研究报道首个病毒RdRP转位中间体晶体结构
核酸聚合酶是核酸生物合成的分子机器,是实现核酸遗传信息复制和传递的关键蛋白。在模板序列的指导下,聚合酶以NTP或dNTP为底物将单磷酸核苷(NMP)逐个添加到产物链上。每一次添加过程又称核苷酸添加循环(nucleotide addition cycle或NAC),由底物结合并诱导活性中心关闭、磷酰基转移反应以及聚合酶向模板下游转位三个主要步骤构成,其分子机制是聚合酶领域的核心研究内容。 RNA病毒对人类健康构成严重威胁,超过三分之二的传染性疾病由RNA病毒引起,这类病毒的基因组复制和基因转录由依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase 或 RdRP)执行。前期研究表明,RdRP与DNA聚合酶、依赖DNA的RNA聚合酶、反转录酶等其他主要类型的聚合酶相比,在活性中心关闭和转位这两个关键步骤上具有鲜明的独特性,解析其精确机制将对相关抗病毒研究提供重要依据。中国科学院武汉病毒研究所龚鹏研......阅读全文
定量聚合酶链反应
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应,对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
DNA聚合酶的应用
E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA损伤修复,在半保留复制中起辅助的作用。DNA polⅡ在修复损伤中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一种多亚基的蛋白质,在DNA新链的从头合成中起复制酶的作用。复制的忠实性问题会影响到翻译的精确性,这种忠实性主要依赖于碱基的特异性配对。据估计每个碱基对将有
DNA聚合酶的发现
在50年代的中期,A. Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用,于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了达到这个目的,他们分离的蛋白,然后加到体外合成系统中即 同位素标记的dNTP、Mg2+及模板DNA,经过大量的工作,于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ(
DNA聚合酶的缺点
缺点无3'→5'阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
RNA聚合酶的特点
RNA聚合酶催化RNA的合成,其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点:①以DNA为模板;②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸;③聚合反应是核苷酸形成3’,5’一磷酸二酯键的反应;④以3’→5’方向阅读模板,5’→3’方向合成核酸;⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
RNA聚合酶的作用
RNA聚合酶(RNA polymerase)的作用是转录RNA。有的RNA聚合酶有比较复杂的亚基结构。如大肠杆菌RNA聚合酶有四条多肽链,另有一个促进新RNA分子合成的σ因子,因此它的组成的是α2ββσ。这种结构称为全酶(holoenzyme),除去了σ因子的酶称为核心酶。噬菌体RNA聚合酶则没
聚合酶的功能特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5
聚合酶的分类介绍
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);D
聚合酶链[式]反应
中文名称聚合酶链[式]反应英文名称polymerase chain reaction;PCR定 义通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
DNA聚合酶的功能
1)通过核苷酸聚合反应,使DNA链沿5’→3’方向延长(DNA聚合酶活性)[1] 2)催化由3’端水解DNA链(3’→ 5’核酸外切酶活性,用于切除错配的碱基)[1] 3)催化由5’端水解DNA链(5’→ 3’核酸外切酶活性,用于切除引物)[1] 4)催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解
RNA聚合酶的结构
为什么细菌的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多,仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明,噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌
DNA聚合酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3'末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
关于聚合酶的介绍
1957年,美国科学家阿瑟·科恩伯格(Arthur Kornberg)首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶,这种酶被称为DNA聚合酶I(DNA polymerase I,简称:Pol I)。1970年,德国科学家罗尔夫·克尼佩尔斯(Rolf Knippers)发现DNA聚合酶II(Pol II)。随
DNA聚合酶及其应用
(一)大肠杆菌DNA聚合酶I是Kornberg A. 1956年首先从大肠杆菌E。Coli 细胞中分离出来的。它是一种多功能性的酶,包括 3种不同的酶活力:5′→ 3′聚合酶活性(模板, 带3′-OH游离基团的引物、4dNTPs、 Mg2+ )。双链特异性的5'→3'核酸外切酶活性。
DNA聚合酶的定义
真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α(定位于胞核,参与复制引发,不具有5'-3'外切酶活性及3'-5'外切酶活性,有5'-3'聚合酶活性),β(定位于核内,参与高保真度复制,不具有5'-3'外切酶活性,其中疑似存在5
耐热DNA聚合酶简介
耐热DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶):1969年人们从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出一种嗜热的水生真菌Thermusaquaticus,能在70~ 75C生长,从该菌分离纯化得到一种耐热的、依赖DNA 的DNA 聚合酶,简称Taq DNA 聚合酶。 耐热DNA聚合酶是一种可抗高温
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶(DNA polymerase)是 细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、 引物、dNTP 等的情况下)及其相辅的活性。 真核细胞有5种DNA
反向聚合酶链反应
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
聚合酶的基本特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5
RNA聚合酶的类别
通常可根据生物的类别,将RNA聚合酶分为原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特点,但在结构、组成和性质等方面又不尽相同。(1)原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大肠杆菌RNA聚合酶。该酶是由五种亚基组成的六聚体(α2ββ'ωσ)分子量约500
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多种,E.coli就有三种。通常DNA聚合酶具有以下共同特点: ①需要DNA模板,因此这类酶又称为依赖DNA的DNA聚合酶;②需要RNA或DNA作为引物(primer),即DNA聚合酶不能从头催化; ③催化dNTP加到引物的3'-OH末端,其速率为1000nt/min,因而DN
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20亿元!年产30万吨NMP项目有新进展
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