Science:绘制“垃圾DNA”的新技术

在很长一段时间内被认作是“垃圾DNA”,我们现在知道了基因间的一些区域也执行着至关重要的功能。这些DNA区域突变可以严重损害人类的发育,有可能在生命后期导致一些严重的疾病。然而直到现在,都难以寻找调控DNA区域。 德国慕尼黑工业大学计算生物学教授Julien Gagneur,马克斯普朗克生物物理化学研究所(MPI) 的Patrick Cramer教授领导科学家们,现在开发出了一种方法来寻找活化和控制基因的调控DNA区域。 我们DNA中的基因包含着详细的蛋白质装配指令,这些蛋白质“工人”执行和控制着我们细胞中几乎所有的过程。为了确保每种蛋白都在适当的时间及我们身体的正确部位完成任务,对应基因的活性必须受到严格控制。基因间的DNA调控区域接管了这一功能,充当了复杂的控制机器。 马克斯普朗克生物物理化学研究所所长Patrick Cramer教授解释说:“一些DNA调控区域对于人类发育、组织保护和免疫应答等至关重要。此外,它们......阅读全文

血基因组DNA提取实验——血基因组DNA-试剂盒提取法

血基因组DNA提取可用于:(1)从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA;(2)用于后续测序、遗传信息学等研究。实验方法原理采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA 试剂盒仪

哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA

在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、

DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达3

(6)遗传标记: 从成千上万个哺乳细胞中,检测出极少数的含DNA重组体的转染细胞,并鉴定已导入外源DNA是哺乳动物细胞基因表达系统的一个关键内容。因此,在真核生物表达载体上必须附有标记基因,才能进行筛选。常用的标记基因有:胸苷激酶基因(thymidine kinase,TK)、二氢叶酸还原酶

DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达2

2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后,离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水,为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般

DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达1

通过外源DNA的重组、克隆、以及鉴定,可以获得所需的特异DNA克隆。外源克隆基因在某种表达载体及适宜的宿主细胞中可表达为相应的蛋白质,这就组成了外源基因的蛋白表达系统。表达后的蛋白质必须具有原来的生物学活性,这是基于正确的基因转录、转录后加工、mRNA翻译及翻译后修饰,同时与表达载体的结构和表达体系

DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达4

(3)CHO细胞稳定表达系统:动物细胞瞬时表达系统中外源基因没有稳定地整合到宿主细胞染色体中,一染色体外DNA的形式存在。因而只能瞬时表达。要使外源基因在宿主细胞中高效、稳定地表达,必须建立一个稳定表达系统,包括适宜的表达载体、有效的基因转染、标记基因和目标基因的选择与共扩增、受体适当的受体细胞和培

细菌基因组DNA提取实验

细菌基因组DNA提取可应用于:(1)获得细菌基因组DNA;(2)作为PCR模板;(3)用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN

血基因组DNA提取实验

            实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血

血基因组DNA提取实验

实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板

细菌基因组DNA提取实验

            实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD

DNA突变按照基因结构改变分类

小规模突变小规模突变影响基因中的一个或几个核苷酸 (只影响到一个核苷酸的突变称为点突变)。小规模突变包括:插入:将一个或多个额外的核苷酸添加到DNA中。它们通常由转座因子引起,或由重复元件错误复制所致。位于基因编码区的插入可改变mRNA的剪接(剪接位点突变)或引起阅读框架的移位(移码),这两者都可显

细胞化学词汇基因组DNA

中文名称:基因组DNA英文名称:genomic DNA定  义:组成生物基因组的所有DNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

小鼠肝基因组DNA制备

原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。

DNA修饰QKI基因信号通路介绍

该基因编码的蛋白质是一种RNA结合蛋白,可调节mRNA的前剪接,从细胞核输出mRNA,蛋白质翻译和mRNA稳定性。 编码的蛋白质参与髓鞘化和少突胶质细胞分化,并且可能在精神分裂症中起作用。 已经为该基因发现了编码不同同工型的多个转录物变体。

基因组DNA的快速纯化

第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 μl 10 mg/ml蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液(配 25 ml)50 mmol/L Tris,pH 8                      

分子遗传学词汇dna基因

中文名称:dna基因英文名称:dna gene定  义:与细菌DNA复制直接相关的基因。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

小鼠肝基因组DNA制备

原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。

DNA基因探针的克隆方法介绍

对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质,然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列,然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选,阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所

