氯胺T法标记蛋白质/多肽注意事项
(1)放射性碘源的选用:无载体的131I或125I均可用于碘化标记,但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好≥50~100mCi/ml,至少也要>30mCi/ml,否则加入碘源的容量要增加,随着带入碘源中含有的还原剂(为放射性碘源运输保存所需加入)量也增加,这将会显著降低碘利用率及标记蛋白比放射强度。放置较久和放射性碘源,一方面因衰变致比放射强度降低,另一方面因水的辐射化学产物增多(主要是131I源),都会降低标记时的碘利用率。放射性碘源含还原剂(如Na2S2O5等)量多时,会抵消氯胺T的作用,降低碘利用率,甚至导致标记完全失败。放射性碘源要用无载体的,标记所用全部用具和试剂必须不含碘;只要有极少量的碘的污染,非放射性碘就会稀释放射性碘,使放射性碘利用率显著降低。为了便于放射性防护和除污染,以及减少射线对蛋白质分子的损伤,标记投入的放射碘量不宜过大,一般以<5mCi为宜。 ......阅读全文
氯胺T法标记蛋白质/多肽注意事项
(1)放射性碘源的选用:无载体的131I或125I均可用于碘化标记,但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好≥50~100mCi/ml,至少也要>30mCi/ml,否则加入碘源的容量要增加,随着带入碘源中含有的还原剂(为放射性碘源运输保存所需加入)量也增加
蛋白质多肽Iodogen碘化法
1.原理 用Iodogen为氧化剂,对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记,把125I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合,标记后取出样品即停止反应,不使用任何还原剂。 2.方法 (1)标记之前,先把Iodogen溶于有机溶剂,涂于管底,并使之干燥。 (2)标记时,
免疫荧光技术(immunofluorescence-technique)3
思考题 1. 酶联免疫吸附实验的基本原理是什么?常用方法有那些? 2. 间接法和直接法相比各有什么优缺点? 放射免疫测定法—— 125 I 标记技术 放射免疫测定 (radioimmunoassay, RIA) 是将同位分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合,
放射性碘标记
在RIA中,标记抗原质量的优劣,直接影响测定结果,必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原,并保持免疫活性不受丧失。 一、同位素的选择 同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量,这种测量较灵敏而方便,故多用放射性同位素。标记抗原,常用的放射性同位素有3H、14C、1
蛋白质定量实验_胺衍生法
试剂、试剂盒OPA 储存液实验步骤1.于分析前至少 30 min 将 15uL 2-巯基乙醇加人到 5 mL OPA 储存液中, 这一试剂可稳定维持一天。所有荧光样品和相关反应在所有时间内都需要避光。2.蛋白质标准品 (0.2~10 ug/mL) 和未知浓度的待测样品在分析前需要调节 pH 至 8.
酰化试剂(Bolton和Hunter试剂)法
1.原理 用酰化剂3--(4-羟苯基)丙酸—N琥珀酰胺酯(Bolton—Hunter试剂)做连接试剂,将125I标记在羟苯基的2,5位置上,再将琥珀酰胺酯水解,通过一个酰氨键将3--(4—羟基—5—125I—苯基)接在蛋白或多肽的末端氨基上。 2.方法 125I—Bolton—Hunter试剂可用
稳定同位素标记多肽
随着多肽在生物医药领域越来越广泛和深入的应用,标记和修饰性的多肽种类的需求越来越多,质量需求也越来越高。稳定同位素标记就是其中典型的一种。稳定同位素标记示踪,可以实现肽类代谢途径研究,能够随时追踪含有同位素标记的多肽在体内或体外位置及数量的变化情况。同位素标记具有高灵敏度、定位简单、定量准确等优点,
多肽FRET荧光标记技术
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简
蛋白质标记
Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (
简述吗氯贝胺的使用注意事项
1、肝、肾功能严重不全者慎用。 2、本品禁止与其他抗抑郁药物同时使用,以避免引起高5-羟色胺综合征的危险。 3、使用中枢性镇痛药(哌替啶、可待因、美沙芬)、麻黄碱、伪麻黄碱或苯丙醇胺患者禁用本品。 4、患者有转向躁狂发作倾向时应立即停药。 5、用药期间不宜驾驶车辆、操作机械或高空作业。
蛋白质、多肽提取分离
1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方
蛋白质、多肽提取分离
1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物
氯硝柳胺
性状本品为淡黄色粉末本品在乙醇、三氯甲烷或乙醚中微溶,在水中几乎不溶。熔点本品的熔点(通则0612)为228~232℃。鉴别(1)取本品约50mg,加盐酸溶液(9→100)5ml与锌粉0.1g,置水浴上加热10分钟,放冷,滤过;滤液中加亚硝酸钠试液0.5ml,摇匀,放置10分钟,加2%氨基磺酸铵溶液
关于双氯非那胺的注意事项介绍
1、询问病人有否磺胺过敏史,不能耐受磺胺类药物或其他磺胺衍生物利尿药的患者,也不能耐受本品。 2、与食物同服可减少胃肠道反应; 3、下列情况应慎用: (1)因本品可增高血糖及尿糖浓度,故糖尿病患者应慎用; (2)酸中毒及肝、肾功能不全者慎用。 4、对诊断的干扰: (1)尿17-羟类固
使用吗氯贝胺片的注意事项介绍
