用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验2
虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞（如中性红）或只染死细胞（如台盼兰）的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色，使用 MTT 的优点是黄色的 MTT 能将活细胞染成深蓝色，由于反差明显，计数时不必去除含酚红的凝胶层，且在感染早期即能观察到开始形成的小空斑，可用于分离被病毒转化或对病毒抵抗的细胞。实验材料鸡胚成纤维细胞试剂、试剂盒2%~5%小牛血清的 0. 5% 水解乳蛋白的 Hanks 稀释液仪器、耗材培养瓶co2培养箱实验步骤(1) 选择经 24h~48 h 培养的 4X106/ ml 鸡胚成纤维细胞若干瓶。(2) 将细胞瓶按病毒稀释度分组标记，每个稀释度为 2 瓶，对照 2 瓶。(3) 配制含 2%~5%小牛血清的 0. 5% 水解乳蛋白......阅读全文
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验2
虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞（如中性红）或只染死细胞（如台盼兰）的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色，使用 MTT 的优点是黄色的 MTT 能将活细胞染成深蓝色
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验_蚀斑试验法
实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验
实验方法原理 空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验4
在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验实验材料病毒试剂、试剂盒95% 酒精胰酶含 5%小牛血清的 Eagle仪器、耗材细胞培养板实验步骤(1) 用细胞培养板 (6孔)，若用旧板，洗净后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外线照射 2-4 h备用，新板可直接使用。(2) 将传代细胞系经胰酶消化分散后
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验3
用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位实验材料病毒细胞系试剂、试剂盒含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液仪器、耗材培养皿实验步骤(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上，生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液，加
病毒蚀斑技术（2）
(三) 操作实例1.赤羽病病毒(AKV)的滴定或纯化 (1) 于55mm直径的灭菌塑料培养皿中培养绿猴肾细胞(Vero)，使形成单层。细胞培养时间约3－4天，接种量约为2 000 000/ml个细胞。选取单层细胞全部覆盖，不留有空洞的培养皿用作试验。 (2) 用细胞培养液对AKV病毒作10倍
杆状病毒储液制备实验——噬斑试验测定滴度
实验材料对数生长期单层培养的 Sf 9 细胞试剂、试剂盒杆状病毒储液昆虫细胞培养液仪器、耗材琼脂糖顶层覆盖物台盼蓝顶层覆盖物（选用）60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱1.5 ml 带螺口盖的冻存管实验步骤1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培养液稀释处于对数生长期的 Sf 9 细胞至约
病毒蚀斑技术介绍
1952年，Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，从而使病毒蚀斑技术（Virus plaque formation）成为许多病毒的滴定和研究方法。 1、原理 病毒感染细胞后，由于固体介质的限制，释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期，便形成一个局限性病变细胞区，此
病毒蚀斑技术（1）
1952年，Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，从而使病毒蚀斑技术 (Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。(一) 原理 病毒感染细胞后，由于固体介质的限制，释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期，便形成一个局限性病变细胞区
重组杆状病毒的纯化实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管
蚀斑减少中和实验
选择国内外具有代表性的毒株10株，其中HTN型6株(76-118、A9、A16、A537、陈株和LR1)和SEO型4株(UR、沟3、R22和湖北-1)，沟3株病毒免疫家兔，采血分离血清，分别与上述病毒株进行PRNT，测定血清中和抗体滴度。
病毒滴度的测定
稀释计数法滴度单位：TU/ml，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。”TU”为”transducing units”的缩写，中文为“转导单位”，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。第一天 细胞准备将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×105/ml，加入96孔板，100µl/孔
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验材料待检的病毒标本试剂、试剂盒0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS)红细胞悬液仪器、耗材96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤1. 选择适当的 96 孔微量血凝板，如果使用鸡或火鸡红细胞，应选用 V 型微量血凝板；如果使用豚鼠或人"O"型红细胞，
