气体的干燥与纯化
1、气体干燥与纯化的目的减小噪音干扰:一些杂质会增加特定检测器的本底噪音、甚至出鬼峰,从而降低检测器的灵敏度或严重干扰定性定量工作。保护色谱柱:气体中的某些杂质可能会减少色谱柱的寿命。例如,水分会明显影响某些气-固色谱柱的寿命。2、载气干燥与纯化的原则:除水、除氧、除烃3、气体干燥与纯化的办法:除水:一般情况下,可以在载气管路中加上净化器,净化器内装硅胶和 5A 分子筛。硅胶或分子筛予先应充分活化,活化方法如下:A)分子筛在 420℃的马福炉中连续加热 24 小时,不等凉至室温,迅速将它装入净化器中,两头塞上脱脂棉。B)硅胶在 120℃的烘箱中活化, 直至恢复吸水前的颜色(天蓝色) 。除氧:净化氮气和氩气中微量的氧,可通过 300~400℃装有活性铜胶催化剂的柱管,一般可将氧含量降至 10ppm 以下;氢气中的微量氧可在常温下通过装有 105 型钯催化剂的柱管,使氢气中的氧降至 10ppm 以下。除烃:不论载气,还是辅助气体(H......阅读全文
微量柱法纯化DNA片段
实验概要目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术,回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。目前待回收的片断主要有酶切片断和各种PCR片断;回收的介质主要有琼脂糖和PAGE;回收的方法主要有树脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮冻冻融回收及透析袋大量回收等,下面分别介绍树脂、微量柱及液氮冻冻融回收
SELDI蛋白质纯化鉴定
实验目标针对血清、血浆、体液、组织、真菌、细菌、细胞培养物以及植物等样本的差异蛋白质组研究,以蛋白质芯片为载体,通过对目标疾病样本组及对照组之间进行鉴定,以期找到能够区分不同组别的差异峰,并通过对差异峰进行蛋白质鉴定找到与目标疾病密切关联的基因/蛋白。 实施方案 一、目标蛋白1.利用SELD
病毒的大规模纯化技术
实验概要现代病毒研究往往需要大量的纯病毒粒子,以便于化学研究或制备抗体。本文简明地描述了一下脊髓灰质炎病毒(Polio virus)的纯化步骤。它是一种已被广泛研究的危害人体健康的病毒。实验步骤1. 在大型装置中培养病毒。为获得足够的用于化学研究的病毒,必须制备大量病毒。每种病毒的培养都有不同的
蛋白质纯化的意义
蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质,必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。
一种多肽的纯化
原料:一种多肽,目标物含量71.77% 目标:提纯后目标物含量>98%,单杂含量<1.0%, 50mm的柱子希望上样量达到6g,至少4g,回收率达到75%以上 原料分析: ────────────────────────────────── 序号 保留时间 名
原代细胞增殖优势纯化方法
自然纯化是利用某一种类细胞的增殖优势,在长期传代过程中靠自然淘汰法,不断排挤其他生长慢的细胞,靠自然增殖的潜力,最后留下生长优势旺盛的细胞,达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法按照需要和实验要求及研究目的来选择细胞。此法花费时间长,留下的往往是成纤维细胞。仅有那些恶变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通
核酸纯化应达到什么要求
1 加入浓盐溶液(如NaCl) 核酸-蛋白质加入NaCl后,破坏静电吸力,使氢键破坏,核蛋白解聚; 2 加入SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外,还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能; 3 酚/氯仿抽提 酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果
染色末端的清洁纯化实验
试剂、试剂盒 乙醇洗脱上样液仪器、耗材 磁性分离装置平板夹平板架测序反应纯化系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂用于测序的胶洗脱/上样液 (见表 9-4)90% 乙酵洗涤液2. 特殊设备MagnaBotⅡ磁性分离装置(Promega)平板夹 96(Promega)平板架(Promega)3
蛋白纯化的原理是什么
蛋白质分离纯化常用方法有: 1、沉淀, 2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。4、层析: a.离子交换层析,利用蛋白质的两性游离蛋白质的分离纯化在生物
随机序列库的纯化实验
实验方法原理实验材料DNA 库试剂、试剂盒氢氧化铵正丁醇TE 缓冲液尿素上样缓冲液NaCl乙醇仪器、耗材荧光薄层层析板(VWR)紫外灯剃刀刀片小孔注射器能耐受极端温度的 13 ml 离心管(Sarstedt)90℃水浴旋转混合器实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 寡核苷酸
蛋白质纯化的特点
1、处理过程为单纯物理过程,无任何相变。设备操作温度低,避免了传统工艺的种种弊端; 2、系统采用先进的膜分离技术,工艺简单,运行稳定可靠,处理效率高; 3、可以对生产废水中的有用物质进行提纯回用,实现经济、环保双赢; 4、设备投资少,运行费用低。[1]
概述核酸纯化仪的应用
几乎在每个实验室,与生物分子相关的分离纯化工作都是十分重要,且必不可少的。但要对多个样品进行纯化还是相当困难的,不仅需要选择合适的纯化技术,而且工作量也特别大,很难满足当前飞速发展对高通量样品进行提取纯化的需求。TIANLONG NP968磁珠提取纯化系统是使用磁珠法技术,可同时操作1-32个样
纯化剪接因子SR蛋白实验
实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR(serine/argininc rich,富含丝/苏氨酸)蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子,该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。实验材料 超纯硫酸铵
