【分享】siRNA转染成功的主要关键
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素，细胞转染实验中经常会遇到siRNA转染，下面介绍一下siRNA转染成功的主要关键点。图片来源于网络 1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉 默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。 2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度 siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。 3.选择......阅读全文
国际ZLRFect小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂使用说明
介绍 RFect小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株
RFect原代细胞小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂使用说明
RFectPM原代细胞小核酸转染试剂（RFect原代细胞小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂） 货 号：BIOG-11014: 0.5ml BIOG-11015
单核细胞小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂使用说明
RFectMN单核细胞小核酸转染试剂 货 号：BIOG-11024: 0.5ml BIOG-11025: 1.0ml BIOG-11026: 1.5m
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至
siRNA－转染程序
A．siRNA转染的方法 哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（例如,显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面：1. 转染试剂的用
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
如何优化GenMuteTM转染试剂，提高siRNA/DNA共转染效率？
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。siRNA/DNA共转染时，siRNA的最佳浓度范围是0.5ηM到10ηM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”，切勿使用超过20ηM的siRNA。以24孔板为例，如下步骤将对如何优
siRNA体外转染——GenMuteTM－siRNA体外转染的优化
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。最佳的siRNA浓度范围是1.0nM到10nM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”。我们实验室已经使用GenMuteTM转染试剂成功敲除了内源表达的生长因子。以24孔板为例，如下步
siRNA的转染方法
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关
siRNA的转染方法
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞 中的方法主要有以下几种：1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞 膜并通过胞饮进入目的细胞 的细胞 质。沉淀物的大小和质量对
hepg2细胞siRNA转染条件
之前我们用过Lipo，说明书上要求细胞的密度在70%左右，同时在转染后的4-6小时注意要换培养液，后来我们实验室换了RFect sRNA Transfection Reagent，细胞密度在45%左右 ,设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度最好做2个复孔，一
RNAi及siRNA转染相关实验攻略
RNAi 是一种高效的特异性强的基因表达抑制，应用RNAi生物学机制进行基因功能研究已经成为一种创新性的新方法，人们第一次可以如此快速和方便地抑制细胞中特定基因的表达水平，从而用于分析特定基因在细胞中的功能。RNAi 技术还为新药开发、疾病治疗提供了创新性的方法和途径，有着极其广阔的应用前景。转染是
【分享】siRNA转染成功的主要关键
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素，细胞转染实验中经常会遇到siRNA转染，下面介绍一下siRNA转染成功的主要关键点。图片来源于网络 1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。si
转染试剂：Roche
转染试剂：Roche[选购宝典]现转染市场多个新产品涌现而出，一些旧产品更弦易主。一提起罗氏的转染试剂，大家肯定立马想到Fugene 6/HD。即使Fugene 6/HD不在手，罗氏也毫不畏惧，因为它集合二十年的转染经验，推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP转染试
各种转染试剂的中文转染方法
FuGENE6（Roche）转染步骤： 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血
如何优化PolyJet转染试剂？
我们使用PolyJet DNA转染试剂转染表皮细胞及Raw267.4细胞非常有效，并且毒性很小。对于如何更好的优化PolyJet转染试剂，我乐意分享以下几点：1、DNA的质与量。DNA的纯度对于转染实验至关重要。由E Coli制备的DNA，A260/280必须达到1.80甚至更高。对于6孔板，通常每
关于转染试剂的简介
哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。 将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染
RNA转染试剂的对比
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下：实验方法转染试剂：Turbofect transfection reage
siRNA实验成功要点
1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA序列 为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA应根据mRNA低二级结构的区域设
siRNA实验成功的十个要点
1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA 序列为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA 靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA 应根据mRNA 低二级结构
细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA，RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物
细胞转染率低－转染试剂要全背锅吗？
细胞转染低都是PCR试剂的问题吗？PCR纯度不够确实会有这样的问题，所以选择PCR试剂很重要 主要还是以下几点影响：1. 其他微生物污染您觉得您养的细胞 ，不，不，不 ，可能您只知道您养的是细胞，你不知道的是您的细胞可能背着您养了一群小三，比如支原体，病毒，黑胶虫等等，特别是支原体它可以更改细胞的特
细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA，RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物
原代细胞转染小核酸siRNA等操作步骤和注意事项
原代细胞相对普通传代细胞要难转染，但用对了试剂一样可以拥有很高的转染效率和实验结果，下面以RFect为例，简单介绍下原代细胞转染的操作步骤和注意事项。原代细胞转染操作步骤（以24孔培养板为例）：A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50
RNAi－实验介绍
1. RNAi 介绍 RNA 干扰（RNAi:RNA interference）是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在线虫实验中发现的，2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导
RNAi－实验介绍
1. RNAi 介绍RNA 干扰（RNAi:RNA interference）是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在线虫实验中发现的，2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导。这个方法与常规方
DNA体外转染试剂_如何准备转染所需的质粒DNA
转染效率受到诸多因素的影响，除了细胞、培养基和载体等影响因素外，另外一项非常重要的因素便是DNA的质量。为了比较不同厂家的转染效率，我们分别从三家不同的供应商购买了质粒制备试剂盒来制备pEGFP-N3质粒DNA，并通过不同的方法将制备的pEGFP-N3质粒转运至NIH-3T3细胞。pEGFP-N3质
siRNA对照解析
A．普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照；2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照；3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性；4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。 B．荧光标记阴性对照 1. R
Lipofectamine™2000转染Stealth™－RNA或者siRNA进入哺乳动物细胞
前言Lipofectamine™ 2000试剂是一项ZL配方，用于高效转染Stealth™ RNA或者短的干扰RNA（siRNA）到哺乳动物细胞，以进行RNAi分析（1，2）。该说明书提供了一般的指导以及使用Lipofectamine™ 2000转染Stealth™ RNA或者siRNAj进入哺乳动
RNAi实验原理与制备方法（二）
3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录