华中科技大学PNAS文章：首个不需引物的DNA聚合酶
长久以来公认DNA聚合酶不能仅以核苷酸底物从头合成DNA，必须要在一段特定长度的DNA或RNA引物末端开始聚合DNA。而来自华中科技大学，哈佛大学，日本地球海洋科技局的研究人员近期发现了自然界已知的第一个不需要引物的DNA聚合酶，这不仅在聚合酶进化研究中有重要意义，而且还蕴藏了在核酸合成和测序技术中的应用价值。 这一研究成果公布在3月7日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志上，文章的通讯作者为华中科技大学朱斌教授，朱教授研究组主要致力于发现新颖奇特的微生物核酸代谢酶并开发相关的核酸生物技术和工具酶。尤其关注海洋中的新颖微生物及其核酸代谢酶，课题视角独特，自由度大，基础与应用并重。 作为遗传信息准确传递的最重要分子，DNA聚合酶一向是分子生物学研究的热点，也是生物技术的明星分子（PCR、DNA测序等技术的核心工具）。长久以来公认DNA聚合酶不能仅以核苷酸底物从头合成DNA，必须要在一段特定长度的DNA或RNA引物末端开......阅读全文
耐热DNA聚合酶的选择指南
耐热DNA聚合酶特点：合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DNA聚
耐热DNA聚合酶的应用介绍
DNA序列测定中应用的耐热DNA聚合酶 1.Promega公司测序级TaqDNA聚合酶 是在TaqDNA聚合酶的基础上对它进行修饰,去除5'-3'外切酶活性,保证测序记过的高度准确性,可产生强度均一的测序条带,背景清晰。 2.Bca Best DNA 聚合酶 从Bacil
聚合酶链反应构建重组DNA
基本方案 实验方法原理 利用聚合酶链式反应（PCR），任何两个DNA片段可连接成一个新的重组DNA分子。通过在PCR引物中引入的额外非同源的核苷酸，可在连接处
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA聚合酶 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
耐热DNA聚合酶的选择指南
一、耐热DNA聚合酶特点合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热 DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DN
关于DNA聚合酶的历史简介
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用，于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了达到这个目的，他们分离的蛋白，然后加到体外合成系统中即 同位素标记的dNTP、Mg2+及模板DNA，经过大量的工作，于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ（
PCR技术（三）：Taq－DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的.(一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比
DNA聚合酶作用部位及功能
DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3’→5’'外切酶活
聚合酶链反应构建重组DNA
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材 电泳仪离心机PCR仪实验步骤 1. 制备模板DNA，如DNA不是经氯化铯梯度纯化的，100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物，若PCR产物要进行平端克隆，就应该对引物的5’端羟基进行磷酸化处理。 图一
T4－DNA聚合酶实验
T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性，同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。实验材料DNA试剂、试剂盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材水浴锅实验步骤一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，p
T4－DNA聚合酶实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、50 μl 反应体积：（1）50 mmol/l Tris·Cl，pH8.0（2）5 mmol/l MgCl2（3）5mmol/l DTT（4）100 μmol/l 4dNTP混合液（5
DNA聚合酶及DNA连接酶的功能和区别
DNA聚合酶，以已有的核酸序列作为模板，将4种脱氧核苷酸（A、T、G、C）按照模板的碱基排列顺序，以“碱基互补原则”依次连接，聚合成为一条新的DNA链。 DNA连接酶，是将DNA片段上的缺刻连接起来的酶。 一、DNA聚合酶 （一）DNA聚合酶I DNA聚合酶I（DNA pol
Pfu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶，兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Tth－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶，有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
T4DNA聚合酶的用途
(1)利用取代合成反应制备探针(2)标记具有平末端的或具有3’－隐蔽末端的DNA片段利用较强的3 ′→ 5 ′外切酶活性和 5′→3′聚合活性(3)用于DNA序列分析
Vent－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶，有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（
Mlu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Pfu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶，兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
DNA聚合酶外切酶活性─校对作用
外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA 生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有 聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明
DNA聚合酶与复制的保真性
DNA复制的保真性是遗传信息稳定传代的保证。生物体至少有3种机制实现保真性：①遵守严格的碱基配对规律；②5’—3’聚合酶活性中心对底物的选择，使核苷酸的错配率仅为10-4~10-5；③3’—5’外切酶活性中心在复制出错时的即时校对，使错配率降至10-6~10-8。
大肠杆菌DNA聚合酶的介绍
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ）这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶，又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 ⑴理化性质：纯化的DNApolⅠ由一条 多肽链组成，约含1000个 氨基酸残基，
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
DNA聚合酶的特性、用途和缺点
特性良好的热稳定性;70℃ 2h，残留90%活性;93℃ 2h，残留60%活性;94℃ 2h，残留40%活性。5'→3'聚合酶活性，对dATP有优先聚合活性;5'→3'外切酶活性;无3'→5'外切酶活性。用途聚合酶链反应(polymerase chai
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
T7－DNA聚合酶测序技术
一、概述T7 DNA聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA聚合酶用适当方法处理后，可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA聚合酶又称T7测序酶。使用T7测序酶得到的测序数据具有在每个碱
关于DNA聚合酶I的基本介绍
DNA聚合酶I（DNA-pol I），分子量109kD，为单肽链组成，400分子数/细胞，是原核生物的DNA聚合酶，由于发现最早命名为DNA聚合酶I，其他原核生物的DNA聚合酶，按发现的先后顺序分别命名为DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶Ⅴ。
关于DNA聚合酶I的功能简介
1）通过核苷酸聚合反应，使DNA链沿5’→3’方向延长（DNA聚合酶活性） 2）催化由3’端水解DNA链（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除错配的碱基） 3）催化由5’端水解DNA链（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物） 4）催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解 5）催化无机焦磷酸
Vent－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶，有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（
Mlu－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
Tth－DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶，有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）