TLC分析与显色
分析与显色由于被分离出的化学品可能是无色的,因此下列几种方法可用于让没有可见光吸收的斑点显色:通常在可使用少量的荧光化合物,如锰-活化的锌硅酸盐加入到吸附相当中,使得吸附物在黑光(UV254)下可以显色。固定相在荧光下本身显绿色,因此化合物的斑点可以掩盖掉荧光下的绿色从而达到显色目的。碘蒸气是对于大多数化合物都是显色试剂。许多化合物的斑点可以通过将TLC板浸没于下列显色剂当中而达到显色目的[8],如:高锰酸钾,碘,溴,磷钼酸,茴香醛法与茚三酮。脂类的情况下,色谱图可能会被转移到PVDF膜上,然后受到进一步的分析,如质谱法,这种技术称为Far-Eastern blotting。当显色成功后,就可以计算出Rf值,或保留因子。其计算方法是测量每个点从原点到达最终停留位置的距离除以原点到溶剂前沿的距离。这些值取决于使用的溶剂与TLC板的材质,而与物理常数无关。......阅读全文
TLC分析与显色
分析与显色由于被分离出的化学品可能是无色的,因此下列几种方法可用于让没有可见光吸收的斑点显色:通常在可使用少量的荧光化合物,如锰-活化的锌硅酸盐加入到吸附相当中,使得吸附物在黑光(UV254)下可以显色。固定相在荧光下本身显绿色,因此化合物的斑点可以掩盖掉荧光下的绿色从而达到显色目的。碘蒸气是对于大
纸层析分离中的显色与结果分析
一、纸层析分离中的显色:1、显色剂显示:被分离物质与显色剂生成有颜色的化合物,显示斑点位置。常用喷雾法 、浸渍法和涂刷法。2、紫外光显示:有些物质受紫外光照射会发出荧光,可在紫外光照射下观察到被分离物质的斑点。3、荧光薄层检测:如果样品斑点在紫外光照射下不显荧光,可在吸附剂中加入荧光物质或在制备好的
纸层析分离中的显色与结果分析
一、纸层析分离中的显色: 1、显色剂显示:被分离物质与显色剂生成有颜色的化合物,显示斑点位置。常用喷雾法 、浸渍法和涂刷法。 2、紫外光显示:有些物质受紫外光照射会发出荧光,可在紫外光照射下观察到被分离物质的斑点。 3、荧光薄层检测:如果样品斑点在紫外光照射下不显荧光,可在吸附剂中加入荧光物质
血凝分析仪底物显色法简述
底物显色法(生物化学法) 底物显色法是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的,该方法又可称为生物化学法。其原理是通过人工合成与天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列顺序、并含有特定作用位点的小肽,并将可水解产色的化学基因与作用位点的氨基酸相连。测定时由于凝血因子具有蛋白水解酶的活
TLC显色
显色展开后的薄层,可直接检视或显色后检视。显色方式有喷雾显色、浸渍显色和蒸气显色。喷雾显色是将显色剂用喷雾的方法均匀撒于薄层板上,操作时要尽可能控制液滴细微,同时使板各部位的喷雾密度尽可能一致。显色剂的量要适当,太多则烘干时间延长,使斑点显色时间延长,多余显色剂流向板下方,容易产生斑点变形;太少则斑
比色分析对显色反应的基本要求
比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的选择性,即选用的显色剂只与待测组分反应,而不与其他干扰组分反应或其他组分的干扰很小;反应生成的有色化合物有恒定的组分和较高的稳定性;反应生成的有色化合物有足够的灵敏度,摩尔吸光系数一般应在104以上;
ELISA中分析非特异性显色
酶联免疫吸附试验(ELISA)自1971年自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便、安全,而广泛应用于临床诊断,开创了免疫学诊断的新纪元。但同其它免疫诊断方法一样酶免试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性问题。1、试剂盒特异性因素1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相载体有微
茚三酮显色反应的影响因素分析
茚三酮与谷氨酸的显色反应灵敏度较高 ,但同时也受到多种因素的影响。当实验条件控制不好时 ,会造成实验数据的较大偏离 ,从而产生较大的误差。此显色反应的影响因素主要有以下几方面。谷氨酸浓度的影响实验表明 ,谷氨酸与茚三酮水溶液在表 3所注条件下反应的最低显色浓度为70μg/ mL 。随谷氨酸浓度变大
关于显色反应的有机显色剂的介绍
大多数有机显色剂常与金属生成稳定螯合物,有机显色剂中一般都含有生色团和助色团。有机化合物中的不饱和键基团能吸收波长大于200nm的光。这种基团称为广义的生色团。例如偶氮基( -N=N-),醌基等。某些会有环对电子的基团,它们与生色团上的不饱和键相互作用,可以影响有机化合物对光的吸收,使颜色加深。
薄层层析分离中的显色与定量
一、薄层层析分离中的显色:薄层层析分离中的薄层板展开后,从展开装置中取出,放入干燥器中干燥,然后根据被分离物质的种类和性质,选用相应的显色剂显色或用紫外光检测被分离物质的斑点,测量和计算各斑点的迁移率。样品所含溶质较多或某些组分在单相薄层层析分离中的迁移率比较接近,不易明显分离时,可采用双相薄层层析
薄层层析分离中的显色与定量
一、薄层层析分离中的显色: 薄层层析分离中的薄层板展开后,从展开装置中取出,放入干燥器中干燥,然后根据被分离物质的种类和性质,选用相应的显色剂显色或用紫外光检测被分离物质的斑点,测量和计算各斑点的迁移率。 样品所含溶质较多或某些组分在单相薄层层析分离中的迁移率比较接近,不
ELISA中非特异性显色原因分析
【摘要】:影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。 【关键词】 ELISA 非特异性
氨氮操作分析仪显色剂保存时间
一周。显色剂是一种将生化反应后产生的复合物显色以达到实验目的的一种试剂,又称底物液,显色剂随着储存时间的延长,可能会与空气中的氧气反应,色彩会跟刚配时的有一点差异,因此不能储存太久,保存时间在一周。
凝血分析仪检测方法之底物显色法
底物显色法(生物化学法) 底物显色法是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的,该方法又可称为生物化学法。其原理是通过人工合成与天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列顺序、并含有特定作用位点的小肽,并将可水解产色的化学基因与作用位点的氨基酸相连。测定时由于凝血因子具有蛋白水解酶的活
茚三酮显色反应的影响因素分析概述