标本DNA的分离与纯化
用5-10ml 1xNTE(NaCl 100mmol/L ,Tris-HCl 10mmol/l pH7.4,EDTa 1mmol/L pH8.0)调整细胞为2×107个(组织应切碎置液氮冰冻,高速搅切成粉末后,加入缓冲液)。加1/10-1/20体积(V)10mg/ml蛋白酶(Sigma Ⅷ型),
表达蛋白的分离与纯化
大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认,蛋白质纯化比起DNA克隆和操作来是更具有艺术性的,尽管DNA序列具有异乎寻常的多
简述核酸分离纯化的原则
(一)材料与方法的选择 临床常见的标本有血液,尿液,唾液,组织及培养细胞等;核酸分离与纯化的方法非常多,如何恰当地收集与准备材料,选择适宜的分离与纯化方法是一个首要的问题。首先我们应当明确核酸的分离与纯化并不是最终的目的,不同的实验研究与应用对核酸的产量,完整性,纯度和浓度可能有不同的要求;至
RNA-的提取和纯化实验
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点,但并不推荐使用 poly(A)+RNA,因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸,并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿焦
细胞自然纯化的方法特点
自然纯化即利用某一种类细胞的增殖优势,在长期传代过程中靠自然淘汰法,不断排挤其他生长慢的细胞,靠自然增殖的潜力,最后留下生长优势旺的细胞,达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法按照需要和实验要求及目的来选择细胞,此法花费时间长,留下来的往往是成纤维细胞。仅有那些恶性变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通过此方
核酸分离纯化实验技术指南
核酸分离纯化实验技术指南: 总RNA提取常见问题分析 RNA降解 1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织:某些富含
PPO粗酶液的纯化
凝胶层析法 实验方法原理 葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外,而小分子物质进入凝胶颗粒内部,流速慢而最后
核酸纯化应达到什么要求
1 加入浓盐溶液(如NaCl) 核酸-蛋白质加入NaCl后,破坏静电吸力,使氢键破坏,核蛋白解聚; 2 加入SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外,还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能; 3 酚/氯仿抽提 酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果
细菌分离纯化的详细方法
平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶,首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多,主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指
troponin蛋白纯化-Protein-purification:-troponins
Overview TROPONINS The calcium-dependent regulatory protein complex located on the thin actin filaments of muscle comprises of TnC (17.8 kDa), TnI (2
mRNA的提取及纯化实验
磁珠法 亲和柱层析法 亲和柱层析法 实验材料 mRNA
蛋白纯化的原理是什么
蛋白质分离纯化常用方法有: 1、沉淀, 2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。4、层析: a.离子交换层析,利用蛋白质的两性游离蛋白质的分离纯化在生物
GST融合蛋白纯化的原理
GST纯化系统其实就是凝胶亲和层析系统。该纯化柱中,凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶(即GST)之间酶和底物的特异性作用力,使得带GST标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合,从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。
PPO粗酶液的纯化
一、原理1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外,而小分子物质进入凝胶颗粒内部,流速慢而最后流出柱外,凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质)2.利用离子交换法,选取DEAE-阴离子纤维素DE5
免疫复合物的纯化
实验概要本实验介绍了免疫复合物纯化的基本操作步骤。主要试剂裂解缓冲液抗体蛋白A或蛋白G微球(用含0.02%叠氮钠裂解缓冲液配成10%(V/V)的混悬液,4℃保存)不含DTT的Laemmli样品缓冲液(2%SDS、10%甘油、60mmol/LTris,pH6.8和0.02%溴酚蓝)1mol/LDTT(
核酸纯化应达到什么要求
1 加入浓盐溶液(如NaCl) 核酸-蛋白质加入NaCl后,破坏静电吸力,使氢键破坏,核蛋白解聚; 2 加入SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外,还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能; 3 酚/氯仿抽提 酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果