HPLC保留时间漂移的故障排除
保留时间不重现有两种不同的情况:即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化,而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如,保留时间的漂移往往由柱老化引起;而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上,保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化,如固定相流失(例如通过水解),色谱柱污染(由样品或流动相所致)等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下: 一 色谱柱平衡 如果我们观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡色谱柱。 流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。 二 固定相稳定性 固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的PH 范围内......阅读全文
色谱柱的流动相
1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用
流动相色谱柱怎么使用?
1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用
液相色谱柱流动相的流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1mL/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8mL/min为佳。当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方
高效液相色谱色谱柱的填料和流动相的组分
应按各品种项下的规定,常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检
wook500液相色谱柱流动相的配制
液相色谱柱一般的液相色谱柱由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将其压入装有洗脱液的
液相色谱柱流动相的使用注意事项
(1)由于甲醇廉价,对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。 (2)对于正相柱推荐使用沸程为30-60 ℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相,没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧),去离子水及双蒸水中含有酚类杂质,有可能影响分析结果。 (3)含水流动相最好
wook500液相色谱柱流动相的配制
wook500液相色谱柱一般的液相色谱柱由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将
液相色谱流动相是甲醇和乙酸铵保留时间往后拖
加入了乙酸铵缓冲盐,就像增加了摩擦阻力一样,增加了在填料中流过的时间。出峰时间自然往后拖。
液相色谱中流动相、固定相和保留时间的关系是怎样
一般极性大的样品用反相色谱柱,流动相极性大于固定相极性,样品极性越小,保留时间越长。极性小的样品用正相色谱柱,流动相极性小于固定相极性,样品极性越大,保留时间越长。当然如果有其它保留机理,如氢键等,波流时间会变化。固定相不同保留能力会有不同,如C8的保留能力弱于C18。流动相根据不同的溶解能力、极性
高效液相色谱色谱柱的填料和流动相的组分介绍
应按各品种项下的规定,常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检
流动相pH小于2,注意色谱柱选择哦!
例如中性化合物在反相色谱系统的保留与流动相pH无关;酸性化合物在pH 趋于酸性(pH变小,尤其低于化合物的pka 值)时会因状态趋于中性而增加保留;而碱性化合物在流动相pH 趋于碱性(pH 变大,尤其高于化合物的pka 值)时会因状态趋于中性而增加保留。 但是各位小伙伴知道吗,如果调节流动相的pH过
液相色谱柱的流动相配制要求有哪些?
液相色谱柱是样品组分在柱填料和流动相之间的质量交换,以达到分离的目的,因此流动相需要具备以下特性:1、液相色谱柱的流动相对于样品具有一定的溶解能力,确保样品组分不会在色谱柱中沉淀(或长时间保留在色谱柱中)。2、液相色谱柱的流动相和样品之间不发生化学反应。3、为了获得良好的分离效果,流动相的粘度应尽可
流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡
只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的
流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡
只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的
用过流动相三乙胺的色谱柱如何清洗
可以加大水相的比例冲洗啊,水相90%都可以的。我也用过三乙胺的流动相
流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡
只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的
液相色谱柱的流动相配制要求有哪些?
