3.3核转录分析

核转录失控分析时,在体外将细胞核分离出来,然后在放射性同位素标记的核苷酸存在下进行转录,所合成的 KNA 均因掺入同位素而被标记,此混合 RNA 与固定在硝酸纤维素滤膜 h 的某一特定甚因的 DNA 探针杂交,就可以反映出该基因的转录狀态和转录速率。实验材料cDNA0.45um 硝酸纤维素 尼龙膜酵母 tRNA试剂、试剂盒PBSNP-40 裂解缓:20XSSCLNaOH甘油储存缓冲液10X 转录缓冲液核苷酸:ATPGTPCTP200uCi「α32P]-UTP10XSET蛋占酶 K无 RNase 的 DNaseCaCI2硫氰酸胍溶液Tris-SDS 缓冲液水饱和酚氯仿异戊醇无水乙醇异丙醇乙酸钠仪器、耗材紫外交联仪 D狭缝印迹装杂交箱实验步骤一材料与设备1)cDNA2)PBS3)NP-40 裂解缓:0.5%NP-40,10mmol/LTris-HCl(pH7.4),3 mmol/LMgCl2,10 mmol/LNaCl4)20XSS......阅读全文

核转录分析

            实验材料 cDNA 0.45um 硝酸纤维素 尼龙膜 酵母 tRNA 试剂、试剂盒 PBS

核转录分析

实验材料 cDNA0.45um 硝酸纤维素 尼龙膜 酵母 tRNA试剂、试剂盒 PBS NP-40 裂解缓: 20XSSC LNaOH 甘油储存缓冲液 10X 转录缓冲液 核苷酸:ATPGTPCTP 200uCi「α32P]-UTP 10XSET 蛋占酶 K 无 RNase 的 DNase

3.3-核转录分析

核转录失控分析时,在体外将细胞核分离出来,然后在放射性同位素标记的核苷酸存在下进行转录,所合成的 KNA 均因掺入同位素而被标记,此混合 RNA 与固定在硝酸纤维素滤膜 h 的某一特定甚因的 DNA 探针杂交,就可以反映出该基因的转录狀态和转录速率。实验材料cDNA0.45um 硝酸纤维素 尼龙膜酵

核转录终止分析的方法概念

中文名称核转录终止分析英文名称nuclear run-off assay;run-off transcription assay定  义用分离的细胞核研究其对特定基因转录作用的一种类似核连缀分析的方法,但更侧重于测定转录的终止位置,体外转录可进行到模板最末端,以分析转录本的长度。应用学科生物化学与分

真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录的区别

  真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录过程在总体上基本相同,但是,其过程要复杂得多,主要有以下几点不同:  1、真核生物RNA的转录有的是在细胞核内进行的,而蛋白质的合成则是在细胞质内进行的。且真核生物线粒体和叶绿体的遗传信息系统被称为真核细胞的第二遗传信息系统,或核外基因及其表达体系。这是

真核生物的转录终止

真核生物的转录终止,是和这类转录后修饰密切相关的。真核mRNA3’端在转录后发生修饰,加上多聚腺苷酸(polyA)的尾巴结构。大多数真核生物基因末端有一段AATAAA共同序列,再下游还有一段富含GT序列,这些序列称为转录终止的修饰点。真核RNA转录终止点在越过修饰点延伸很长序列之后,在特异的内切核酸

真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录过程差异

⒈ 真核生物RNA的转录有的是在细胞核内进行的,而蛋白质的合成则是在细胞质内进行的。且真核生物线粒体和叶绿体的遗传信息系统被称为真核细胞的第二遗传信息系统,或核外基因及其表达体系。这是因为研究发现,线粒体和叶绿体中除有DNA外,还有RNA(mRNA、tRNA、 RNA)、核糖体、氨基酸活化酶等。说明

真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录过程的区别

⒈ 真核生物RNA的转录有的是在细胞核内进行的,而蛋白质的合成则是在细胞质内进行的。且真核生物线粒体和叶绿体的遗传信息系统被称为真核细胞的第二遗传信息系统,或核外基因及其表达体系。这是因为研究发现,线粒体和叶绿体中除有DNA外,还有RNA(mRNA、tRNA、 RNA)、核糖体、氨基酸活化酶等。说明

原核生物的转录终止特点

原核生物的转录终止有两种形式,一种是依赖ρ(Rho)因子的终止,一种是不依赖ρ因子的终止。原核生物DNA没有共有的终止序列,而是转录产物序列指导终止过程。转录终止信号存在于RNA产物3’端而不是在DNA模板。1、依赖ρ因子的转录终止Rho因子是rho基因的产物,广泛存在于原核和真核细胞中,由6个亚基

真核生物的转录终止特点

真核生物的转录终止,是和这类转录后修饰密切相关的。真核mRNA3’端在转录后发生修饰,加上多聚腺苷酸(polyA)的尾巴结构。大多数真核生物基因末端有一段AATAAA共同序列,再下游还有一段富含GT序列,这些序列称为转录终止的修饰点。真核RNA转录终止点在越过修饰点延伸很长序列之后,在特异的内切核酸

真核基因转录水平的调控2

(3)增强子的位置可在基因5′上游、基因内或其3′下游的序列中,而其作用与所在基因旁侧部位的方向似无关系,因为无论正向还是反向,它都具有增强效应;(4)增强子所含核苷酸序列大多为重复序列,其内部含有的核心序列,对于它进入到另一宿主之后重新产生增强子效应至关重要;(5)增强子一般都具有组织和细胞特异性

