聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测

与琼脂糖凝胶不同,聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭,因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而,电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光,所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理与琼脂糖凝胶不同,聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭,因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而,电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光,所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中,这样会妨碍 DNA 的迁移并使 DNA 条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低,但较之前两种染料价格低廉,也可选用。试剂、试......阅读全文

DNA的化学检测项目介绍X染色质

X染色质介绍:  染色质与染色体是在细胞周期的不同时间所呈现形态结构不同的同一物质。X染色质正常值:  在妊娠16周前后,从孕妇腹壁外采取胎儿的羊水,用低速离心,使羊水中漂浮的胎儿脱落细胞沉淀,取沉淀物。镜下检查可数细胞100个,算出X小体的百分率。男胎的X小体占0%-2%,小于5%可判为男胎。X染

生化检测项目碱性磷酸酶染色介绍

碱性磷酸酶染色介绍:  碱性磷酸酶较多存在于成熟中性粒细胞中。在碱性条件下,碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油,磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应,生成棕色的硫化钴定位于胞质内。碱性磷酸酶染色正常值:  成熟中性粒细胞呈阳性,其他细胞均呈阴性。  阳性积分正常参考值

生化检测项目α茶酚醋酸酯酶染色介绍

α-茶酚醋酸酯酶染色介绍:  α醋酸萘酚酯酶为白细胞中的非特异性酯酶,能将基质液中的α醋酸萘酚水解,产生α萘酚,再与重氮盐偶联,生成灰黑色不溶性沉淀,定位于酶活性所在的胞质内。α-茶酚醋酸酯酶染色正常值:  原单核细胞、幼单核细胞、单核细胞、巨核细胞、血小板为阳性反应;各期粒细胞、幼红细胞、淋巴细胞

DNA的化学检测项目介绍姐妹染色单体互换

姐妹染色单体互换介绍:  姐妹染色单体交换是近年来细胞遗传学研究的一个新方法。其原理是,当细胞接触到5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)时,Brdu可作为核苷酸前体物,专一替代胸腺嘧啶掺入到新合成的DNA链中。只要通过两个细胞复制周期,就可使姐妹染色单体中的一条单体的DNA双链中,有一股链是掺入有Brd

脱落细胞学检测常用染色方法临检基础

脱落细胞学检测常用染色方法:染色是利用细胞中各种结构的生化组成不同,对染料的亲和力不同,而显示不同的颜色,使细胞的形态和结构易于辨认。常用的染色有HE.巴氏及瑞-姬氏染色,其特点如下。1.HE染色:此法染色效果也好,只是胞质色彩不丰富,不能用于观察阴道涂片对雌激素水平测定。优点是操作简易,试剂易配制

DNA的化学检测项目介绍Y染色质

Y染色质介绍:  男性Y染色体长臂远侧由异染色质构成,如用荧光染料染色时,可出现强荧光。Y染色质正常值:  可数100个细胞,计算阳性率,男胎的Y小体>50%,大于10%判为男胎;女胎的Y小体占0%-1%,小于5%则判为女胎。Y染色质临床意义:  临床上检查Y小体,也关联到X连锁遗传病,如血友病等只

NEJM:胎儿DNA检测新时代-早早孕时期检测染色体缺陷

  DNA测序已经以一种戏剧性的全新方式进入了医疗界:在早早孕时期检测染色体缺陷。25年来,我们知道,胎儿的DNA痕迹可以通过怀孕母亲的血液来进行检测,然而这些痕迹非常之小,而且到目前为止,我们尚没有技术来检测到DNA正常的多余染色体。  《新英格兰医学杂志》(The New England Jou

-NEJM:胎儿DNA检测新时代-早早孕时期检测染色体缺陷

  DNA测序已经以一种戏剧性的全新方式进入了医疗界:在早早孕时期检测染色体缺陷。25年来,我们知道,胎儿的DNA痕迹可以通过怀孕母亲的血液来进行检测,然而这些痕迹非常之小,而且到目前为止,我们尚没有技术来检测到DNA正常的多余染色体。  《新英格兰医学杂志》(The New England Jou