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验方法原理 实验材料 待检的病毒标本试剂、试剂盒 0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS) 红细胞悬液仪器、耗材 96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤 1. 选择适当的 96 孔微量血凝板，如果使用鸡或火鸡红细胞，应选用 V 型微量血凝板；如果使用
蚀斑法可用于慢病毒吗
可用。根据查询蚀斑法资料显示，蚀斑法可用于慢病毒，使病毒在细胞单层上形成局限性病灶的方法，又称空斑技术，蚀斑产生机制将稀释的病毒悬液接种于良好的细胞单层上，使细胞与病毒吸附一定时间后，再于单层细胞上覆盖以营养琼脂培养基进行培养。
50％终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理50% 终点 (50% endpoint) 法是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做成曲线，找出造成 50% 动物、鸡胚死亡或细胞病变的终点稀释度。 LD50 (50 % Lethal dose) 为造成 50%动
50％终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理 实验材料 病毒试剂、试剂盒 含 2%小牛血清的 Eagle's 维持液仪器、耗材 细胞培养箱、细胞培养板实验步骤 1. 制备细胞 先制备好单层细胞培养物，在低倍显微镜下观察，挑选生长良好的细胞，按「传代细胞培养」法进行，将细胞单层洗涤、消化、计数。配制所需浓度的细胞悬液
痘苗病毒储液制备——噬斑分析测定滴度
实验方法原理经胰酶作用的系列稀释病毒储液常被用于感染适当的细胞系。经过几天的培养后，吸出培养基，将细胞用结晶紫染色。由于感染细胞变缩、变圆和脱落，形成直径 1～2 mm 颜色较淡的噬斑。实验材料生长良好的贴壁培养的单层 BSC-1 细胞病毒储液试剂、试剂盒0.1% 结晶紫（溶于 20% 乙醇）仪器、
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1. 接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥ 2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1. 接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml 病毒贮液中取0.5
MVA－病毒储液制备实验——免疫染色法滴度测定
实验方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法进行测定，因为 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 细胞中形成噬斑。实验材料CEF 或 BHK-21 细胞MVA病毒储液试剂、试剂盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培养基1:1 丙酮／甲醇PBS（含和不含3% FBS两种）PBS／H2O2兔抗
杆状病毒毒种贮液的制备实验
杆状病毒是一类具有囊膜包裹的双链环状DNA病毒，其基因组大小为80~180 kb，在自然界中以节肢动物作为专一性宿主进行感染和传播。实验材料杆状病毒试剂、试剂盒胎牛血清重组病毒仪器、耗材培养箱培养瓶转子实验步骤从单层培养中制备： 1a. 以毎瓶1.8×107 Sf9细胞的密度，将细胞接种于两个15
什么是蚀斑啊
钙化、蚀斑和蛀孔——辩别出土古玉真伪的自我心得对出土古玉真伪的辨别，尤如学习打拳，得有三十六招、七十二式。钙化、蚀斑和蛀孔，仅能作为判断古玉真伪的二、三个要点。不过，根据笔者的体会，学好这“三扳斧”，对于刚入“山门”的古玉收藏爱好者来说，还是挺管用的，而且相对来说它还比较容易掌握。首先谈谈本人对钙化
什么叫蚀斑挑选
一般这还是指对能形成CPE的病毒的操作。CPE：致细胞病变效应。蚀斑挑选：病毒感染单层贴壁细胞后，用牙签、枪头等挑取单个蚀斑（这决定了必须有比较明显的CPE），然后稀释后再重复感染新的单层细胞，再进行挑选，经几轮筛选，可以得到比较纯的病毒。菌种里面是直接挑菌落，不需要看CPE。
什么叫蚀斑挑选
一般这还是指对能形成CPE的病毒的操作。CPE：致细胞病变效应。蚀斑挑选：病毒感染单层贴壁细胞后，用牙签、枪头等挑取单个蚀斑（这决定了必须有比较明显的CPE），然后稀释后再重复感染新的单层细胞，再进行挑选，经几轮筛选，可以得到比较纯的病毒。菌种里面是直接挑菌落，不需要看CPE。
Celigo技术在基因治疗和病毒研究中的应用（三）
Disucssion这里所介绍的使用荧光检测的自动蚀斑计数方法有助于加快蚀斑检测的速度。但是，有几种类型的感染性病毒滴度实验不会形成蚀斑。半数组织培养感染剂量（TCID50）就是另一种常用的病毒滴定方法。TCID50是终点稀释测定法，用于确定感染50％接种细胞所需的病毒样品稀释度。由于蚀斑和TCID
Celigo技术在基因治疗和病毒研究中的应用（一）
Biogen于1978年由几位著名的生物学家，包括爱丁堡大学的Kenneth Murray、麻省理工学院的Phillip Allen Sharp，以及哈佛大学的Walter Gilbert和Charles Weissmann在日内瓦成立。后来，Walter Gilbert和Phillip A
反转录病毒产毒细胞系建立实验——测定病毒滴度
实验材料病毒原液试剂、试剂盒G418仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 感染的前1天按1：10至1：20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天，移去靶细胞的培养液，加入含有病毒原液的培养液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培养液感染6
病毒滴度的概念
也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指标，则可以半数感染量（ID50）测定；此外，当实
Celigo技术在基因治疗和病毒研究中的应用（二）
蚀斑实验流程示例见下图：经典的病毒感染滴度就是通过蚀斑实验来测定的。通常，将细胞接种在多孔培养板中形成汇合的单细胞层。在第二天，将细胞用稀释的病毒样品接种一段特定的时间（时间取决于滴定的辅助病毒）。除去接种物并用新鲜培养基换液，再将细胞孵育若干天，直到形成大到足以通过肉眼观察和计数的蚀斑。传统的蚀斑