细胞信号运动的图像
最新一期《Biochemical and Biophysical Research Communications (BBRC)》杂志报道，加州大学圣地牙哥分校生物工程研究人员公布了关键信号携带蛋白paxillin从信息网络中心出发，沿细胞表面朝细胞核运动的视频录像。 BBRC文章高级作者、UCSD Jacobs工程学院生物工程教授Shu Chien说，细胞并不像我们想象的那么简单，我们甚至不知道这些驱动细胞运动的分子之间的所有相互作用。Chien与文章共同作者Ying-Li Hu通过显微镜检测活细胞，记录红色荧光蛋白标记的paxillin分子沿着绿色荧光标记的细胞骨架轨道运动的过程。即便没有录像证据，研究人员在过去的 10年中业已证实高等有机物利用paxillin作为各级生长因子受体向核传递的运输递质和基因表达信号。 由于paxillin故障与许多癌症、肿瘤转移以及其它疾病过程有关，癌症研究人员一直乐衷于弄清paxillin......阅读全文
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对...
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对其进行成像分析简介基于细胞成像的分析技术一般需要使用荧光染料进行标记，一些荧光标记可能对活细胞具有毒性或者只能用于固定过的细胞进行染色。无标记细胞分析技术使得研究者既无需耗时耗力的染色流程也无需担心染料对正常细胞活力的影响，就可以计算出细胞数目和细胞汇
荧光染料CFSE活细胞标记的特点
荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中，它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强
荧光染料CFSE活细胞标记的特点
荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中，它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强
PCR荧光标记选择探针法还是染料法？
特异性荧光标记——探针法： 是目前临床最常用的方法，在加入一对引物的同时再加入一对探针，特异性好，这里列举的是TaqMan水解探针：一段与靶基因特异性结合的序列，分别在5’端加入荧光报告基团，3’端加入荧光淬灭基团。其核心是利用taq酶的5’-3’外切酶活性切断探针，使得使荧光报告基团和荧
免疫荧光共标记怎么计算共标记的细胞个数
共定位的定义：共定位是对样品内两种荧光标记的信号共同分布的位置进行分析。 共定位就如字面意思上所说的，只能够表明蛋白A和B都在此细胞有表达，并且在同样的细胞内位置/细胞器。相关短语：共定位通道 PDM Channel 细胞共定位 Cellular co localization 细胞内共定位信息 c
免疫荧光标记最常用的荧光染料有哪些条件呢
用于免疫荧光染色的染料需具备以下几个条件： 荧光染料应有较高的量子产额和消光系数； 荧光染料对488nm的激发光波长有较强的吸收； 发射光波长与激发光波长之间应有较大的波长差； 容易与被标记的单克隆抗体结合而不影响抗体自身的特异性。 1.异硫氰酸荧光素（FITC）：可产生亮绿色荧光。F
肿瘤细胞的标记及活体荧光成像
摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) , 经800 mg/ L G418 筛选, 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究, 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P < 0101) . 将稳定
细胞骨架的荧光探针标记方法
细胞骨架主要有微管(micmtuble, MT)，微丝(microfilament, MF)，中间丝(intermediate filament, IF三种类型。它们分别由不同的蛋白单体组装而成，其中微管蛋白(tubulin)、肌动蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是细胞骨架的重要组
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)（3）移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中，4℃透析过夜，更换三次缓冲液，注意避光。 （4）吸取上述醛化好的HRP溶液3ml，加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml，室温轻搅2-3小时，避光；加入5m
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1
目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖
LSCM的荧光标记
传统应用于荧光标记的染料如异硫氰酸荧光素(fluorescin isothiocyanate，FITC，ex 490 nm/em520 nm)、四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC，ex 550 nm/em 620 nm)、罗丹明(Rhodamine，ex 560 nm/em 540 ~ 660 nm)
荧光素标记抗体技术
(一) 原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力
LSCM多重荧光标记
由于大部分实验都需同时观测两个或多个细胞内的组分，需要对细胞进行多重荧光标记。这时，研究者需要综合考虑实验目的、所使用的激光共聚焦显微镜配置和已有的实验材料。通常，激光共聚焦显微镜配备 4 个激光器(405nm 半导体固体激光器、氩离子激光器、543nm 氦/氖激光器或 561nm半导体固体激光器和