关于检测染色体和染色体组畸变—微核试验的基本介绍

  传统的体内微核试验仍然是检测化学物质染色体损伤的基本方法。目前微核试验方法主要有以下改进:1体外微核试验  常用细胞有中国仓鼠肺细胞(CHL)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)及中国仓鼠成纤维细胞(V79)等,近年开始有用L5178Y小鼠淋巴瘤细胞和人的类成淋巴细胞TK6。也有用叙利亚仓鼠胚胎(SHE

人类染色体姊妹染色单体差别染色

     姊妹染色单体区分染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是70年代中期发展起来的染色体处理技术。Latt(1973)在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),当用Hoechst33258 荧光染料染色时,发现了姊妹染色单体的色差反映和它们

革兰氏染色液染色法

  1.葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。    2.结晶紫染色液。    3.革兰氏碘液。    4.95%酒精。    5.番红染液。    6.载玻片。方   法     一、涂片标本的制备(见实验一)    二、革兰氏染色法     1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加结晶紫染液,染色1分钟,水洗

姐妹染色单体分化染色方法

姐妹染色单体差别染色可使中期染色体显示深浅不同的两条单体,能借以观察姐妹染色单体互换(SCE)现象。SCE是两条染色单体在DNA合成中核苷酸序列发生互换而表现出来一种现象。即是细胞分裂是DNA同源重组的结果。SCE既是一种无害的变化(有生理波动),也可受射线、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一

间接染色步骤(细胞表面染色)

实验概要间接标记需要两个孵育步骤,先与一抗再与合适的第二抗体孵育,二抗(不是一抗)结合了荧光染料(FITC、PE、Cy5 等)。请注意这是一个普遍的程序,您可以根据自己的使用情况进行调整。实验步骤1. 收集并洗涤细胞,然后确定细胞总数。细胞通常在聚苯乙烯的圆底 12 x 75 mm2 Falcon

姐妹染色单体分化染色实验

实验概要本文介绍了姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)的实验原理、操作步骤及注意事项等。实验原理姐妹染色单体分化染色法(Sister  chromatid  differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处

糖类染色实验——黏液物质染色

实验方法原理在人体和动物体中能够分泌黏液物质,依其物质中含有的酸基不同,所以分为中性黏液、酸性黏液和混合性黏液,也可被称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖,常用 Mowry 阿尔辛蓝高碘酸 Shiff 反应(ABPAS)染色方法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒阿尔辛蓝 8 GS冰醋酸蒸馏水麝香

姐妹染色单体分化染色实验

实验方法原理 细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷(5-Bromodeoxyuridine:BUdR)的培养基中,当细胞在DNA 合成时,BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷(Thymidine:TdR)被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时,由于半保留复制的机制,中期染色体的每条染色单体

姐妹染色单体分化染色实验

实验方法原理细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷(5-Bromodeoxyuridine:BUdR)的培养基中,当细胞在DNA 合成时,BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷(Thymidine:TdR)被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时,由于半保留复制的机制,中期染色体的每条染色单体D

染色质染色体和染色单体的区别

  (1)、染色质和染色体的主要成分都是DNA和蛋白质,它们之间的不同,不过是同一物质在细胞分裂间期和分裂期的不同形态表现而已。  染色质出现于间期,呈丝状。它们在核内的螺旋程度不一,螺旋紧密的部分,染色较深,有的螺旋松疏染色较浅,染色质在光镜下呈现颗粒状,不均匀地分布于细胞核中。细胞分裂时染色质细

支原体染色检测试剂盒使用说明

产品简介:支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒,其原理是当细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或

生化检测项目血酸性磷酸酶染色介绍

酸性磷酸酶染色介绍:  大部分血细胞内均存在酸性磷酸酶活性,胞质内的酸性磷酸酶在酸性条件下,经水解,再与硝酸铅、硫酸胺作用,可生成棕黄色或棕黄色的硫酸铅沉淀。酸性磷酸酶染色正常值:  阳性:粒细胞、T淋细胞、浆细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞和单核-巨噬系统细胞。酸性磷酸酶染色临床意义:  酸性磷酸

非随机-X-染色体失活的检测实验

实验材料gDNA 样品试剂、试剂盒NE 缓冲液Hpa Ⅱ 限制性内切核酸酶仪器、耗材微量离心管循环温度仪实验步骤展开

细胞凋亡检测实验——Annexin-V/PI双染色法

实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A

如何利用苏木素伊红染色法检测细胞凋亡?