液相色谱柱是样品组分在柱填料和流动相之间的质量交换,以达到分离的目的,因此流动相需要具备以下特性:1、液相色谱柱的流动相对于样品具有一定的溶解能力,确保样品组分不会在色谱柱中沉淀(或长时间保留在色谱柱中)。2、液相色谱柱的流动相和样品之间不发生化学反应。3、为了获得良好的分离效果,流动相的粘度应尽可
流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡
只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的
反相离子对色谱仪流动相pH值对色谱保留的影响
反相离子对色谱仪分析常用的流动相是甲醇-水、乙腈-水,流动相中一般含有3~10mol/L的离子对试剂。流动相pH值决定离子化合物的解离度,合适的pH值是反相离子对色谱的重要条件。为了使化合物zui大程度的解离,获得合适的保留和响应,又不超出硅胶基质色谱柱的承受范围,一般流动相pH = 2~7.5。强
液相色谱流动相小议
一、液相色谱流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。选好填料(固定相)后,强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少,相应的容量因子k降低;而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加,相应的容量因子k升高。因此,k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流
液相色谱流动相脱气
流动相的脱气HPLC所用流动相必须预先脱气,否则容易在系统内逸出气泡,影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率,影响检测器的灵敏度、基线稳定性,甚至使无法检测。(噪声增大,基线不稳,突然跳动)。此外,溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相(如烷基胺)反应。溶解气体还会引起溶剂PH的变化,对分
C18液相色谱柱色谱柱液相色谱柱
分析型到制备型一套完整的填料体系,目前可提供的填料键合相有C18、C4、C8、SI、NH2、CN、Phenyl、Diol以及手性填料TBB和 DMB。孔径有60A、100A和300A三种,满足不同条件的分析。填料粒径可以提供3.5um、5um、7um、10um、13um和16um六种。可谓品
气相色谱的保留时间
什么叫保留时间?从进样开始至每个组分流出曲线达极大值所需的时间,可作为色谱峰位置的标志,此时间称为保留时间,用 t 表示。
Kromasil色谱柱是否可以在纯水流动相下操作?
Kromasil是否可以在纯水流动相下操作?当您使用Kromasil反向C4、C8、C18色谱柱时,流动相中至少要有5%有机相。 Kromasil苯基柱,Eternity系列都可以在100%纯水流动相下使用,不会出现润湿问题!
手性柱分析流动相方法优化
手性分析很关键的一项是流动相的选择,手性分析一般都采用正相,使用zui多的流动相是正己烷、正庚烷、乙醇和异丙醇这四种,其中起洗脱作用的流动相是乙醇和异丙醇,正己烷和正庚烷用来调节流动相的洗脱强度。正己烷和正庚烷对于样品分离没有什么太大的影响,不会改变选择性和分离度,通常都可以混用,不过正庚烷比正己
药品研发中HPLC液相色谱柱的选择和流动相的优化
分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。目前高效液相色谱法(HPLC)多使用反相色谱法,本文主要以反相为例讲解。 1.液相色谱柱的选择 原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻,要求检测使用的色谱柱有较高的理论塔板
药品研发中HPLC液相色谱柱的选择和流动相的优化
分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。目前高效液相色谱法(HPLC)多使用反相色谱法,本文主要以反相为例讲解。1.液相色谱柱的选择 原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻,要求检测使用的色谱柱有较高的理论塔板数,能提
程序升温气相色谱仪的有效柱温与保留温度
程序升温气相色谱仪是在样品进样后,气相色谱仪色谱柱的温度按照预先设定的加热程序,随时间呈线性或非线性增加,使样品中的各待测组分在其zui佳柱温(即保留温度)下流出色谱柱。程序升温是气相色谱仪的一种重要的色谱技术。一、有效柱温: 有效柱温是指程序升温气相色谱仪获得一定理论塔板
程序升温气相色谱仪的有效柱温与保留温度
程序升温气相色谱仪是在样品进样后,气相色谱仪色谱柱的温度按照预先设定的加热程序,随时间呈线性或非线性增加,使样品中的各待测组分在其最佳柱温(即保留温度)下流出色谱柱。程序升温是气相色谱仪的一种重要的色谱技术。一、有效柱温:有效柱温是指程序升温气相色谱仪获得一定理论塔板数和分离度时的特征温度。对两个相
程序升温气相色谱仪的有效柱温与保留温度
程序升温气相色谱仪是在样品进样后,气相色谱仪色谱柱的温度按照预先设定的加热程序,随时间呈线性或非线性增加,使样品中的各待测组分在其最佳柱温(即保留温度)下流出色谱柱。程序升温是气相色谱仪的一种重要的色谱技术。一、有效柱温:有效柱温是指程序升温气相色谱仪获得一定理论塔板数和分离度时的特征温度。对两个相