茚三酮与谷氨酸的显色反应灵敏度较高 ,但同时也受到多种因素的影响。 当实验条件控制不好时 ,会造成实验数据的较大偏离 ,从而产生较大的误差。此显色反应的影响因素主要有以下几方面。 1、谷氨酸浓度的影响 实验表明 ,谷氨酸与茚三酮水溶液在表 3所注条件下反应的最低显色浓度为70μg/ mL
显色剂的种类
通用显色剂和特效显色剂。根据被检物的化学组成是否遭受破坏,显色剂分为破坏性显色剂和非破坏性显色剂。
显色培养基
显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。这些相应的显示底物是由产色基团和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶的作用下,游离出产色基团显示一定颜色,直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定。优点:将菌株分离,鉴定结合在一起,无需对菌株进行分离纯化和进一
显色剂的作用
显色剂是一种将生化反应后产生的复合物显色以达到实验目的的一种试剂。一般又称底物液。
显色实验的“捷径”
可见光吸收光谱法是利用测量有色物质对某一单色光的吸收程度来进行测量的,但许多化合物本身是无色的,它对可见光不发生吸收或吸收很弱,因而必须预先通过适当的化学反应,使它转变成有色化合物,然后再进行可见光吸收光谱测定。 一、显色反应 在光度分析中,将试样中被测组分转变成有色化合物的反应
关于茚三酮显色反应的其他影响因素分析
茚三酮的不同溶剂对显色反应也有影响。实验表明 ,茚三酮的丙酮溶液在 80 ℃以上时显色较好 ,而茚三酮的水溶液要在 90 ℃以上时显色才明显。茚三酮的用量对显色反应的影响不大 ,可选择 5mL (或 3mL) 被测液与 1mL (或 0. 5 mL) 茚三酮溶液反应。测定时 ,最好选择谷氨酸标准
测吸光度与浓度的关系,溶液体积与显色剂体积有关吗
吸光度与浓度的关系是线性关系。吸光度与浓度的关系是光谱分析中的基本概念,通常遵循比尔-朗伯定律(Beer-Lambert Law)。下面通过解释和表格来展示它们之间的关系。一、比尔-朗伯定律基本概念:比尔-朗伯定律描述了单色光通过均匀溶液时,溶质吸收光的程度与溶液的浓度和光程长度之间的关系。该定律表
分析影响ELISA中非特异性显色的原因
影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。1、试剂盒特异性因素1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相
DAB显色时间如何把握?
(1)DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗; (2)DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间; (3)此外,若很短时间就出现背景很深,
显色培养基原理
显色培养检测基本原理:利用不同种属细菌代谢所产生的酶的特异性,在培养基中加入相应的特异性酶底物和抑制剂,当具有某特异酶的细菌与酶底物作用时,使显色基团游离出来附着于菌落上,形成颜色独特的菌落。根据菌落的颜色直接对菌属(种)作出鉴定。 快速、简便、节省时间-大多数显色培养基只需在样品增菌后,分离
DAB显色时间如何把握
2. �0�2DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间。 3. �0�2此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间。
凝胶电泳的显色
观察凝胶中DNA的最简便、最常用的方法就是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种具有扁平分子的核酸染料,在高离子强度下,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。在DNA溴化乙锭复合物中,DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而结合的染料分子本身吸收302nm和399nm的光辐射,因此吸
TLC的通用显色方法
TLC的通用显色方法理想的显色希望灵敏度高,斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好,斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比,在样品组成并不完全已知的情况下,通用显色方法显得尤为重要,通用显色方法主要有:1)、紫外照射法:方便、不破坏样品;2)、碘蒸气法:通用性强,与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用;
黄酮的显色反应介绍
⒈盐酸-镁粉(或锌粉)反应为鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应,反应机理认为是因为生成了阳碳离子缘故。⒉硼氢化钠(NaBH4)是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂,产生红~紫色。而与其他黄酮类化合物均不显色。⒊黄酮类化合分子中常含有下列结构单元,故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐、锶盐、铁盐等试剂反
沙门氏菌显色培养基的快速检测与分离应用
沙门氏菌属是一大群寄生于人类和动物肠道内,生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌,有的专对人类致病,有的只对动物致病,也有对人和动物都致病,这些统称为沙门氏菌。 沙门氏菌目前已经发现1800种以上,按抗原成分可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌型。其中与人类疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌,乙组
凝胶电泳的显色效果
观察凝胶中DNA的最简便、最常用的方法就是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种具有扁平分子的核酸染料,在高离子强度下,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。在DNA溴化乙锭复合物中,DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而结合的染料分子本身吸收302nm和399nm的光辐射,因此吸