苏木素-伊红(hematoxylin/eosin)染色法是一种用普通光学显微镜观察凋亡细胞形态学特征的简便方法。细胞凋亡时主要的形态学变化为细胞体积变小,胞质浓缩,染色质高度凝集、边缘化,呈新月状,随后染色质裂解成大小不等的块状,核膜裂解,细胞以类似胞吐的方式形成凋亡小体。苏木素容易被氧化,其氧化产

PNAS:拓展NIPT用于更微小染色体异常检测

  一组在德国工作的研究人员发现,实验给予有阿尔茨海默氏症类型症状的转基因小鼠两种不同类型的淀粉样-β抗体蛋白,可使它们的大脑患上神经功能障碍。他们的研究论文发表在《自然神经科学》杂志上,文章描述他们研究了该抗体对小鼠大脑的影响,并进一步描述了它可能用于治疗人类患者。  科学家们认为在大脑中的淀粉样

生化检测项目变性球蛋白(Heinz)小体染色试验介绍

变性球蛋白(Heinz)小体染色试验介绍:         葡萄糖-6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)缺乏可致红细胞内还原型谷胱甘肽含量减少,随之出现高铁血红蛋白增高,最后形成变性珠蛋白小体,这是附在细胞膜上的一种变性血红蛋白颗粒,又称血红蛋白包涵体,能补某些碱性染料染成紫色或蓝黑色小点。变性球蛋

肿瘤检测巴氏或HE染色检查介绍

巴氏或H-E染色检查介绍:  巴氏或H-E染色检查是对肿瘤细胞检查方法之一,两者的详细介绍:(1)巴氏染色法:本法染色特点是细胞具有多色性颜色,色彩鲜艳多彩。涂片染色的透明性好,胞质颗粒分明,胞核结构清晰,如鳞状上皮过度角化细胞胞质呈橘黄色;角化细胞显粉红色;而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色,适用于上皮

血细胞化学染色的染色法—铁染色的介绍

  (1)血细胞化学染色的染色法—铁染色的原理:人体内有一定量的以铁蛋白和含铁血黄素形式贮存的铁元素,这些铁在酸化的低铁氰化钾溶液中反应,生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀(普鲁士蓝),定位于含铁的部位。  (2)血细胞化学染色的染色法—铁染色的操作方法:将染色液滴加在骨髓小粒丰富的骨髓涂片上,室温20~30

血细胞化学染色的染色方法—-糖原染色(PAS)的介绍

  (1)血细胞化学染色的染色方法— 糖原染色(PAS)的原理:过碘酸将血细胞内的糖原氧化,生成醛基。醛基与雪夫液中的无色品红结合,形成紫色化合物,定位于细胞质中。  (2)血细胞化学染色的染色方法— 糖原染色(PAS)的操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分钟,流水冲洗,晾干。滴加过碘酸溶液

关于检测染色体和染色体组畸变—荧光原位杂交(FISH)技术的基本介绍

  荧光原位杂交最早由Bauman(1980)建立,后由Lucas(1989)首先应用于染色体畸变分析。其原理是按检测目标准备恰当的DNA序列作为探针,并用生物素标记,对载玻片上待测标本中的DNA杂交,最后通过杂交位点的荧光观察染色体结构或数目的改变。应用特殊染色体和染色体某区域的荧光探针可在体内检

革兰氏染色配制及染色方法实验

实验方法原理本染色法是最基本的染色法,可使用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。实验步骤一、实验试剂:1. 结晶紫溶液:A液:结晶紫:2g,95%乙醇:20ml。B液:草酸铵:0.8g,蒸馏水:80ml。需在用前24小时将A液. B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。2.