基因活性同位素分析实验——人生长激素的放射免疫分析法

实验材料hGH表达质粒试剂、试剂盒洗涤液亲和素包被珠仪器、耗材试管γ计数仪实验步骤1. 取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。2. 加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液,混合。加入1颗亲和素包被珠,盖上试管盖或用Parafilm膜封口,室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。3. 加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。完全吸干洗涤液。 图一、人生长激素表达载体 4. 将试管置于γ计数仪上计数1 min。 5. 用试剂盒中的hGH标准品测得的数据绘制标准曲线。用这个标准曲线来计算未知样品的hGH含量。......阅读全文

放射免疫分析法的测定方法

分别在一定数量的试管中加入不同浓度的标准抗原(或未知样品),每管加入等量的放射性标记抗原和一定量的抗体,在4℃或37℃下保温,待反应平衡后,选用适当的方法将B和F分离,测量放射性强度,由放射性强度比B/T对Ag量制出标准曲线,即可从标准曲线上查出未知样品量。测定时,首先要制备出纯的抗原和抗体。凡能刺

放射免疫分析法的优缺点

RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等

放射免疫分析法未来展望

  在本法的基础上,近年来又发展了其他免疫分析法,用其他有特殊性质的物质代替放射性同位素来标记抗原,同样利用标记与未标记抗原与抗体的竞争性结合,然后用适宜方法测定。其中研究较多的是荧光免疫分析,采用荧光化合物标记抗原,结合分离后通过荧光值的测定进行定量分析。

放射免疫分析法测定详述

  分别在一定数量的试管中加入不同浓度的标准抗原(或未知样品),每管加入等量的放射性标记抗原和一定量的抗体,在4℃或37℃下保温,待反应平衡后,选用适当的方法将B和F分离,测量放  射性强度,由放射性强度比B/T对Ag量制出标准曲线,即可从标准曲线上查出未知样品量。  测定时,首先要制备出纯的抗原和

放射免疫分析常用方法包括哪些?

  放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种:  (1)液相法:将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合,经一定作用时间后,分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原,测定这两部分的放射活性,计算结合率。在反应系统中,待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争

分析放射免疫常用的方法有哪些

放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种:(1)液相法:将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合,经一定作用时间后,分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原,测定这两部分的放射活性,计算结合率。在反应系统中,待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战 性

放射免疫分析的常用方法

  放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种:  (1)液相法:  将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合,经一定作用时间后,分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原,测定这两部分的放射活性,计算结合率。在反应系统中,待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素

放射免疫分析常用方法

放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种:(1)液相法:将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合,经一定作用时间后,分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原,测定这两部分的放射活性,计算结合率。在反应系统中,待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战

关于放射免疫分析法的应用介绍

  此法用于在内分泌学中测定胰岛素、生长激素、甲状旁腺激素、血管紧张素、催乳素、黄体化激素、促卵泡成熟激素、前列腺素等,以鉴别、诊断、研究激素的生理和药理作用,目前较多用于研究激素与受体结合的机理。在传染病学方面广泛用于乙型肝炎抗原的亚型分类测定。在临床免疫学上测定免疫球蛋白 G、免疫球蛋白E及抗脱

简述放射免疫分析法的优缺点

  RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结

概述放射免疫分析法的测定方法

  分别在一定数量的试管中加入不同浓度的标准抗原(或未知样品),每管加入等量的放射性标记抗原和一定量的抗体,在4℃或37℃下保温,待反应平衡后,选用适当的方法将B和F分离,测量放射性强度,由放射性强度比B/T对Ag量制出标准曲线,即可从标准曲线上查出未知样品量。  测定时,首先要制备出纯的抗原和抗体

非同位素分析报道基因活性实验——萤火虫荧光素酶法

报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。实验材料转染细胞试剂、试剂盒PBS荧光素贮

放射免疫分析的同位素标记介绍

标记物标记物是指通过直接或间接的化学反应将放射性核素连接到被标记分子上所形成的化合物。制备高比度、高纯度和具完整免疫活性的标记物是建立高质量放射免疫分析法的重要条件。在放射免疫技术中,常用的放射性核素有放射γ射线和β射线两大类。前者主要为 125I、131I、57Cr 和 60Co;后者为3H、14

