重组杆状病毒的纯化实验——编码β半乳糖苷酶
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，可用于（1）作为基因工程病毒杀虫剂 ,提高害虫防治效率（2）作为超高效的真核基因表达载体 ,生产有用的工程蛋白（3）研究杆状病毒基因组的结构与功能（4）研究真核基因表达的调控机制。实验方法原理由于昆虫杆状病毒环状双链DNA基因组很大 (约 130kbp) ,而且对限制性内切酶都具有多个识别位点 ,因而不能用常规基因工程操作直接将外源基因导入到病毒基因组中。昆虫重组杆状病毒的获得通常要分为两步进行。第一步 ,把外源基因克隆进通用载体质粒中 ,使外源基因处于杆状病毒强启动子的控制之下 ,而且左右两侧被杆状病毒DNA序列所包围。这些侧翼序列对病毒复制是非必需的 ,但在第二步同源重组时能发挥作用。第二步 ,把这一重组质粒DNA与野生型病毒基因组DNA一起导入昆虫细胞 ,在细胞内通过同源重组把外源基因插入病毒基因组 (外源基因置换了位于两个侧翼序列之间的野生型病毒基因组基因 ,如多角......阅读全文
重组杆状病毒的纯化实验——编码β半乳糖苷酶
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，可用于（1）作为基因工程病毒杀虫剂 ,提高害虫防治效率（2）作为超高效的真核基因表达载体 ,生产有用的工程蛋白（3）研究杆状病毒基因组的结构与功能（4）研究真核基因表达的调控机制。实验方法原理由于昆虫杆状病毒环状双链DNA基因组很大 (约 13
重组杆状病毒的纯化实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管
裸眼筛选重组杆状病毒实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂糖仪器、耗材 解剖显微镜倒置显微镜实验步骤 解剖显微镜下筛选 1. 倒转蚀斑平皿，使其处于显微镜的黑色背景下，以锐角向平皿照射一束亮光。2. 检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑，这种蚀斑看上去折光性强，带有轻微的黄色。3. 检查β-gal 重组病毒感
裸眼筛选重组杆状病毒实验
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90~180 Kb 之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。实验材料杆状病毒试剂、试剂盒琼脂糖仪器、耗材解剖显微镜倒置显微镜实
野生型杆状病毒的纯化实验
实验材料杆状病毒试剂、试剂盒TE蛋白酶KN-十二烷基肌氨酸苯酚氯仿异戊醇乙醇乙酸钠仪器、耗材培养瓶锥形瓶转子离心机聚苯乙烯管实验步骤1. 以每1.8x107细胞的密度接种Sf9细胞于至少10个150 cm2 培养瓶中。27℃温育约2 h，让细胞牢固贴壁，以0.1的感染复数用野生型AcMNPV感染。
野生型杆状病毒的纯化实验
基本方案 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒
野生型杆状病毒的纯化实验
基本方案 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤一、杆状病毒表达载体最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成，其位于病毒基因组多角体座位，替代了非必需的野生型多角体基因。在实验室中
杆状病毒昆虫细胞表达系统2
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
重组G蛋白偶联受体的纯化实验
实验步骤 一、引言 天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此对其的结构测定和功能分析需要:①重组膜蛋白的生产系统;②能分离得到有活性的膜蛋白（而不是没有功能、折叠错误的膜蛋白）的纯化策略。表达并纯化原核和真核的膜蛋白在文献中都有报道。读者
重组G蛋白偶联受体的纯化实验
纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶）; 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是，必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分，因为很多 GPCR—旦被去
重组的果蝇－ACF－的表达和纯化实验
实验材料高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 杆状病毒储液晚对数期的悬浮培养的 Sf9 细胞试剂、试剂盒公磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 FFLAG-M2 树脂 1：1（V V）悬浮液（Sigma－Aldrich）稀释缓冲液 F洗涤缓冲液 F洗脱缓冲液 F液氮牛血清白蛋白 （BSA） 标准
重组的果蝇－ACF－的表达和纯化实验
实验方法原理 实验材料 高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 杆状病毒储液晚对数期的悬浮培养的 Sf9 细胞试剂、试剂盒 公磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 FFLAG-M2 树脂 1：1（V V）悬浮液（Sigma－Aldrich）稀释缓冲液 F洗涤缓冲液 F洗脱缓冲液 F液氮牛血清白蛋白
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
重组G蛋白偶联受体的纯化实验（二）
3.受体-特异配体亲和层析用一般的亲和标签富集受体之后，可能需要第二步纯化以分离到纯净、有功能的受体蛋白。这主要是因为：①第一步纯化得到的受体还不够纯, 仍有其他污染物。例如，用 XAaxanthineamineC0ngener，拮抗剂）层析柱纯化腺苷受体可去除其中的一个主要污染物 (Wei
重组G蛋白偶联受体的纯化实验（一）
一、引言天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此对其的结构测定和功能分析需要:①重组膜蛋白的生产系统;②能分离得到有活性的膜蛋白（而不是没有功能、折叠错误的膜蛋白）的纯化策略。表达并纯化原核和真核的膜蛋白在文献中都有报道。读者可以参考如Grisshammer 和Tate(1995;2003) 及Gri
