Amersham2DPAGE中文版
目录第一章 样品制备 21.1 一般性原则 &nb......阅读全文
蛋白质电泳
蛋白质电泳(主要内容如下)One-Dimensional SDS-PAGETwo-Demensional SDS-PAGEProtein Electrophoresis in Agarose Gel Gel StainingRecipesOne-Dimensional SDS-PAGE·
2D-胶的上样量的范围
上样量和样品有关。样品内蛋白种类多的上样量要大些,这样每个点才有足够的量被检测到。一般的全细胞裂解体系,上样量大概在 100 微克(银染)到 500 微克(考染)之间。
2D胸透检测长期新冠的影响
对于患有新型冠状病毒挥之不去的呼吸道症状的患者来说,胸部 X 光片只能显示这么多。二维 (2D) 扫描根本无法区分受损的肺功能。对于该诊断,需要一种称为 CT 扫描的更昂贵的三维 (3D) 技术。 然而,美国的许多医疗诊所都没有 CT 扫描设备,导致所谓的长期 COVID 患者几乎没有关于其肺
Analysis-of-Proteins-using-Small-Format-2D-Gel-Electrophoresis
Preparation of protein samplesIntracellular virus proteinsThe following method has been developed principally for the analysis of intracellular protei
SDSPAGE胶的干燥
凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形,但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量,因此,应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态,使其真空压力波动极少。(1)试剂与配制:固定液:冰醋酸:甲醇:水(10:20:70)(2)电泳后的凝胶用
SDSPAGE的影响因素
1. 带电颗粒的性质净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多,直径小而且近于球状,则泳动速度快,反之则慢。 2. 电场强度(电位梯度)指单位长度(cm)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压(常压)电泳100—500V,
SDSPAGE检测蛋白表达
一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪等;蛋白Mark。
SDSPAGE的影响因素
1. 带电颗粒的性质 净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多,直径小而且近于球状,则泳动速度快,反之则慢。 2. 电场强度(电位梯度) 指单位长度(cm)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压
SDSPAGE的操作步骤
(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。(主要分为浓缩胶和分离胶,配方可自己上网查下)(2) 样品处理在收集
Tricine-SDSPAGE实用方案
Tricine-SDS-PAGE是用于分离分子量在1-10kD的肽类用的。一、 试剂配制:1. Low Bis acrylamide(49.5% T, 3% C)Acylamide 48.0gBis 1.5gWater make up to 100ml2. High Bis acrylamide (
SDSPAGE的影响因素
1. 带电颗粒的性质净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多,直径小而且近于球状,则泳动速度快,反之则慢。2. 电场强度(电位梯度)指单位长度(cm)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压(常压)电泳100—500V,电
SDSPAGE实验方法
试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰
粗糙度仪Surtronic-25-操作手册
测量工件表面粗糙度时,将传感器放在工件被测表面上,由仪器内部的驱动机构带动传感器沿被测表面做等速滑行,传感器通过内置的锐利触针感受被测表面的粗糙度,此时工件被测表面的粗糙度引起触针产生位移,该位移使传感器电感线圈的电感量发生变化,从而在相敏整流器的输出端产生与被测表面粗糙度成比例的模拟信号,该信号经
Scout-Pro便携式天平>操作手册
独特的应用功能:? 1.多种称量单位-克、千克、磅、克拉、盎司、金衡等 2.多种应用模式-包括计数称量、百分比称量、累加称量和峰值保持称量 3.运输保护装置-保护传感器在运输过程中免受损害 4.过载保护装置-具有超强抗过载能力 5.校正锁定开关-防止未经授权的设
干式索氏提取器操作手册
本公司引进脂肪测定新技术,结合我国国情研制而成。设计合理、性能稳定、京确度高、操作省力、省时、测定结果符合国家(GB5512-85)标准,各项指标及性能都到达到进口同类产品的要求,该仪器是食品、脂肪、饲料等行业测定脂肪的理想设备。 本仪器根据索氏提取原理、根据重量测定法来测定脂肪含量。即在有机
