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外泌体及其蛋白质组学研究

外泌体是什么? 外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-200 nm。外泌体存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。 外泌体都有哪些分离提取方法? 对于外泌体研究,分离和收集外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有:超高速离心、密度梯度离心、磁珠免疫、超滤法、聚合物沉淀等几种主要方法,各种方法均存在不同优缺点。 但是嘞,大牛们的 CNS文章大多用的都是超速离心的方法,不信你看: 怎么知道提取的外泌体合不合格? 鉴定外泌体提取合格与否有三大法宝:电镜、NTA粒径、Western blot检测 目前外泌体的分离提取......阅读全文

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

生物医学光学技术

  摘 要:随着生物分子光学标记技术的不断进步,光学技术在揭示生命活动基本规律的研究中正发挥越来越重要的作用,也为医学诊断与治疗提供了更多、更有效的手段。本报告首先简要介绍光学技术在生物医学应用中的发展概况,然后从基因表达及蛋白质—蛋白质相互作用研究方面,讨论生物分子光学技术的特点与优势,阐明基于分

生物医学光学技术

  摘 要:随着生物分子光学标记技术的不断进步,光学技术在揭示生命活动基本规律的研究中正发挥越来越重要的作用,也为医学诊断与治疗提供了更多、更有效的手段。本报告首先简要介绍光学技术在生物医学应用中的发展概况,然后从基因表达及蛋白质—蛋白质相互作用研究方面,讨论生物分子光学技术的特点与优势,阐明基于分

改善大脑垃圾处理可能延缓阿尔茨海默病

  哥伦比亚大学医学中心(Columbia University Medical Center,CUMC)和纽约州精神病学研究所(New York State Psychiatric Institute,NYSPI)神经科学家们进行的新研究发现:一种能够促进大脑“垃圾处理”系统活动的药物,能够降低阿

包涵体表达的蛋白的复性

包涵体表达的蛋白的复性摘要  综述了包涵体形成、包涵体分离和溶解、包涵体折叠复性的方法、复性产率低下的主要因素以及通过分子伴侣、低分子量添加物等的应用而提高了蛋白质复性产率。关键词  包涵体  蛋白质  复性Abstra

一文了解外泌体在肺癌中的研究进展

  肺癌是全世界发病率和病死率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌类型的85%以上,死亡率高达80%~90%。由于缺乏有效的早期诊断筛查方法,70%肺癌患者确诊时已是晚期,5年生存率仅为16%~18%。因此,寻找新的生物标志物和靶向治疗的新靶点对肺癌的早期诊断和临床治疗至关重要。

多位专家指导:如何提取和研究血液DNA,RNA与蛋白

  血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。  产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,通过分析孕妇血液中的胎儿DNA来鉴定染色体异常(比如唐氏综合症)。此外,越来越多的研究者开始关注血液

利用蛋白连接酶和切割酶可控地制备聚合蛋白质分子

  将多个蛋白质分子交联构建成蛋白二聚体、三聚体甚至多聚体在生物技术、材料和制药等领域有着广泛的应用。以蛋白质为基质的生物材料,具有完美的生物相容性和功能多样性等优势。而在生物制药中,将蛋白类药物分子与其他分子或蛋白交联聚合也有着广泛的应用。目前蛋白聚合主要是利用巯基交联的方式,该反应聚合过程较难调

关于外泌体的肿瘤应用研究进展

  外泌体是由多种活细胞通过内吞-融合-外排等一系列生物学机制而形成的,具有脂质双层膜结构的纳米级微小囊泡。其最早是在1983年由Johnstone RM等研究羊成熟网织红细胞过程中囊泡的形成时发现,在生理和病理条件下,都可以被一些细胞以胞吐的方式所释放,如:免疫细胞、干细胞、肿瘤细胞,且广泛分布于

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验(四)

小规模大肠杆菌细胞裂解规程1.去垢剂为基础的裂解试剂10 mL 裂解试剂溶液的配方:10 mLB-Per 或 BugBuster,20/iLLysonaseBioprocessingReagent。如果需要减少蛋白质水解和增加目标蛋白质可溶性及稳定性可以添加,如 EDTA、蛋白酶抑制剂、

年度巨献!施一公团队系统介绍剪切体研究的前世今生

  前体信使RNA的剪接涉及内含子的去除和外显子的连接,是由剪接体介导的。加上过去40年的生化和遗传学研究,自2015年以来,对完整的剪接体进行了原子分辨率的结构研究,导致了对RNA剪接的机械描述,并有了显著的洞察力。剪接体被证明是一种由蛋白质组成的金属蛋白酶.小核RNA(SnRNA)的保守元件与两

生物医学光学技术(三)

