用[32P]磷酸标记细胞实验_标记单层培养细胞
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒FCS磷酸盐仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml，继续培养 16 小时。4. 估算同位素的摄取量：(1) 加入同位素，混匀后立即吸出 5 μl 培养基于一小离心管，冰浴。(2) 培养结束后再取 5 μl 培养基。(3) 通过测定温育前后培养基活性差来估算放射活性。5. 提取并分析 RNA。展开......阅读全文
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记单层培养细胞
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒FCS磷酸盐仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 2
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记悬浮培养的HeLa细胞
实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 培养细胞至对数期，600 g 离心 5 分钟。2. 弃上清，用无磷酸培养基悬浮细胞。3. 培养细胞 3~4 小时以耗尽它们的磷酸储备。4. 再次离心，弃上清，用无磷酸培养基悬浮，加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml 培养液，培养 1
用[32P]磷酸标记细胞实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 FCS磷酸盐仪器、耗材 无磷酸培养基实验步骤 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞标记悬浮培养的HeLa细胞实验材料HeLa 细胞 试剂、试剂盒FCS
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞 标记悬浮培养的HeLa细胞 实验材料 HeLa 细胞
标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞）SDS煮沸法裂解细胞实验方法原理实验材料待标记的培养细胞 试剂、试剂盒37℃标记培养液
32－P－标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞） 基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞） SDS煮沸法裂解细胞 实验方法原理
32－P－标记裂解培养细胞实验
实验方法原理 实验材料 待标记的培养细胞试剂、试剂盒 37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材 树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性
单层生长细胞的免疫荧光标记实验
免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法，在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光
单层生长细胞的免疫荧光标记实验
实验材料 单层细胞试剂、试剂盒 PBS多聚甲醛甲醇抗体仪器、耗材 离心机水浴锅培养箱实验步骤 1. 置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。2. 如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-10
32P标记裂解培养细胞—温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）
本实验介绍了用 32P 标记和裂解培养细胞，以用于蛋白质免疫沉淀分析。这种方法适用以 32P 标记任何细胞成分，可用于各种贴壁或不贴壁培养的昆虫、鸟类和哺乳类细胞。实验材料待标记的培养细胞试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS)
32P标记裂解培养细胞—－温和去垢剂裂解法（对非贴壁）
实验材料待标记的培养细胞试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性吸管橡皮细胞刮子So
培养细胞标记和裂解物的制备实验
实验材料 培养细胞试剂、试剂盒 DMEMHClTBSTris仪器、耗材 微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤 1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a. 吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a.
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
用[α32P]－3脱氧腺苷5三磷酸或[α32P]双脱氧ATP末端标记...
用[α-32P] 3'脱氧腺苷5'-三磷酸或[α-32P]双脱氧ATP末端标记双链DNA的3'突出端实验材料 限制性内切核酸酶小牛胸腺末端转移酶模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇酚氯仿末端转移酶缓冲液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱实验步骤 一、材料1. 缓冲
32－P－标记裂解培养细胞实验——SDS煮沸法裂解细胞
实验材料待标记的培养细胞固相化金黄色葡萄球菌（可选）试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)SDS裂解缓冲液RIPA 校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材橡皮细胞刮子Sorvall 冷冻离心机(或其他)树脂玻
单层培养细胞更换培养液实验
实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞：A549细胞，以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如：Eagle1×MEM含H
单层培养细胞更换培养液实验
实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞：A549细胞，以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如：Eagle1×MEM含H
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑试剂、试剂盒利多卡因Karnovsky 型固定液甲酚紫仪器、耗材微
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验 实验方法原理 本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的
单个神经细胞标记实验
实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑 试剂
靶细胞杀伤实验：AnnexiV标记法
正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD
体细胞融合实验——单层培养细胞的融合
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG-1000仪器、耗材培养基实验步骤1. 以适当的培养基培养细胞至接近汇合成片的密度（80% 汇合率）。2. 吸干 60 mm 规格平皿或 T-25 培养瓶中的培养基，加 2 ml 50% PEG-1000，轻轻转动 1 分钟让该粘稠液体覆盖所有细胞。3. 往培养皿或瓶中
免疫组织化学法实验——单层生长细胞的免疫荧光标记
实验材料在3〜5 cm培养皿上生长的单层细胞（培养皿越小所需的抗体就越少 但培养皿应适合显微镜下观察）试剂、试剂盒VPBS40℃2% (m V)高聚甲醛（PFA)固定液 4℃ 用于细胞表面抗原固定100%甲醇 -10〜-20℃ (置于冰箱的结冻室冷却较为理想）；或含0.1% (V V) Triton
方案－13.1－单层培养细胞更换培养液实验
实验方法原理 以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。 实验步骤 材料无菌培养的细胞：A549
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对...
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对其进行成像分析简介基于细胞成像的分析技术一般需要使用荧光染料进行标记，一些荧光标记可能对活细胞具有毒性或者只能用于固定过的细胞进行染色。无标记细胞分析技术使得研究者既无需耗时耗力的染色流程也无需担心染料对正常细胞活力的影响，就可以计算出细胞数目和细胞汇
氨基酸代谢标记实验_备择方案－3－长期细胞标记
实验方法原理长期标记意味着对细胞进行 6～32 h 持续的代谢标记。该方法特别适用于研究合成速度相对较慢的蛋白质或研究成熟的标记蛋白而不是生物合成的前体。稳定状态的标记是长期标记的一种形式，在此过程细胞和放射性标记的氨基酸一起孵育直至放射性标记蛋白的合成和降解速率相当。如果蛋白质复合体中的亚基的初级
培养瓶中单层培养细胞生长曲线的绘制实验
实验方法原理开始一系列的培养，每天在一定的时间计数细胞直至它们到达平台期。实验步骤材料无菌单层细胞培养，A549,Vem 或 HeLa-S3, 75 cm2 培养瓶，晚对数期 1 瓶0.25% 粗制胰蛋白酶，混合有 lOmmol/L EDTA 5 ml生长液，含 2 mmol/LNaHC03 200
氨基酸代谢标记实验_备择方案－2示踪标记细胞
实验材料细胞悬液／贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 示踪培养基仪器、耗材配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 每个时间点和每个样品准备 0.5 × 107 ~2 × 107 细胞， 每 0 .5 ×