生物实验室那些事都是精华!
1. 跑page胶的时候 小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。 2. 提取质粒的时候 最后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间,最好是空调吹热风,或是37度温箱放长一点的时间,我试过室温过夜,酶切很好。 3. 做WESTERN BLOT 的时候 大家往往会摸索一抗、二抗的浓度,封闭时间,曝光时间等等,而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜,甚至重新提蛋白,这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后,将PVDF膜晾干,裁减成小块,保存起来,用的时候取出一块,没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说,节约了大量的时间。 4. 有关缓冲液和培养基配置 1)将缓冲液配方中的成分分别以10-100倍配成母液储存,需要的时候只需将相应的母液混合,补加水稀释即可。......阅读全文
影响沉淀纯度的因素
1. 表面吸附:沉淀表面上离子的不完全等衡引起对杂质的吸附现象吸附规律:(1)首先 吸附构晶离子 或 与构晶离子半径大小相近、电荷相同的离子; (2)其次 吸附能与构晶离子生成溶解度小的化合物的离子易被吸附; (3)离子的电荷越高,浓度越大,越易被吸附;
沉淀反应实验:火箭电泳(rocket-electrophoresis)实验
火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。1、材料(1)诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清(2)待检血清(抗原):
沉淀反应实验:对流免疫电泳
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋
沉淀条件的选择——根据沉淀类型及纯度影响因素
(一)晶形沉淀的条件 1. 在适当稀的溶液中进行 降低 (Q-S)/S ,易得到粗晶形¯ 易洗涤、易过滤、吸附杂质量小;(但不宜过稀,否则被沉淀离子的损失量大。) 2. 在不断搅拌下进行,慢慢加入沉淀剂溶液 防止局部过浓,以免生成大量晶核。 3. 在热溶液中进行 增大 S
这些因素影响沉淀琼脂扩散
琼脂扩散试验包括琼脂双向单扩散试验和琼脂双向双扩散试验,后者是最常用的琼脂扩散试验,一般用于抗体或抗原的定性检测,其原理是可溶性抗原与相应的抗体(抗血清)在琼脂凝胶中向四周自由扩散,如果抗原和抗体相对应,则在二者比例适当处形成肉眼可见的白色沉淀线,反之则不会出现沉淀线。常用已知抗原检测未知的血清
关于沉淀反应—火箭电泳(rocket-electrophoresis)-的简介
火箭电泳(rocket electrophoresis) 若在单向琼脂扩散基础上,加入抗原后,将琼脂板置电场中,使抗原置于负极即向正极定向扩散,在与板中的抗体结合而形成锥形沉淀峰,形似火箭,故名火箭电泳。沉淀峰的高度与抗原浓度成正比。由于在电场作用下,促使带负电荷多的抗原泳动,故火箭电泳需时短,
沉淀反应实验:免疫电泳(immune-electrophoresis)实验
免疫电泳实验免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离,然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散,在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物,故可用抗原成分分析;且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。1、材料(1)待检标本(抗原):正常人
影响电泳的因素
1.电场强度 电场强度也称电位梯度,它是指单位长度的电位降。电场强度对电泳起重要的作用。电场强度愈大,则带电粒子的移动愈快。根据所用电场强度大小,可将电泳分为常压电泳(100~500V)和高压电泳(500~10000V)。常压电泳分离时间长,多用于分离蛋白质等大分子物质;高压电泳分离时间短,多用来
影响电泳的因素
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表 示。泳动度是指带电 颗粒在单位电场强度下泳的速度。影响泳动度的主要因素有:1、首先决定于带颗粒的性质,即颗粒所带净电荷的数量,大小及形状。 一般说来,颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反 之则慢。泳动
影响电泳的因素
1.电场强度 电场强度也称电位梯度,它是指单位长度的电位降。电场强度对电泳起重要的作用。电场强度愈大,则带电粒子的移动愈快。根据所用电场强度大小,可将电泳分为常压电泳(100~500V)和高压电泳(500~10000V)。常压电泳分离时间长,多用于分离蛋白质等大分子物质;高压电泳分离时间短,多用来分
免疫沉淀的影响因素介绍
免疫沉淀的成功依赖于抗原的纯度以及制备抗体的难易,主要受两方面因素的影响:1、抗原原液的丰度,2、抗体对抗原的亲和力。
影响环状沉淀试验结果的因素
沉淀法中要求沉淀完全程度大于99.9 %.而沉淀完全与否是根据反应达平衡后,沉淀的溶解度来判断。影响沉淀溶解度的主要因素有以下几种:1. 同离子效应:当沉淀达平衡后,若向溶液中加入组成沉淀的构晶离子试剂或溶液,使沉淀溶解度降低的现象。沉淀剂用量:一般——过量50%~100%为宜,非挥发性——过量20