真核基因转录水平的调控1

一、真核生物的RNA聚合酶有三种RNA聚合酶:RNA聚合酶Ⅰ;RNA聚合酶Ⅱ;RNA聚合酶Ⅲ。二、真核基因顺式作用元件(一)、顺式作用元件概念指DNA上对基因表达在调节活性的某些特定的调控序列,其活性仅影响其自身处于同一DNA分子上的基因。(二)、种类启动子、增强子、静止子1、启动子的结构和功能启动

关于真核生物的转录终止介绍

  真核生物的转录终止,是和这类转录后修饰密切相关的。真核mRNA3’端在转录后发生修饰,加上多聚腺苷酸(polyA)的尾巴结构。大多数真核生物基因末端有一段AATAAA共同序列,再下游还有一段富含GT序列,这些序列称为转录终止的修饰点。真核RNA转录终止点在越过修饰点延伸很长序列之后,在特异的内切

关于原核生物的转录终止介绍

  原核生物的转录终止有两种形式,一种是依赖ρ(Rho)因子的终止,一种是不依赖ρ因子的终止。原核生物DNA没有共有的终止序列,而是转录产物序列指导终止过程。转录终止信号存在于RNA产物3’端而不是在DNA模板。  1、依赖ρ因子的转录终止  Rho因子是rho基因的产物,广泛存在于原核和真核细胞中

PNAS突破:单个细胞核转录组测序

  研究人员成功地从单个脑细胞细胞核中分离出全部的信使RNA并对其进行了测序。这项发表在《美国科学院院刊》(PNAS)上的新研究,将帮助研究人员更好地了解一些器官在健康和疾病状态下的功能机制,为开发出个体化治疗提供了又一块跳板。   动物和植物中的大多数细胞都包含有一个细胞核,里面储存着细胞的DN

原核生物的转录终止有几种形式?

原核生物的转录终止有两种形式,一种是依赖ρ(Rho)因子的终止,一种是不依赖ρ因子的终止。原核生物DNA没有共有的终止序列,而是转录产物序列指导终止过程。转录终止信号存在于RNA产物3’端而不是在DNA模板。1、依赖ρ因子的转录终止Rho因子是rho基因的产物,广泛存在于原核和真核细胞中,由6个亚基

关于真核生物的基因调控—真核基因的转录分类介绍

  几乎所有的真核生物的 mRNA都有一个5′帽端,但并不是所有基因的mRNA都有3′多聚A尾部,也不是所有基因的mRNA都必须经过拼接。根据这后两种加工过程的有无和复杂程度,可将真核基因的转录单位分为两大类型:一类是简单的只编码产生一种蛋白质的基因,另一类是复杂的编码两种或更多种蛋白质的转录单位。

大鼠核转录因子(NFkB-)ELISA检测法

大鼠核转录因子(NF-kB )ELISA试剂盒 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 NF-kB 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 NF-kB 与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠NF-kB ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加

人核转录因子elisa试剂盒使用说明

检测范围                                                     80 ng/L -2000 ng/L 使用目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中核转录因子(NF-kB )含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核转录因子(NF-k

人核转录因子(NFkB-)ELISA试剂盒

人核转录因子(NF-kB )ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 NF-kB 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 NF-kB 与单抗结合,加入生物素化的抗人NF-kB ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工

小鼠核转录因子(NFkB-)ELISA试剂盒

小鼠核转录因子(NF-kB )ELISA试剂盒 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 NF-kB 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 NF-kB 与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠NF-kB ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加

连缀转录分析实验

            实验方法原理 离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管,聚丙烯管,刀片,预设到 30°C 的振荡水浴,预设到 4°C 和 65°C 的水浴 实验材

连缀转录分析实验

实验方法原理 离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管,聚丙烯管,刀片,预设到 30°C 的振荡水浴,预设到 4°C 和 65°C 的水浴实验材料 非重组质粒载体含感兴趣 cDNA 或基因的重组质粒培养细胞或新鲜组织试剂、试剂盒 氯仿DNA变性溶液乙醇甘油贮

连缀转录分析实验

核连缀分析用于确定某个克隆的基因是否受转录调控。理论上,核连缀分析应该在检测稳定状态 mRNA 水平变化的杂交实验之后,而在启动子分析之前进行。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,

逆转录发生在细胞核还是细胞质

逆转录既不发生在细胞核也不发生在细胞质……它是一些RNA病毒繁殖的必要途径。事实上,逆转录是发生在被侵蚀细胞的细胞质基质里哒喵

Cell:武汉大学阐明真核基因中的转录调控机制

  近日,来自武汉大学、加州大学圣地亚哥分校的研究人员在新研究中证实,SR蛋白与7SK和启动子相关新生(Nascent )RNA协同作用,促进了转录过程中停顿的聚合酶释放。这一研究发现为阐明真核基因中的转录调控机制,深入了解相关疾病提供了重要的理论依据。相关论文发表在5月9日的《细胞》(Cell

转录分析的几种方法

信号通路,只有一个目的:将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素,还是异亮氨酸,抗原还是肾上腺素,它们的终极目的总是如出一则:对转录活性的改变。 这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域:如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验(the electrop

反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法

实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1.  加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸,盖上平板,置于37℃培养箱中温育1~2 h。2.  将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或

简述核磁分析原理

  核磁分析是指核磁共振波谱法(Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR )NMR是研究原子核对射频辐射(Radio-frequency Radiation)的吸收,它是对各种有机和无机物的成分、结构进行定性分析的最强有力的工具之一,有时亦可进行定量分

核磁图谱怎么分析

目前应用的主要是氢谱和碳谱。以核磁共振氢谱为例,峰的数量就是氢的化学环境的数量,而峰的相对高度,就是对应的处于某种化学环境中的氢原子的数量。使用核磁共振仪自带的自动积分仪可以对各峰的面积进行自动积分,得到的数值用阶梯式积分曲线高度表示出来。  不同化学环境中的H,其峰的位置是不同的。峰的强度(也称为