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白的代谢标记
实验方法原理由于重组蛋白表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白的敏感方法。所有的标记氨基酸都掺入到晚期病毒特异的蛋白质（包括目的蛋白）的合成。35S 标记的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射标记的氨基酸。为了获得更好的结果，在标记之前细胞内的这两种氨基酸应当被清除：将细胞在
重组的果蝇－NAP－1－的表达和纯化实验
实验方法原理 实验材料 晚对数期的悬浮培养的SFP细胞试剂、试剂盒 高滴度的 His－NAP－1 杆状病毒储液（Orbigen）磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 H洗涤缓冲液 H洗脱缓冲液 HHEGD 缓冲液NAP－1 纯化缓冲液 Ni－NTA牛血清白蛋白（BSA）标准 乙醇液氮仪器、耗材 离心机
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白大规模生产
实验材料草地夜蛾细胞（Sf 9）高滴度重组病毒仪器、耗材无血清昆虫细胞培养基1～10 L 旋转培养瓶10.16 cm 管索张力器多旋转瓶揽拌台27℃ 培养箱供气泵实验步骤1. 在悬浮培养液中培养 Sf 9 细胞，并使之适应无血清培养液（基本方案 1）。2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增 Sf 9
重组的果蝇－NAP－1－的表达和纯化实验1
实验材料晚对数期的悬浮培养的SFP细胞试剂、试剂盒高滴度的 His－NAP－1 杆状病毒储液（Orbigen）磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 H洗涤缓冲液 H洗脱缓冲液 HHEGD 缓冲液NAP－1 纯化缓冲液 Ni－NTA牛血清白蛋白（BSA）标准乙醇液氮仪器、耗材离心机Wheaton 杜恩斯
重组的果蝇－NAP－1－的表达和纯化实验2
实验材料见基本方案试剂、试剂盒见基本方案咪唑的 Superflow 层析缓冲液仪器、耗材见基本方案NTA Superflow 树脂（Qiagen）FPLC 柱实验步骤1. 实验前准备主要材料见基本方案附加材料含有 20 mmol/L 和 500 mool/L 咪唑的 Superflow 层析缓冲液N
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含体，为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此，可在光学显微镜下，利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
重组蛋白纯化的基本策略
及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段 捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。 中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。 精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。 分离方法的选择 根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法：蛋白质
重组蛋白的表达与纯化
实验概要本实验将重组大肠杆菌经过诱导培养后，获得了表达的重组蛋白，分别用Ni-NTA柱亲和层析、High Q与DEAE阴离子交换层析、Glutathione柱亲和层析进行了层析纯化，并进行了浓缩。实验步骤1. 将测序正确的质粒转化Rosetta(DE3)菌，过夜培养后，挑取单菌落，于小试管内进行IP
半乳凝素的基本信息
Gal-1是一个对富含多N乙酰基乳糖糖复合物有明显亲和力的动物外源凝集素家族的一个成员。最近的发现Gal-1有调节免疫反应、血管新生和肿瘤进展的作用。
半制备规模单链RNA纯化
引言寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98～99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中，杂质聚集在一起，即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67～90%，较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此，
半制备规模单链RNA纯化
寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98～99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中，杂质聚集在一起，即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67～90%，较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此，
半乳葡萄甘露聚糖的基本信息
中文名称半乳葡萄甘露聚糖英文名称galactoglucomannan定 义半纤维素的组成之一，尤其在裸子植物细胞壁中，该聚糖占12%～15%。主链由葡萄糖和甘露糖以β-1,4键连接而成，半乳糖则以α-1,6键连到主链的任一种糖上。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），糖类（二级学科）
酵母载体与表达产物的检测实验_β半乳糠苷酶检测
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDSDS磷酸钾Na2CO3OPNG仪器、耗材水浴锅培养箱分光光度计漩涡混合器离心机实验步骤1. 按每一个单酵母菌落接种YPD（或适当）的培养基，挑2~3个含lacZ融合蛋白表达质粒的酵母菌于30℃培养过夜，如果融合蛋白在一个质粒上，那么就在选择该质粒的培养基中培养。 2
杆状病毒储液制备实验
基本方案 从悬浮培养中制备 基本方案 从单层培养中制备 噬斑试验测定滴度 实验方法原理 实验材料