沉淀的溶解度及其影响因素
(一)沉淀的溶解度(S) 对 MA 型沉淀: MA的溶解度: S = [MA(水)]+[M+] = [MA(水)] + [A-]= S0 + [M+] = S0 + [A-] 式中: S0——分子溶解度或固有溶解度 因许多沉淀物的固有
影响胶体电泳的因素
影响电泳泳动度的因素:1、颗粒性质:颗粒的直径、形状及所带静电荷量对泳动速度有较大影响。一般来说颗粒带净电荷量越多,或其形状越接近球形,在电场中的泳动速度就越快。反之则越慢。2、电场强度:电场强度是指每一厘米的电位降。又称为电位梯度或电势梯度。它对泳动速度起着十分重要的作用。电场强度越高,带电颗粒的
影响电泳分析仪电泳的因素
1. 电场强度 电场强度越大,电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大,从而造成电泳过程中产热过多,引起介质温度升高,影响电泳效果。降低电流可以减少产生热量,但会延长电泳时间,减慢待分离生物大分子的扩散而影响分离效果。 2. 溶液性质 主要体现为样本溶液的pH、离子强度和黏
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。电泳现
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极
电泳技术介绍及影响电泳的因素
一、基本知识和种类 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,相反则带正电荷,在电场中向负极移动,只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极
有机溶剂沉淀法的影响因素
(一)有机溶剂的选择 在实际生产中,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、氯仿等。丙酮的介电常数小,沉淀能力强;而乙醇无毒,广泛应用于药品生产中。 (二)温度的控制 有机溶剂沉淀时,温度是重要的控制指标。根据沉淀对象不同,采用的温度不同,为防止生物大分子在较高温度时发生变性,一般要求在低温下进行
电泳技术的影响因素
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过
关于沉淀反应—对流免疫电泳(counter-immunoelectrophoresis)-的简介
对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 若在双扩基础上加电泳,将抗原孔置负极端,抗体孔置正极端。由于抗原所带的负电荷较抗体多,且抗原分子小于抗体,在电场中能够克服电渗的作用而由负极泳向正极;抗体却克服不了电渗作用,从正极向负极移动,二者形成对流,并在比例适宜处
影响有机溶剂沉淀法的因素分析
(一) 有机溶剂沉淀法的因素— 有机溶剂的选择 在实际生产中,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、氯仿等。丙酮的介电常数小,沉淀能力强;而乙醇无毒,广泛应用于药品生产中。 (二) 有机溶剂沉淀法的因素— 温度的控制 有机溶剂沉淀时,温度是重要的控制指标。根据沉淀对象不同,采用的温度不同,为防止
影响电泳(迁移率)的因素
在电场中被分离物质的泳动速度除受本身性质如所带电荷的性质和数量、分子本身的大小和形状、分子的水化程度、解离趋势等影响外,还与其他外界环境因素有关,这些环境因素影响着带电颗粒的泳动速度。不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度
凝胶电泳仪影响因素
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在
影响电泳的因素:电场和溶液
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。影响泳动度的主要因素有:1、首先决定于带颗粒的性质,即颗粒所带净电荷的数量,大小及形状一般说来,颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反之则慢。泳动度还与分子的形状
影响电泳(迁移率)的因素
在电场中被分离物质的泳动速度除受本身性质如所带电荷的性质和数量、分子本身的大小和形状、分子的水化程度、解离趋势等影响外,还与其他外界环境因素有关,这些环境因素影响着带电颗粒的泳动速度。不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度
影响电泳现象的因素有哪些?
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过
影响电泳技术的因素介绍
1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少。对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离。为了保证电泳过
影响电泳(迁移率)的因素
在电场中被分离物质的泳动速度除受本身性质如所带电荷的性质和数量、分子本身的大小和形状、分子的水化程度、解离趋势等影响外,还与其他外界环境因素有关,这些环境因素影响着带电颗粒的泳动速度。不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速
影响电泳的主要因素
影响电泳的主要因素为:1.电泳介质的pH值溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有