细胞凋亡检测实验——荧光探针双标记法
实验方法原理本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，
绿色荧光蛋白(GFP)标记亚细胞定位
一、原理利用绿色荧光蛋白(GFP)来示踪胞内蛋白的技术。利用GFP融合蛋白技术来进行活细胞定位研究是目前较为通行的一种方法，在光镜水平进行研究，不需要制样，没有非特异性标记的影响。并且GFP的分子量为27kD，经激光扫描共聚集显微镜激光照射后，可产生一种绿色荧光，从而对蛋白质进行精确定位。激光扫描共
非荧光标记的遗传标记分析技术
近年来，美国GENTEON公司采用激光致导的动态荧光检测技术（Dynamic fluorescence），结合多通道毛细管电泳技术，研制出Capella 400型全自动基因分析系统。该仪器采用动态荧光检测技术，彻底消除了传统荧光DNA标记检测的高成本和复杂性，可精确有效到检测未经标记的单链或双链核苷
免疫荧光标记为什么不直接标记一抗而标记二抗
因为一种一抗只识别一种底物，如果每种一抗都需要荧光标记，那这样成本很高。而二抗既可以和一抗结合，又带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗，提高了通用性。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。一抗二抗都是一种可以特异结
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate，FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧
分子间相互作用分析：荧光标记VS无标记
同无标记技术相比，利用荧光技术检测分子间相互作用的实验成本较低，例如荧光共振能量转移和凝胶迁移实验，无需昂贵的仪器便可完成结合分析。然而，基于荧光标记的检测技术也存在自己的局限性，像凝胶迁移实验就只能用来检测蛋白和核酸间的相互作用。那么在具体的实验中，研究人员该如何选择合适的检测技术呢？不要着急，下
荧光标记物质的波长
荧光标记物质的波长做荧光标记用得着。已搜索，无重复。前一个数字是激发波长，后一个是发射波长Fluorochrome--Excitation Wavelength--Emission WavelengthAcid Fuchsin 540 630Acridine Orange(Bound to DNA)
共聚焦荧光探针标记方法
（一）BCECF测定pH值 1. 储存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分装后，－20℃避光保存。 2. 染色步骤 将培养细胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（终浓度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、M
什么是荧光标记法
荧光物标记法，神经纤维的末梢可以吸收很多荧光化合物或荧光染料,经轴突逆向运输到细胞体内,从而建立逆行荧光标记法。例如:Kuypers等(1977)用这种方法在荧光显微镜下根据所用荧光物标记物特有的波长显示吸收荧光物的神经细胞。目前用于神经元标定的荧光物质有十多种。可以根据实验的要求进行单荧光物、双标
悬浮细胞的免疫荧光标记实验
实验材料 悬浮细胞试剂、试剂盒 多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1. 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。 2. 离心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X
悬浮细胞的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验材料悬浮细胞试剂、试剂盒多聚
荧光素酶基因标记肿瘤细胞的实验步骤
哺乳动物生物发光，一般是将Firefly luciferase基因（由554个氨基酸构成，约50KD）即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，当细胞分裂、转移、分化时, 荧光素酶也会得到持续稳定的表达。将标记好的细胞接种到实验动物
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记单层培养细胞
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒FCS磷酸盐仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 2
荧光标记和同位素标记有什么区别
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...2
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗体的方法 2P3（2）Chadwick氏法 试剂和材料：抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸盐缓冲盐水、1%硫柳汞、离心机及离心管、三角烧瓶(25 ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500 ml
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...1
制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一，制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下： 1、异硫氰酸
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白