酶切片断的脱磷实验基本方案
在对DNA片段的修饰中，脱磷酸化反应是一个重要内容,该反应有碱性磷酸化酶催化，该酶可使线状DNA上去除5'磷酸基团。实验材料DNA片段试剂、试剂盒碱性磷酸酶酚氯仿EDTASDSTE缓冲液电泳缓冲液NH4AC仪器、耗材离心机恒温设备真空干燥机取液器实验步骤1. 在实验四所得DNA限制性内切酶片段中加入（1）10×碱性磷酸酶缓冲液 10 μl（2）碱性磷酸酶（0.01 u/pmol ends） 1-2 ul（3）ddH2O到100 ul（4）对于5‘突出则37℃下温浴30分钟，再加入1 ul CIAP（0.01 u/pmol ends），37℃下温浴30分钟。（5）对于平末端或3’突出末端，则37℃下温浴15分钟，56℃下温浴15分钟，再加入1 ul CIAP（0.01 u/pmol ends），37℃下温浴15分钟。56℃下温浴15分钟。2. 温浴结束后加入EDTA（pH8.......阅读全文
酶切片断的脱磷实验基本方案
在对DNA片段的修饰中，脱磷酸化反应是一个重要内容,该反应有碱性磷酸化酶催化，该酶可使线状DNA上去除5'磷酸基团。实验材料DNA片段试剂、试剂盒碱性磷酸酶酚氯仿EDTASDSTE缓冲液电泳缓冲液NH4AC仪器、耗材离心机恒温设备真空干燥机取液器实验步骤1. 在实验四所得DNA限制性内切酶
酶切片断的脱磷实验
实验材料 DNA片段试剂、试剂盒 碱性磷酸酶酚氯仿EDTASDSTE缓冲液电泳缓冲液NH4AC仪器、耗材 离心机恒温设备真空干燥机取液器实验步骤 1. 在实验四所得DNA限制性内切酶片段中加入（1）10×碱性磷酸酶缓冲液 10 μl（2）碱性磷酸酶（0.01 u/pmol ends） 1-2
酶切片断的脱磷实验
基本方案 实验材料 DNA片段 试剂、试剂盒
酶切片断的脱磷技术
在对DNA片段的修饰中，脱磷酸化反应是一个重要内容,该反应有碱性磷酸化酶催化，该酶可使线状DNA上去除5'磷酸基团，而DNA的脱5'磷酸基团是基因重组、载体构建中防止载体DNA自身联接、环化的重要途径，载体经单酶切线性化后,3’端为羟基、5’端为磷酸基，在连接酶作用下将以极大比例发生
DNA片断的酶切技术
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用促进了以DNA重组为基础的生物工程技术的迅猛发展。该类酶是体外剪切基因片段的重要工具，基因物理图谱的绘制、核苷酸序列的测定、基因片段的重组，重组子的筛选、探针的制备及各种杂交、测量基因的拷贝数,基因文库构建,分子
DNA片断的酶切实验
实验材料 DNA片段试剂、试剂盒 TE缓冲液仪器、耗材 离心机 恒温水浴取液器电泳仪电泳槽紫外观测仪实验步骤 一、EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ单酶切及双酶切1. 取2支干净、灭菌新Eppendof管，分别按下表加入 A（μl） B（μl）灭菌水 13 13EcoR Ⅰ缓冲液 2 0Hind Ⅲ缓
DNA片断的酶切实验
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用可以用于以DNA重组为基础的生物工程技术。实验方法原理酶切指采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。实验材料DNA片段试剂、试剂盒TE缓冲液仪器、耗材离心机恒温水浴取液器电
DNA片断的酶切实验
实验方法原理 酶切指采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。 实验材料 DNA片段
酶切的基本步骤
1) 成功酶切的关键是准备好模板DNA。DNA样品中不能含有有机溶剂(会使酶变性或产生星号货性)，不能含有干扰酶活性的污染物质，不能含有高浓度的EDTA (TE中的EDTA浓度较低，对Mg的浓度影响较小);同时要对DNA甲基化程度及其对酶切效率的影响要做到心中有数。2) 选用合适的酶。根据酶切序列选
PCR扩增产物的克隆技术1
利用各种PCR技术扩增特异DNA是获得目的基因和特异探针的一种最有效、最简便的方法。但PCR扩增出的片断如不经进一步克窿是无法变成可利用基因，因此PCR扩增产物的克窿技术是DNA重组技术中的一个最重要部分，该技术是目前分子生物学实验中最重点内容，要综合前面实验中所介绍的各种技术，起着承上启下的作用。
酶切的基础知识（酶切原理和实验过程）
酶切的原理：DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类。Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点
DNA的限制性内切酶酶切反应的基本原理与实验技术
[实验目的]通过本实验学习DNA的限制性内切酶酶切反应的基本原理与实验技术。[实验原理]1.限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶
DNA的限制性内切酶酶切反应实验
[实验目的]通过本实验学习DNA的限制性内切酶酶切反应的基本原理与实验技术。[实验原理]1.限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的
限制性内切酶酶切反应实验原理
限制性内切酶已有百余种，每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性，酶的活性需Mg2+来激活。不同的酶也有许多差别：有些酶除需Mg2+外，还需ATP等其他辅助因子的激活；切割位点和识别序列间的距离不同；某些内切酶同时具有甲基化作用。根据这些差别，可将限制性内切酶分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。Ⅱ型限制性内切酶只需要
