湖北农科院用CRISPR制备基因敲除克隆猪
来自湖北省农科院畜牧兽医研究所、河南科技大学和中科院水生生物研究所的研究人员，用CRISPR/Cas9系统和Cre/LoxP，敲除了猪初生细胞中肌生成抑制蛋白（MSTN）的一个等位基因，制备了无选择标记的MSTN基因敲除克隆猪。相关研究结果发表在8月17日的《Scientific Reports》杂志。湖北省农科院畜牧兽医研究所的郑新民研究员和河南科技大学动物科学学院的董发明教授，是本文共同通讯作者。 可预测的、无污染的转基因家畜，对于可靠的表型和生物安全，都是很重要的。因为不想要的序列的引入，如SMGs（选择标记基因），已经引起了公众对于食品安全、生物多样性和农业生态系统的强烈担忧。SMGs经常用于细胞介导的转基因，使我们能够分离出转基因细胞。但是一旦操作完成，它们在从这些细胞制备而来的GM家畜中，就没有任何价值，相反，残留在家畜中的SMGs还可能成为一种负担。 有几种方法可以用来制备无SMG的转基因家畜。然而，到目前......阅读全文
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。 据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发生密切相关的生物
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发生密切相关的生物学过程，
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
科技日报讯 肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。 据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发
一步生成条件性基因敲除小鼠ESC
最近发展的基因组编辑工具，包括转录激活因子样效应物核酸酶（TALENs）和CRISPR/Cas9，使我们能够通过诱导双链断裂（DSBs）的非同源末端连接（NHEJ）修复，快速而有效的敲除靶向基因。然而，这种方法不能进行必需基因的功能研究，这类研究通常采用的策略是基于Cre-LoxP系统的条件性基
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因敲除简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因靶向的基因敲除
实验步骤构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染
控制基因敲除法
【探针技术用于检测由siRNA介导的基因调制】 为了研究基因功能，科学家们常常会有针对性地关断某些特定的基因。 而要验证这种基因沉默的有效性, 就需要运用适当的具特异性的检测方法。理想的检测方法不仅要测量准确, 而且还要能让细胞保持完好无损。 利用诸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技术简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
什么是基因敲除？
基因敲除(gene knock-out)是利用细胞染色体DNA可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质，使特定靶基因失活，以研究该基因的功能.基因敲入(gene knock-in)是通过同源重组用一种基因替换另一种基因，以便在体内测定它们是否具有相同的功能，或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达
基因敲除技术简介
基因敲除是一种遗传工程技术，是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除技术克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理
基因敲除技术简介
动物实验和实验动物都要求达到实验室操作规范（good laboratory practice, GLP）和标准操作程序（standard operating procedure, SOP）这些规范和操作对实验动物和实验室条件，工作人员素质，技术水平和操作方法都要求标准化。所有药物的安全评价试
基因敲除的定义
基因敲除(geneknockout),是指对一个结构已知但功能未知的基因,从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体观察实验动物,推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。基因敲除可中止某一基因的表达外,还包括引入新基因
简述p53基因的抑制肿瘤血管生成作用
肿瘤生长到一定程度后，可以通过自分泌途径形成促血管生成因子，刺激营养血管在瘤体实质内增生。P53蛋白能刺激抑制血管生成基因Smad4 等表达，抑制肿瘤血管形成。在肿瘤进展阶段，P53基因突变导致新生血管生成，有利于肿瘤的快速生长，常是肿瘤进入晚期的表现。
《科学》子刊：运动会诱导骨骼肌表预防、逆转胰岛素抵抗
现代社会中胰岛素抵抗和2型糖尿病等代谢疾病的流行，与人体力劳动和运动的普遍缺乏密切相关。然而，运动的缺乏在2型糖尿病病理生理中的作用，以及运动如何改善胰岛素抵抗，仍困惑着广大医学研究人员。 前不久，国际顶级期刊《科学》子刊Science Advances公布了澳大利亚莫纳什大学Tony Tig
肿瘤治疗新手段－研究用基因靶向抑制肿瘤血管生成
日前，5名罹患肝癌和大肠癌放、化疗效果不佳的患者，在第三军医大学大坪医院肿瘤中心接受基因靶向放、化疗后，经检验肿瘤血管明显得到抑制。这项以基因APE1为靶点的放、化疗治疗手段，首开继手术、放疗、化疗以外的肿瘤治疗先河，或可成为治疗新途径。 分子靶向治疗针对肿瘤发病机制中的关键分子和关键事件
基因敲除的技术路线
基因敲除的技术路线如下:(1)构建重组基因载体﹔(2)用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔(4)将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物,对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。
基因敲除技术的分类
基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除（又称不完全基因敲除）两种。完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性，条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。噬菌体的Cre/LoxP系统、Gin/Gix系统、酵母细胞的FLP/FRT系统和R/RS系统是现阶
基因敲除的技术应用
基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。近年来，牛、羊、猪、猴等大型哺乳动物实现了基因敲除。但由于狗的生殖生理较为特殊，基因敲除狗的培育难度大为增加，狗基因组的定点修饰一直未获成功。针对这一问题，研究团队设计了一个自体移植的策略，
基因敲除技术概述（二）
2.1.2条件性基因敲除法条件性基因敲除法可定义为将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因敲除方法[2]。它实际上是在常规的基因敲除的基础上，利用重组酶Cre介导的位点特异性重组技术，在对小鼠基因修饰的时空范围上设置一个可调控的“按钮”，从而使对小鼠基因组的修
基因敲除技术概述（一）
1．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成
条件基因敲除的定义
中文名称条件基因敲除英文名称conditional gene knockout定 义使靶基因在特定细胞类型或者特定发育阶段完全丧失功能的实验技术。应用学科遗传学（一级学科），发育遗传学（二级学科）
基因敲除的实验步骤
构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染色体靶位
基因敲除技术概述（三）
2.1.2.2 诱导性基因敲除法诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性
基因敲除的实验步骤
实验步骤构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染
基因敲除技术概述（四）
[13]。2.3.2 RNAi基因敲除的优点及应用①.比用同源重组法更加简便，周期大大缩短。②.对于哺乳动物，如对于一些敲除后小鼠在胚胎时就会死亡的基因，可以在体外培养的细胞中利用RNAi技术研究它的功能。③.由于RNAi能高效特异的阻断基因的表达，它成为研究信号传导通路的良好工具。④.RNAi还被
RNAi引起的基因敲除
RNAi引起的基因敲除：由于少量的双链RNA就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中，所以RNAi的反应过程也可以用于基因敲除。
基因敲除的操作步骤
利用基因打靶技术产生转基因动物的程序一般为：获得干细胞基因敲除一般应用于鼠，而最常用的鼠的种系是129及其杂合体，因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物。而其他遗传背景的胚胎干细胞系逐渐被发展应用，来自于C57BL/6×CBN/JNCrjF1小鼠的胚胎干细胞系成
基因敲除常见方法
一、常规基因敲除鼠（Conventional Knockout）常规基因敲除是通过基因打靶，把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette 替换掉。这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。此类基因敲除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基