拟南芥基因组DNA的提取

实验概要本实验介绍了用CTAB法提取拟南芥基因组DNA。主要试剂CTAB提取液(2%CTAB,50mMEDTA,50mM Tris-HCl,PH 8.0,0.84M NaCI,0.05%巯基乙醇),氯仿,无水酒精,70%的酒精主要设备1.5 mL离心管,65℃水浴锅,高速离心机,研钵实验材料拟南芥叶

植物基因组DNA的RFLP

实验概要本实验介绍了植物基因组DNA的RFLP多态性分析的原理及操作步骤。通过本实验可了解不同植物或同一植物不同个体之间基因组DNA顺序的差异性,掌握DNA限制性酶切片段长度多态性研究的基本方法。实验原理DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间,也存在于同一种植物的

细菌基因组DNA提取实验

实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。实验材料 细菌培养物

关于土壤基因组DNA提取

土壤样品含有大量的微生物,其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取 DNA 是研究土壤微生物zui为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物 DNA 的方法主要有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中,经过有效的破壁方法使微生物的DNA 全部释放到裂解液中,然后再

某些遗传疾病与“垃圾DNA”有关--找到胰腺发育不全病因

  据物理学家组织网11月10日报道,最近,科学家首次利用一种新技术分析了以往被称为“垃圾DNA”的全部基因组,以寻找某些遗传病的成因。埃克塞特大学医学院和伦敦帝国学院合作领导的一个研究小组发现,一种叫做胰腺发育不全的疾病正是由位于染色体隐蔽部位的调控基因变异造成的。相关论文发表在 11月10日

父亲的“垃圾DNA”也作怪,突变或导致后代患自闭症

  过去的十年里,科学家们鉴定出了数百个似乎能影响大脑发育,增加患自闭症风险的基因变异。而这些基因变异主要是发生在DNA中能直接编码蛋白质的区域(即编码区)。现在,一项调查所谓非编码DNA的新研究发现,调节基因活性的DNA区域(即非编码区)的改变也可能会导致自闭症,且令人惊讶的是,这些变异倾向于遗传

血基因组DNA提取实验——血基因组DNA大量试剂盒提取法

实验方法原理本试剂盒采用独特的两相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DN的目的。适合从5 ml 的抗凝人或哺乳动物全血,或500 ul 抗凝鸟类或两栖动物全血中获得多至250 ug 的基因组DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA大量试剂盒仪器、耗材DNA

DNA微阵列检测基因表达水平及识别基因序列

  Schena等1996年用拟南芥光调基因微阵列,以不同器官中的mRNA为探针,检测其基因表达水平,结果表明叶mRNA的表达水平是根的500倍。Shelon等1996年将酿酒酵母基因组DNA克隆制成微阵列,用6条最大染色体和10条最小染色体DNA探针分别标记上红,绿荧光标记进行杂交检测,结果表明9

Nature:缺乏Dna2会导致基因跳跃到DNA断裂处

  细胞具有许多保护基因组完整性的机制,包括修复在DNA复制过程中可能发生的错误的过程。酶Dna2参与DNA修复,但是人们对它的缺失对染色体不稳定性的影响知之甚少。在一项新的研究中,来自美国贝勒医学院等多家研究机构的研究人员揭示出当Dna2缺失时,较小的DNA片段从整个基因组跳跃到染色体断裂处。这种

提取基因组dna后,怎样判断dna的纯度和质量

用紫外分光光度计测od值a260/a280正常1.8左右如果制备的dna样品a260/a2802,说明样品中rna过高,可用rnase消化后,用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀dna

分离基因组DNA和质粒DNA有哪些不同之处

分离质粒时,可以将质粒去得很干净。方法为:先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来,再用NaOH和SDS将菌液裂解(起裂解作用的主要是NaOH,但此时,SDS可以与蛋白很好的结合)。第三步,加入酸中合第二步中的碱,并且将SDS沉淀下来,同时,SDS和蛋白也一起沉淀下来,而基因组上面有很多的蛋白,这样基因组就

基因组DNA的得率较低或者无基因组DNA原因及解决方法

1 ) 样品材料老化或者反复冻融导致 DNA 含量下降: 应选择新鲜的材料样品,如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等,不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存,以免DNA降解。 2 ) 样品破壁或者裂解不完全, DNA 未充分释放: 动植物样品应在液氮中充分研磨