1.肝、肾功能严重不全者慎用。 2.本品禁止与其它抗抑郁药物同时使用,以避免引起“高ECTkey=5-羟色胺 target=_blank>5-羟色胺综合症”的危险。 3.使用中枢性镇痛药(度冷丁、可待因、美沙芬)、麻黄碱、伪麻黄碱或苯丙醇氨患者禁用本品。 4.患者有转向躁狂倾向时应立即停药
使用甲氧氯普胺片的注意事项
1.醛固酮与血清催乳素浓度可因甲氧氯普胺的使用而升高; 2.严重肾功能不全患者剂量至少须减少60%,这类患者容易出现锥体外系症状; 3.因甲氧氯普胺片可降低西咪替丁的口服生物利用度,若两药必须合用,间隔时间至少要1小时; 4.甲氧氯普胺片遇光变成黄色或黄棕色后,毒性增高。
使用甲氧氯普胺的注意事项介绍
1、主要副作用为镇静作用,可有倦怠、嗜睡、头晕等。其它有便秘、腹泻、皮疹及溢乳、男子乳房发育等,但较为少见。 2、本品大剂量或长期应用可能因阻断多巴胶受体,使胆碱能受体相对亢进而导致锥体外系反应(特别是年轻人)。主要表现为帕金森综合征,可出现肌震颤、头向后倾、斜颈、阵发性双眼向上注视、发音困难
多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操
多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操
免疫球蛋白标记技术_125I标记单克隆抗体技术
实验方法原理氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。实验材料McAb125I试剂、试剂盒磷酸缓冲液氯胺
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析第一节 概述 1960年,美国学者Yalow 和Berson 创立了放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA),并首先用于糖尿病人血浆中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破,开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法
多肽和蛋白质的区别
多肽和蛋白质的区别,一方面是多肽中氨基酸残基数较蛋白质少,一般少于50个,而蛋白质大多由100个以上氨基酸残基组成,但它们之间在数量上也没有严格的分界线,除分子量外,还认为多肽一般没有严密并相对稳定的空间结构,即其空间结构比较易变具有可塑性,而蛋白质分子则具有相对严密、比较稳定的空间结构,这也是蛋白
多肽和蛋白质的区别
一方面是多肽中氨基酸残基数较蛋白质少,一般少于50个,而蛋白质大多由100个以上氨基酸残基组成,但它们之间在数量上也没有严格的分界线,除分子量外,还认为多肽一般没有严密并相对稳定的空间结构,即其空间结构比较易变具有可塑性,而蛋白质分子则具有相对严密、比较稳定的空间结构,这也是蛋白质发挥生理功能的基础
自动多肽/蛋白质测序仪
2007年实验室对蛋白质测序仪的需求 Edman降解法是测定蛋白质序列的经典方法,该方法由瑞士生物化学家佩尔·维克托于1950年创立。Edman降解法通常是以周期的形式来表征。对于一个完整的周期,异硫氰酸苯酯标记上指定肽段的N末端,环化,之后被标记的氨基酸在酸性条件下从肽链中游离出
蛋白质和多肽的区别
分子量:蛋白质的分子量通常大于多肽。蛋白质是由多个多肽链通过肽键连接而成的大分子,而多肽通常由少于50个氨基酸组成。 结构:蛋白质具有三维空间结构,包括一级结构(氨基酸序列)、二级结构(α-螺旋和β-折叠)、三级结构(整个蛋白质的三维形状)和四级结构(多个蛋白质亚基的组合)。多肽通常没有这些复
多肽与蛋白质的区别
多肽:通常由10~100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽,它们的分子量低于10,000Da(Dalton,道尔顿),能透过半透膜,不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。也有文献把由2~10个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽);10~50个氨基酸组成的肽称为多肽;由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。蛋
氯酚胺试验意义
氯�酚胺是一种人工合成的弱雌激素,能在下丘脑水平竞争雌二醇受体,由于阻断雌二醇的反馈作用,从而增加LRH释放,激发垂体前叶释放促性腺激素。此试验主要用来判断下丘脑和垂体功能的完整性。 【参考值】 服药后第7天血LH增加50%,FSH增加20%,睾酮增加30%. 【临床意义】 性功能低下病变在下丘脑
氯酚胺试验意义
氯�酚胺是一种人工合成的弱雌激素,能在下丘脑水平竞争雌二醇受体,由于阻断雌二醇的反馈作用,从而增加LRH释放,激发垂体前叶释放促性腺激素。此试验主要用来判断下丘脑和垂体功能的完整性。【参考值】服药后第7天血LH增加50%,FSH增加20%,睾酮增加30%.【临床意义】 医学教育网搜|集整理性功能低下
氯硝柳胺片
性状本品为淡黄色片。鉴别取本品1片的细粉,加乙醇25ml,加热煮沸,放冷,滤过,滤液置水浴上蒸干;残渣照氯硝柳胺项下的鉴别(1)、(2)、(4)项试验,显相同的反应。含量测定取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于氯硝柳胺0.3g),照氮测定法(通则0704第一法)测定。每1ml硫酸滴定
关于盐酸甲氧氯普胺的使用注意事项
1、盐酸甲氧氯普胺的注意事项: ⑴ 对晕动病所致呕吐无效。 ⑵ 醛固酮与血清催乳素浓度可因甲氧氯普胺的使用而升高。 ⑶ 严重肾功能不全患者剂量至少须减少60%,这类患者容易出现锥体外系症状。 ⑷ 静脉注射甲氧氯普胺须慢,1~2分钟注完,快速给药可出现躁动不安,随即进入昏睡状态。 ⑸ 因