专家呼吁：不要再失多肽和蛋白质药物发展良机
我国在世界上率先合成牛结晶胰岛素，但是第一个上市的药物却是美国公司，目前胰岛素在我国每年销售接近于200亿，国内企业所占份额寥寥无几。 说起多肽和蛋白质药物的发展，专家们五味杂陈。多位专家呼吁，应重视多肽和蛋白质药物研发，加大政策扶持和资金投入，不能再次错失发展良机。 多肽药物与蛋白质药物相近，都是由氨基酸构成，区别在于氨基酸数量和空间结构。它们与传统的化学药物相比，最大的特点是活性和安全性高、特异性强、成药性好。 化学药物由化合物分子构成，大部分非靶向化学药物进入人体后就像撒胡椒面，杀死病毒和病变细胞的同时，也容易误伤健康的器官。 “而多肽和蛋白质药物由氨基酸组成，药物代谢产物也是氨基酸，而氨基酸是人体必需的元素。”中国药科大学徐寒梅教授介绍说，“因此多肽药物的毒性小，安全性高。” 同时，多肽和蛋白质药物靶向性（特异性）强，不会伤及正常的细胞、组织和器官。因此，这类药针对癌症、心血管疾病、免疫相关疾病、代谢类疾病......阅读全文
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（一）
蛋白质组学蛋白质组学是鉴定和定量细胞、组织或生物体蛋白质的科学，目的是了解生物学变化和疾病状态，开发疾病的生物标记和治疗药物的靶点。如果将一个基础蛋白的各个修饰蛋白算作一个蛋白，那么哺乳动物细胞含多达3~4万个蛋白。当计算各个修饰后的蛋白时，蛋白质的数量远远超过了10万。细胞内不同蛋白质的丰度或浓度
氨基酸，多肽和蛋白质的区别与联系
氨基酸，多肽和蛋白质的区别为：性质不同、氨基酸的数量不同、用途不同。氨基酸，多肽和蛋白质联系是多肽和蛋白质都是由氨基酸组成，多肽是蛋白质水解的中间产物。一、性质不同1、氨基酸：是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后的化合物。2、多肽：是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物。3、蛋白质：是由氨基酸以“
氯胺T法标记蛋白质/多肽注意事项
（1）放射性碘源的选用：无载体的131I或125I均可用于碘化标记，但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好≥50～100mCi/ml，至少也要>30mCi/ml，否则加入碘源的容量要增加，随着带入碘源中含有的还原剂（为放射性碘源运输保存所需加入）量也增加
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（三）
蛋白质纯化RP-HPLC 是一种有效的蛋白质/多肽纯化工具。通过 RP-HPLC 法可以从杂质中分离目标蛋白/多肽，采集到的片段可用于进一步研究，以及借助正交分析技术的分析，甚至可作为治疗药物。在蛋白质/多肽分析过程中，色谱条件优化的目标是优化分辨率和保留时间。制备色谱法分离蛋白质/多肽时，色谱条件
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十三）
图17. TFA浓度对峰形和选择性的影响 洗脱液：加入如图所示的TFA，以20%~32%的乙腈（ACN）梯度洗脱，洗脱时间为15分钟。样品1.血管紧张素II 2.血管紧张素III3.血管紧张素I其它离子对试剂。尽管目前为止TFA仍是最常用的离子对试剂，但蛋白质/多肽分离有时会采用磷酸和七氟丁酸（H
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（二）
色谱分析色谱技术已发展成一种强大的分离技术，能够分离大量蛋白质和多肽。但任何一种单独的色谱技术仍然只能分离出一小段蛋白质。因此，多种色谱技术的结合使用已成为蛋白质组分析中蛋白质分离的一种普遍方法。二维色谱在长期的蛋白质纯化模式的基础上，John Yates和同事开发了一种名为多维蛋白质鉴定技术（Mu
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十二）
蛋白质/多肽液相分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱（图14）。在梯度洗脱期间，当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时，蛋白质就会从疏水界面上解吸，继续顺着柱向下，从而从柱中洗脱。图14. 当有机改性剂的浓度达到特定值时，蛋白质从疏水界面洗脱。乙腈。在多肽的反相色谱分离时最常
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（九）
胰蛋白酶水解分析。蛋白质水解产生的肽段利用反相高效液相色谱分析，流动相采用含TFA体系（参见第15-17页），以起始浓度约5%的乙腈梯度洗脱（乙腈起始浓度低于5%可能导致较早洗脱出肽的色谱的不可重现性），乙腈浓度逐渐升至70%（参见图31）。梯度洗脱的时间取决于待水解蛋白的大小。大分子蛋白比小分子蛋