美国鲁道夫折光仪简明操作手册
基于五十多年的不断完善和创新,美国鲁道夫公司推出了当今世界上最先进的J系列全自动数字式折光仪,并广泛应用于食品、饮料及水样品的测量。 操作步骤 一、测量: 将样品滴入折光仪测量池上,样品量要以完全覆盖住中间的样品池为准。然后进入Temp Control 菜单,选择需要控制的温度
GPC凝胶色谱工作原理及操作手册
在对各类食品、农产品、水产品中的农残、半挥发性有机物分析时,在有机样品萃取物中一般会含有大分子物质,如果不去除这些物质,则导致色谱柱分离效率降低、进样口和色谱柱的使用寿命缩短,进而影响数据分析结。因此,在农残、半挥发性有机物的样品分析前必须进行有效的净化前处理。而传统的前处理过程耗时长、溶剂消耗
GPC凝胶色谱工作原理及操作手册
在对各类食品、农产品、水产品中的农残、半挥发性有机物分析时,在有机样品萃取物中一般会含有大分子物质,如果不去除这些物质,则导致色谱柱分离效率降低、进样口和色谱柱的使用寿命缩短,进而影响数据分析结。因此,在农残、半挥发性有机物的样品分析前必须进行有效的净化前处理。而传统的前处理过程
美国UVP公司推出BioSpectrum-2D-凝胶成像系统
美国UVP的BioSpectrum 2D凝胶成像系统为全自动、计算机控制系统,是专门为快速获取二维(如DIGE胶)成像所设计,并可直接进行分析。 系统特点: 使用该凝胶成像系统可获得高分辨率的2D 图像。全自动的制冷CCD(830万像素)与激光扫描相比,灵敏度
2D电泳实验教程之第二向电泳
1.配制10%的丙烯酰胺凝胶两块。配80ml凝胶溶液,每块凝胶40ml,将溶液分别注入玻璃板夹层中,上部留1cm的空间,用MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇封面,保持胶面平整。聚合30分钟。一般凝胶与上方液体分层后,表明凝胶已基本聚合。2.待凝胶凝固后,倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正
(NativePAGE)应该注意哪些问题
1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关,还和蛋白质的分子量以及分子形状有关,其中蛋白质的等电点是最重要 的影响因子,要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统; 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽
PAGE电泳条带该如何分析
我们实验室都是蛋白的染色是G250,核酸的都是EB,你的这个核酸染色应该是银染了吧。这种染色我没做过,只是书本上看的。但是银染的灵敏度非常的高,只有5ng或更少的DNA均可经银染法清晰地显示出来。看你的图觉得是核酸含量够了,倒是认为核酸含量很杂,到处都是。不过你认为条带不清可以试试0.2%硝酸银染色
SDS-PAGE电泳的免疫反应
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h。 2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上,四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜,用滤纸吸去残留液后,将膜蛋白面
PAGE电泳条带该如何分析
我们实验室都是蛋白的染色是G250,核酸的都是EB,你的这个核酸染色应该是银染了吧。这种染色我没做过,只是书本上看的。但是银染的灵敏度非常的高,只有5ng或更少的DNA均可经银染法清晰地显示出来。看你的图觉得是核酸含量够了,倒是认为核酸含量很杂,到处都是。不过你认为条带不清可以试试0.2%硝酸银染色
SDSPAGE梯度胶怎么配置
操作步骤( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液①
SDSPAGE胶的干燥方法
凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形,但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量,因此,应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态,使其真空压力波动极少。(1)试剂与配制:固定液:冰醋酸:甲醇:水(10:20:70)(2)电泳后的凝胶用
SDSPAGE常见问题分析
1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很
SDS-PAGE电泳的操作步骤
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可
SDS-PAGE样品如何处理?
根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。1)还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方
SDS-PAGE电泳的操作步骤
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可