关于牛小肠碱性磷酸酶的基本信息介绍
一、基本信息 Calf Intestinal Alkaline Phosphatase也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。 经限制性内切酶酶切的质粒5'端带有磷酸基团，在进行基因克隆时为避免质粒发生自连，可以使用Calf Intestinal Alkaline P
关于核酸内切酶的基本介绍
核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5′磷酸二酯键，把磷酸基团留在3′位置上，称为5′-内切酶；而有些仅水解3′-磷酸二酯键，把磷酸基团留在5′位置上，称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专
脱甲酰酶的基本信息
中文名称脱甲酰酶英文名称deformylase定 义通常指肽脱甲酰化酶(编号：EC 3.5.1.88)，在原核生物蛋白质生物合成过程中，催化多肽链氨基端N-甲酰甲硫氨酸的脱甲酰基反应的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
脱甲酰酶的基本信息
中文名称脱甲酰酶英文名称deformylase定 义通常指肽脱甲酰化酶(编号：EC 3.5.1.88)，在原核生物蛋白质生物合成过程中，催化多肽链氨基端N-甲酰甲硫氨酸的脱甲酰基反应的酶。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
DNA的酶切与连接——质粒DNA酶切
DNA的连接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一；（2）成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。实验方法原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附
DNA酶切
一、 DNA酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在
DNA酶切
一、 DNA酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶
DNA的限制性核酸内切酶酶切实验和连接实验
一）酶切实验 本实验学习用限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及质粒pBR322DNA，琼脂糖凝胶电泳后观察酶切结果。 【原理】 λDNA 是大肠杆菌的一种温和噬菌体DNA，双股线状，分子大小为48.5 kb。 EcoRI酶可识别DN
关于发酵酶蛋白的构成—脱辅基酶蛋白的基本介绍
在由复合蛋白质构成的酶中，特别是能利用透析和其它方法可逆地解离其低分子成分时，称蛋白部分为脱辅基酶蛋白，低分子部分为辅酶，具有两者结合催化效应的复合蛋白质称为全酶。即辅酶+脱辅基酶蛋白全酶。当辅酶的结合强固时称为辅基，例如硫胺素焦磷酸是丙酮酸脱羧酶（EC4．1．1．1）的辅酶，从全酶分离出后再加
DNA的限制性内切酶酶切反应
[实验目的] 通过本实验学习DNA的限制性内切酶酶切反应的基本原理与实验技术。 [实验原理] 1.限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作
限制性核酸内切酶的基本信息
限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type I）、第二型（Type II）及第三型（Type III）。Ⅰ型限制性
酶切反应的建议
酶切反应建议一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如
DNA的限制性内切酶酶切反应技术
限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是指识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。本实验是掌握DNA的限制性内切酶的酶切技术。DNA的限制性内切酶酶切反应技术[实验原理]1. 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位
切刻内切酶（NEAR）恒温扩增
切刻内切酶（NEAR）恒温扩增是目前相关研究最少的一种恒温核酸扩增技术。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人员开发并申请ZL的（Brain等2009）。除了链置换酶（Bst）外，NEAR反应中还需添加一个切刻内切酶。NEAR反应的引物设计需要将所使用的切刻内切酶的DNA作为序列加在引物
内切酶列表：
Single letter code:R = G or A; Y = C or T; W = A or T; M = A or C; K = G or T; S = C or G;H = A, C or T;V = A, C or G;B = C, G or T;D = A, G or T;N =
【共享】双酶切
1、 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的，则必须先切，否则就可能造成酶切失败。2、 回收PCR产物：回收的PCR产物片段=1：10 ，一般取前者0.03pmol