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析第一节 概述 1960年，美国学者Yalow 和Berson 创立了放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA），并首先用于糖尿病人血浆中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十）
反相高效液相色谱和质谱（MS）的联用为蛋白质/多肽分析提供了强大的工具。20世纪80年代，约翰·贝内特·芬恩和他的同事们开发了电喷雾离子源，使质谱与反相高效液相色谱得以联用。采用液相色谱-质谱联用的好处包括：质谱是非常灵敏的检测技术。 质谱可以提供所分离多肽/蛋白质的分子量。 质谱可利用分子
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十五）
其它离子对试剂。尽管目前为止TFA仍是最常用的离子对试剂，但蛋白质/多肽分离有时会采用磷酸和七氟丁酸（HFBA）等其它试剂。 如图18所示，一些情况下，磷酸可分离一些TFA无法分离的多肽。通常磷酸盐使用浓度约为20-30 mM，pH为2~2.5。此外，磷酸盐缓冲液对一些蛋白质的分离效果要优于TFA。
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（七）
在氧化环境条件下，尽管蛋白质的几个氨基酸都可能受影响，但最有可能被氧化的氨基酸是甲硫氨酸；甲硫氨酸可被氧化成甲硫氨酸亚砜（图34）。对甲硫氨酸残基的氧化取决于其在蛋白质中的位置。埋藏在蛋白质内部的甲硫氨酸不可能被氧化。接近表面且与溶剂接触的甲硫氨酸侧链最有可能被氧化。氧化条件包括热、过渡金属的存在以
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（五）
二硫键测定蛋白质依靠正确的二硫键键合维持其三级结构和生物活性。如果二硫键被还原或交换，则蛋白质会失去天然三级结构和生物活性。HPLC保留值取决于蛋白质“疏水脚”的大小（图41），它会受到三级结构的影响。二硫键的改变通常会使“疏水脚”增大，从而使蛋白质在反相HPLC中的保留值增大。图42中，天然白细胞
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十一）
HPLC-MS 联用的两个重要因素是电喷射接口的最佳流速及三氟乙酸对肽电离的影响 基本电喷雾接口的信号在5~10μL/min的流速区间上迅速下降（图28）。这与采用标准分析型HPLC柱的流速不相容。目前，商用电喷雾提供一种高剪切流氮气辅助的电喷雾（气流辅助电喷雾），它将电喷雾的最佳流速区间提升到了2
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（六）
蛋白质在高温或高pH值下会降解。在胁迫条件下，最有可能发生的化学降解是酰胺侧链上的天冬酰胺转变为天冬氨酸或异天冬氨酸（图37)。天冬酰胺脱去酰氨基时，许多蛋白都会失去生物活性，但也有部分蛋白的生物活性不受影响。即使脱酰胺作用不造成生物活性的减弱，脱酰胺作用也是蛋白接触不利条件的指示。特定天冬酰胺残基
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十七）
选择分离表面。硅胶表面改性所用的化学过程允许多种有机基团附着在硅胶表面。最常见的改性是键合一条十八碳线性脂肪链，形成“C18”柱或ODS柱（图10A）。如图所示，有机氯硅烷与大多数硅烷醇基反应，但仍有部分不反应，这会在硅胶表面形成一层较厚的碳氢化合物层。蛋白质和多肽可以吸附到该碳氢化合物层。C18柱
乙醇难道不会使蛋白质或多肽失活吗
乙醇沉淀蛋白实际上是乙醇在水中的溶解度比蛋白质大，高比例的乙醇和蛋白质争夺水分子破坏了蛋白质表面的水膜，使得蛋白质沉淀下来。实质上此时的蛋白质并未彻底变性，仅仅是失水而已。在重新获得水后还是可以复性的，就和冻干成干粉的蛋白重新溶解到水中是一样的。但这个也不是绝对的，主要是看目标蛋白或者多肽的特性，有
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（四）
柱内径由于样品容量很低，纯化过程很少使用小孔柱（内径小于2mm）。小规模实验室纯化采用细孔柱（内径约2mm）和分析柱（4.6 mm内径）。这种小规模制备分离的色谱条件通常与分析分离的色谱条件相同。需要大量蛋白质/多肽时，采用10mm和22mm内径的柱子。1 mg蛋白质或多肽的纯化可采用10 mm柱子
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十四）
