要通过其他途径提高结构的反差。20世纪30年
虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞（如中性红）或只染死细胞（如台盼兰）的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色，使用 MTT 的优
为了消灭猪瘟，需要快速而确实的诊断技术。流行病学、症状学和病理解剖学等方 面的资料，具有重要的参考价值，但确诊必须采取病料，进行病毒的分离鉴定或作抗体 测定。 疫情调查时，除需注意流行情况,还应了解是否已经进行免疫接种， 所用疫苗有无 残余毒力?非典型猪瘟在成年猪中大多表现为轻症疾病
疫苗按特征的不同可分为细菌疫苗和病毒疫苗，分为死疫苗，活疫苗，也可分为灭活疫苗和减毒活疫苗等，还可以分为蛋白疫苗，多糖疫苗，结合疫苗，也可按目的分为预防性疫苗和治疗性疫苗。疫苗制作流程一般是培养，纯化，精纯化，配比，分装。当然每一步都有质检和质保。通俗点来讲，疫苗的治疗思路就是把病菌的复制活性去除，
疫苗按特征的不同可分为细菌疫苗和病毒疫苗，分为死疫苗，活疫苗，也可分为灭活疫苗和减毒活疫苗等，还可以分为蛋白疫苗，多糖疫苗，结合疫苗，也可按目的分为预防性疫苗和治疗性疫苗。疫苗制作流程一般是培养，纯化，精纯化，配比，分装。当然每一步都有质检和质保。通俗点来讲，疫苗的治疗思路就是把病菌的复制活性去除，
三、病毒学的发展历程病毒病害的病原研究阶段； 病毒化学和结构研究阶段。（一）病毒病害的病原研究阶段 自病毒发现直到上个世纪30年代初，病毒学研究主要集中在：分离和鉴定引起各种病毒性疾病的病毒；病毒对疾体所引起的特异性病理效应；病毒的传播方式和感染宿主范围；各种理化因子对病毒感染的影响等方面。 在
7.免疫乙脑病毒产生坚强的持久免疫力，迄今没有见到临床病例在痊愈后第二 次感染发病 的报道。且如上述，乙脑病毒的抗原变异不显著，尚未发现在免疫保护力方面明显不同 的型或亚型，这就为流行性乙型脑炎的特异性预防提供了良好的基础。目前应用的乙脑 疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。灭活疫苗的制造方
粘膜病病毒诊断(1) 检测病毒和病毒抗原： ① 病毒分离：急性粘膜病具有持续的病毒血症，所以血液是最好的病毒分离材料。 采取凝固血块，经冻融几次后作为接种物。尸体剖检时则采取肠系膜淋巴结或脾脏，也 可应用骨髓。 检查局部感染时，可用棉拭子采取局部的分泌物或排泄物，置入含有高浓度抗生