质谱仪同位素质谱分析法的特点

同位素质谱分析法的特点是测试速度快,结果,样品用量少(微克量级)。能测定元素的同位素比值。广泛用于核科学,地质年代测定,同位素稀释质谱分析,同位素示踪分析。

质谱分析法术语同位素

同位素(isotope)质子数Z相同,即原子序数相同,中子数N不同,在元素周期表中占有同一位置的核素称作同位素,同位素的化学性质相似,物理性质不同。

免疫放射分析法与放射免疫分析法的主要区别

免疫放射分析法标记抗体,放射免疫分析法标记抗原。此外,待测抗原是与过量(放免为限量)抗体结合

实际生活中放射免疫分析法的应用

  此法用于在内分泌学中测定胰岛素、生长激素、甲状旁腺激素、血管紧张素、催乳素、黄体化激素、促卵泡成熟激素、前列腺素等,以鉴别、诊断、研究激素的生理和药理作用,目前较多用于研究激素与受体结合的机理。在传染病学方面广泛用于乙型肝炎抗原的亚型分类测定。在临床免疫学上测定免疫球蛋白 G、免疫球蛋白E及抗脱

简述放射免疫分析法的基本原理

  使放射性标记抗原和未标记抗原(待测物)与不足量的特异性抗体竞争性地结合,反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为:  *Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性,两者以竞争性的方式与抗体Ab结合,形成*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,在一定反应时间后达到动态平衡

放射免疫分析法的优缺点分别有哪些?

RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等

放射免疫分析法的优缺点分别有哪些?

  RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。  本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影

关于放射免疫分析法的基本信息介绍

  1960年美国化学家R.S.耶洛和S.A.贝尔森提出此法,耶洛因此于1977年获得诺贝尔生理学或医学奖。  她从小酷爱自然科学。在大学里,她热衷于物理学,却致力於医学研究,她工作於纽约市布隆克斯区退伍军人医院,致力于「胜太荷尔蒙的放射免疫分析」。居里夫人自传和核子物理学家美籍意大利人费米的讲演,

质谱分析法术语同位素质谱法

同位素质谱法( (isotope mass spectrometry)用质谱仪器进行同位素组成的研究和原子质量测量的方法。主要用于核科学、同位素地质学、同位素地球化学和天体物质中同位素丰度的测定。随着同位素稀释法和稳定同位素标记技术的发展,同位素质谱法在生物学、临床医学、药学、农学和环境科学领域也得

质谱分析法术语稳定同位素

稳定同位素(stable isotope)称谓是相对放射性同位素而言的,一般指寿命极长的同位素,通常以半衰期109年为界,大于此数的同位素均可认为是稳定同位素。目前已经发现的稳定核素285种,其中的单核素元素21种,实际仅有264种稳定同位素。

质谱分析法术语同位素质谱

同位素质谱(isotope mass spectrum)按元素的同位素质量排序的质谱。

放射免疫分析法原理及操作注意事项

放射免疫分析的原理:就是利用放射性核素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。它又分为两种方法。一、竞争性RIA,又称传统RIA主要特点:标记的是抗原。其原理:未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物A

质谱分析法术语同位素示踪

同位素示踪( isotopic tracing)利用同位素的特征标记,追踪其在化学反应、生态环境、生物体内动态变化规律的过程和结果,被标记的同位素称作同位素示踪剂( isotopic tracer)。稳定同位素示踪剂以其质量数作为标记,放射性同位素示踪剂以其放出的特征射线作为标记。通过观测示踪剂的行

质谱分析法术语同位素丰度

同位素丰度(isotope abundance)某元素的任一同位素占有该元素总核素的百分比,它是用检测器检测的该元素任一同位素离子束强度除以同一检测器检测到的该元素所有同位素离子束强度集合的百分数度量。

质谱分析法术语同位素稀释法

同位素稀释法(isotope dilution method)采用同位素稀释进行定量分析的方法。如在含有自然丰度的某元素未知浓度溶液中,加入该元素已知丰度的定量浓缩同位素或贫化同位素溶液,等待两种溶液均匀混合,通过待测样品、混合溶液的同位素丰度质谱法测量,根据待测、浓缩和混合溶液中的同位素丰度和所加

血液的化学检验项目放射免疫分析介绍

放射免疫分析介绍:  放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量(10-9-10-15g)物质的新技术。广义来说,凡是应用放射性同位素标记的抗原或抗体,通过免疫反应测定的技术,都可称为放射免疫技术,经典的放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有

临床化学检查方法介绍放射免疫分析

放射免疫分析介绍:  放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量(10-9-10-15g)物质的新技术。广义来说,凡是应用放射性同位素标记的抗原或抗体,通过免疫反应测定的技术,都可称为放射免疫技术,经典的放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有