聚合酶链[式]反应
中文名称聚合酶链[式]反应英文名称polymerase chain reaction;PCR定 义通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)......阅读全文
聚合酶链[式]反应
中文名称聚合酶链[式]反应英文名称polymerase chain reaction;PCR定 义通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
聚合酶链[式]反应的定义
中文名称聚合酶链[式]反应英文名称polymerase chain reaction;PCR定 义通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
何谓巢式聚合酶链反应?
巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction, nPCR)也称套式PCR。在这种技术中,首先用一对外引物进行第1轮PCR,然后再使用第1对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增,所以称为巢式PCR。由于使用了两对引物并且进行了两轮扩增反应,因此试验的
关于聚合酶连式反应的简介
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction PCR) 又称为无细胞克隆系统或特异性DNA 序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。PCR 是利用单链寡核苷酸引物对特异DNA 片段进行体外快速扩增的一种方法。该反应是一个指数式反应,可在短时间内使极微量的目
PCRSSCP(聚合酶链反应单链构象多态)实验步骤
一. 样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析,设定引物,引物长度18-21个碱基,扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为 10
什么是聚合酶链反映
聚合酶链式反应(PCR)是20世纪80年代后期由K.Mullis等建立的一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。由于反应循环可进行一定次数,所以在短时间内即可扩增获得大量目的基因。 PCR技术具有灵敏度高、
关于聚合酶连式反应的操作体系介绍
(1)模板:其中包含有目的基因片段,PCR反应的模板是待检测核酸(DNA或RNA)分子,双链DNA可直接用于反 应,而RNA则需要用反转录酶反转录成为cDNA,然后用作聚合酶反应的模板。 (2)DNA聚合酶:最初的聚合酶链反应是用DNA聚合酶I的Klenow片段或T4DNA聚合酶催化的。但是由
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术,其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的,借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)
聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序为:
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)
聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本
应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术的介绍
根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction,nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100~1000倍,可检
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个,另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科)
聚合酶链反应的反应特点
特异性强PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模
聚合酶链反应PCR反应体系
PCR是20世纪80年代由美国西特斯公司的一批科学家、技术人员和商人发明的,主要发明者凯利·穆利斯(Kary Mullis)因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。其他科学家和技术人员,包括厄立克(Henry Erlieh)、安海姆(Norman Arnheim)、才木(Ran—daliSaiki)、霍
反向聚合酶链反应
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
定量聚合酶链反应
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应,对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
聚合酶链式反应
实验方法原理 实验材料 热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒 扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20
聚合酶链反应原理介绍
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最
口蹄疫聚合酶链反应(PCR)
20世纪90年代初,PCR技术日趋成熟,也渗入到FMD的诊断中。这一技术特异性强,灵敏度高,可检测多种组织样品,检测病毒RNA的PCR方法已经成为FMDV检测方法中的一种,PCR方法具有极高的灵敏度(其理论值为一个病毒粒子的核酸),因为它仅需要极少量的反应模板,而且可以设计多循环PCR反应。由于仅
聚合酶链式反应
一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/L,pH 8.0)2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶4. 核苷酸与寡聚核苷酸旁观者 DNA正向引物(20 μmol/L)及
反向聚合酶链反应技术
我们描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法,使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA,以产生适合于PCR扩 增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列,但其方向性,使链的延长经过环上的未知区而不是
什么是聚合酶链反应?
聚合酶链反应或多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等
聚合酶链反应的过程
标准的PCR过程分为三步:DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′
聚合酶链式反应
实验方法原理实验材料热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/
聚合酶链式反应(PCR)反应特点
特异性强PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)-实验方法
聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP) 聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来
聚合酶链式反应(PCR)反应的控制
反应的控制PCR反应的缓冲液 提供合适的酸碱度与某些离子镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高,常用1.5mmol/L底物浓度 dNTP以等摩尔浓度配制,20~200umol/LTaqDNA聚合酶 2.5U(100ul)引物 浓度一般为0.1 ~ 0.5umol/L反应温度和循环次数变性温度和时间
聚合酶链式反应(PCR)的反应原理
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变
聚合酶链式反应(PCR)反应五要素
PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。
PCR(聚合酶链式反应)的反应原理
【原理】 PCR(polymerase chain reaction)用于在体外将微量的目标DNA大量扩增,以便进行分析。反应体系:①样品DNA;②引物(primer),是人工合成的一对寡核苷酸链(约15-20个核苷酸),用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域;③4种dNTP;④Tag