蛋白质/多肽液相分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱（图14）。在梯度洗脱期间，当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时，蛋白质就会从疏水界面上解吸，继续顺着柱向下，从而从柱中洗脱。 图14. 当有机改性剂的浓度达到特定值时，蛋白质从疏水界面洗脱。乙腈。在多肽的反相色谱分离时最
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十六）
选择合适的色谱柱微粒。通过与柱内填充微粒疏水表面的相互作用实现蛋白质与多肽的分离。柱内填充粒通常以硅胶为基础，这是因为硅胶的稳定性高，能够在大多数溶剂条件下（除了pH大于6.5的情况）保持稳定，此外，硅胶可以形成各种大小的具有不同直径的多孔球形颗粒。硅胶纯度。高效液相色谱柱所用硅胶填料的纯度对分离性
蛋白质纯化药物分离
一、根据蛋白质溶解度不同的分离1、蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。2、等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各
结晶（3）
结晶(crystallization)是一种历史悠久的分离技术，是化工、制药、轻工等工业生产常用的精制技术，可从均质液相中获得一定形状和大小的晶状固体。在氨基酸、有机酸和抗生素等生物制品行业，结晶已经成为重要的分离纯化手段。结晶是从液相或气相生成形状一定、分子(原子、离子)有规则排列的晶体的现象。但
结晶－（1）
在化学里面，热的饱和溶液冷却后，溶质以晶体的形式析出，这一过程叫结晶。词语概念基本信息释义：1．物质从液态（溶液或熔融状态）或气态形成晶体。2．晶体，即原子、离子或分子按一定的空间次序排列而形成的固体。也叫结晶体。一般由纯物质生成，具有固定的熔点，旋光度。3．比喻珍贵的成果。例如：劳动的结晶。4。游
结晶（2）
基本含义结晶原理溶质从溶液中析出的过程，可分为晶核生成（成核）和晶体生长两个阶段，两个阶段的推动力都是溶液的过饱和度（结晶溶液中溶质的浓度超过其饱和溶解度之值）。晶核的生成有三种形式：即初级均相成核、初级非均相成核及二次成核。在高过饱和度下，溶液自发地生成晶核的过程，称为初级均相成核；溶液在外来物（
胰岛素增加氮贮留和蛋白质生成
胰岛素可以促进氨基酸转运进肝细胞、骨骼肌和成纤维细胞，还可以增加核糖体的数量和翻译效率。总体而言，这些作用使蛋白质合成增多。胰岛素也抑制蛋白质分解。在人体研究中，利用高胰岛素-正常血糖钳夹技术发现，血清胰岛素浓度的生理性增加可以减少全身蛋白质水解，并且具有剂量依赖性[29]。此现象最多可使蛋白质
离子色谱法测定多肽药物中醋酸根残留
醋酸作为一种重要的原料广泛应用于化工、有机合成、农药、生物医药等行业。在医药行业，醋酸可以作为一种合成原料药，也可以作为一种有机溶媒或者调节pH用。在药品质量控制中，控制有机溶媒的残留是一个重要的环节。有机溶媒的常规的检测方法有气相色谱法、离子色谱法、滴定法、高效液相色谱法、分光光度法、比色法等
关于多肽药物的靶点的基本信息介绍
细胞外分子靶点主要是G蛋白偶联受体（Gprotein-coupledreceptor，GPCR）。GPCR家族是最大的受体家族，已经确定的家族成员大约有800~1000个。GPCR在现代药物开发中占据极其重要的地位，现代药物约50%都是以GPCR为靶点。这些GPCR的共同特点是都有七个跨膜结构域
关于多肽药物的制备—化学合成法的介绍
（1）多肽合成的保护剂 多肽由氨基酸组成，不论是生物体产生的天然多肽还是人工合成的多肽，都有不同氨基酸按照一定的顺序以酰胺键连接而成。酰胺键则有一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基脱去一分水形成。因此，多肽的化学合成重点在于在恰当的位置和时机活化或保护氨基、羧基。多肽的合成包括3个步骤：第1步
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析3
（四）磁性分离法 1975年，Hersh报道了用磁化分离技术分离血清狄高辛放免测定的B、F后，受到了广泛的重视。近年来国内外许多学者对磁化颗粒的制备进行了系统地研究，应用于B与F的分离，并取得了引人注目的进展，使放免的B、F分离不再使用离心，缩短了放免操作时间，便于放免自动化测量。磁性分离的具体
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析2
（二）乳过氧化物酶法（LPO） 本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。 1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2．方法