荧光关联谱 FCS¬—Fluorescence Correlation Spectroscopy FCS可用于分析小规模分子集合辐射行为所引起的微小的自发扰动,从而反映分子内与分子间的动力学过程。由于FCS可观察纳摩尔(nanomolar)范围的荧光分子,因而可在大的空间与时间范围内,非常近似地

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些

PNAS:神经外泌体具有修复受损脑细胞的潜力

  外泌体是由细胞释放的脂质或脂肪组成的小气泡。在很长一段时间里,研究人员把它们看作是细胞排出体外的“垃圾”。但在2007年,瑞典哥德堡大学的研究人员Jan Lotvall发表的研究表明,一些细胞利用外泌体在其他细胞之间运输mRNA和microRNAs等遗传物质。从那时起,对外泌体及其在人体中作用的

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

外泌体的应用——有机遇,也有挑战

  外泌体作为疾病诊断标志物的潜在应用依赖于基于外泌体的药物递送系统的技术突破,要将其用于临床治疗,外泌体的大规模工业化生产面临很大的挑战。  外泌体(exosome)是细胞分泌囊泡(extracellular vesicles)的一种亚型,存在于生物体液中,并参与多种生理和病理过程。外泌体被认为是

DNA重组(DNA recombination)技术:外源基因的蛋白表达-2

2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后,离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水,为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般

两篇Nature文章发布线粒体研究重要发现

  在10亿多年前发生的一次内共生事件中,一个细菌被细胞所吞食,并最终变成了细胞器——线粒体。随着时间的推移,近1000种编码线粒体蛋白的基因,其中的大多数现在从线粒体转移到了细胞核中,并且是在细胞质中被翻译为蛋白质。一个至关重要的输入机制确保了这些蛋白质最终定位在线粒体内适当的位置。  发表在《自

两篇Nature文章揭示细胞死亡新机制

  在10亿多年前发生的一次内共生事件中,一个细菌被细胞所吞食,并最终变成了细胞器——线粒体。随着时间的推移,近1000种编码线粒体蛋白的基因,其中的大多数现在从线粒体转移到了细胞核中,并且是在细胞质中被翻译为蛋白质。一个至关重要的输入机制确保了这些蛋白质最终定位在线粒体内适当的位置。  发表在《自

亲和层析(Affinity Chromatography)(2)

⑵基质的活化基质的活化是指通过对基质进行一定的化学处理,使基质表面上的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团。配体和基质的偶联,通常首先要进行基质的活化。①多糖基质的活化多糖基质尤其是琼脂糖是一种常用的基质。琼脂糖通常含有大量的羟基,通过一定的处理可以引入各种适宜的活性基团。琼脂糖的活化方法

选择重组蛋白表达的合适方法(一)

一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或 低 量 表 达 . 缺 少 必要的翻译后 修 饰或不适当的修饰 。选 择 表

选择重组蛋白表达的合适方法

实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或

细胞间有传递致癌蛋白的“木马”

  据美国物理学家组织网报道,北卡罗莱纳大学科学家的一项最新发现显示,细胞感染人类疱疹病毒(EBV)后,会产生小泡或被称为外体的液囊,从而改变细胞中所含的蛋白质和RNA(核糖核酸)。这种变质的外体一旦进入健康细胞,就能转变细胞的良性生长方式,使之变成不可控的致癌生长。这一发现刊登于美国

选择重组蛋白表达的合适方法

重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及

表达蛋白(Expressed protein)的分离与纯化

大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认,蛋白质纯化比起DNA 克隆和操作来是更具有艺术性的,尽管DNA 序列具有异乎

蛋白质机器与生命过程调控重点专项3个项目启动实施

  近日,国家重点研发计划蛋白质机器与生命过程调控重点专项“蛋白质机器三维结构导向的新型药物研发关键技术研究”、“信号转导过程中蛋白质机器的活细胞标记与在体调控”和“蛋白质机器动态结构的核磁共振研究方法及应用”等3个项目启动实施工作会议在北京大学召开。北京大学、科技部高技术研究发展中心代表、3个项目

表达蛋白的分离与纯化

[实验原理]大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认,蛋白质纯化比起DNA克隆和操作来是更具有艺术性的,尽管DNA序列具有

包涵体(inclusion body)的纯化

包涵体是外源基因在原核细胞中表达时,尤其在大肠杆菌中高效表达时,形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒,在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的,与胞质内蛋白质生成速率有关,新生成的多肽浓度较高,无充足的时间进行折叠,从而形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体;此

包涵体(inclusion body)的纯化

包涵体是外源基因在原核细胞中表达时,尤其在大肠杆菌中高效表达时,形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒,在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。包涵体形成是比较复杂的,与胞质内蛋白质生成速率有关,新生成的多肽浓度较高,无充足的时间进行折叠,从而形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体;此