反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或DE81滤纸上，其上盖一张塑料薄膜用2号铅笔做标记。 3. 将滤纸置于一个盘中，加2XSSC覆盖。室温下在摇床上轻轻摇动冼涤20 min 弃去SSC重复洗涤步骤2次。在95%乙醇中浸泡1 min，空气中晾干约10 min。4. 在闪烁计数仪中计数或用感光片曝光。......阅读全文
反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞试剂、试剂盒 polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材 培养皿滤膜实验步骤 1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培养皿标记为阳性对照，1个为阴性对照，1个用于待测病毒原液。2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01
反转录病毒原液检测实验
辅助病毒是一种有时存在于无复制能力病毒原液中的有复制能力的病毒，辅助病毒的存在在动物的感染及谱系分析中会成为问题。实验材料病毒细胞试剂、试剂盒polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材培养皿滤膜实验步骤1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞 试剂、试剂盒 polybrene 小牛血清 DMEM
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
离心法 聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒 实验材料 病毒细胞 试剂
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒实验材料病毒试剂、试剂盒PEGNTE仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 制备病毒原液。加5
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
实验材料 病毒细胞试剂、试剂盒 小牛血清仪器、耗材 滤器转子实验步骤 1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中，培养细胞至50%~90%汇片。2. 弃去培养液，轻轻加入半量的培养液，注意培养液碱性不要过大，培养2~3天。 3. 收取上清，用
反转录病毒原液检测实验——在TrisTricine缓冲系统中电泳
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tricine样品缓冲液考马斯亮蓝染色液乙酸仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7，配制溶液并灌制分离胶和积层胶。 2. 制备样品，但采用2×Tricine的样品缓冲液，加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合
大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验——离心法
对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。实验材料病毒细胞试剂、试剂盒小牛血清仪器、耗材滤器转子实验步骤1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞
反转录病毒载体的制备实验
实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开
作为逆转录病毒警报的酶
研究人员发现一种叫做环-GMP-AMP合成酶(简称cGAS)的特殊的酶可作为一种应对HIV及其它逆转录病毒的免疫感测器，它会在出现第一个感染迹象时拉响警报。尽管人们在逆转录病毒中有着巨大的生物医学兴趣，但人们就身体对就逆转录病毒的先天免疫反应仍然知之甚少，而它又转而阻碍了疫苗的研发。
信使RNA的反转录酶与反转录过程
定义：以反义RNA为模版，通过反转录酶，进行的RNA转录 1．概念反转录是以RNA为模板合成DNA的过程，也称逆转录。这是DNA生物合成的一种特殊方式。 2．反转录酶与反转录过程 反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合
假包膜型反转录病毒载体的制备实验
实验材料反转录病毒载体质粒试剂、试剂盒293GP 和 NIH3T3 细胞的培养物仪器、耗材超速离心机细胞培养皿聚丙烯管灭菌无热原的注射器式滤器超干净的离心管宽嘴离心瓶超速离心机G S A 转子实验步骤展开
反转录病毒产毒细胞系建立实验
实验材料 包装细胞系试剂、试剂盒 HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材 培养皿培养板离心机实验步骤 1. 在转染前1天，在10 cm 培养皿中接种包装细胞，接种密度大约相当于10%~20%片的细胞数。2. 将10 μg 含有药物抗性基因的反转录病毒质粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
反转录病毒产毒细胞系建立实验
建立一个能产生高水平的反转录病毒构建体的细胞系是一个长期的过程。首先，必须将反转录病毒构建体稳定地导入一种适当的包装细胞系中。当产生了稳定的细胞系后，必须对之进行鉴定，从中选出能产生具有正确结构的高滴度的病毒的细胞系。实验材料包装细胞系试剂、试剂盒HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材培养皿培养
反转录病毒产毒细胞系建立实验
反转录病毒载体导入包装细胞系 测定病毒滴度 培养细胞的Xgal染色 实验材料 包装细胞系
反转录病毒的传播介绍
反转录病毒在自然界的传播分为水平传播和垂直传播。水平传播是通过个体接触而传播,例如猫白血病病毒的传播。垂直传播即由上一代向下一代的传递,病原体长期在机体内潜伏,不表现出任何特征,也不引起疾病的任何症状。只有在特殊条件的影响下,病毒才活跃起来,对宿主而言,就有可能诱发肿瘤的发生发展,以至死亡。这种
反转录病毒的特点介绍
1）病毒为球形,直径100~120纳米,衣壳20面体立体对称,有包膜； 2）基因组为二倍体（唯一基因组非单倍体的病毒）,两个相同+ssRNA； 3）含有逆转录酶和整合酶； 4）复制通过DNA中间体,并与宿主细胞的染色体整合（唯一会主动整合的病毒）； 5）具有gag、pol、env编码基因
浅谈几种逆转录病毒的检测方法
按照中国药典三部中，生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制中表1的要求，逆转录病毒是细胞内、外源病毒因子检查中的重要一环，今天我们将就逆转录病毒的检查要求进行总体介绍，并于后续的推文中逐步介绍其检查方法。已知鸡胚成纤维细胞（CEF）或其他禽源性细胞含有逆转录病毒序列，常可产生缺陷型逆转录病毒颗
反转录酶具有哪些活性？
多反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性 。 ①RNA指导的DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反
反转录酶的合成步骤
1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL3、65℃保温5min，然后冰浴5min；4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL10×M-MLVReactionBuff
关于转录酶的特点介绍
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点： ①以DNA为模板； ②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸； ③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应； ④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸； ⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
连缀转录分析实验
实验方法原理 离心机和转头，沸腾的水浴锅， Dounce 匀浆器，晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管，聚丙烯管，刀片，预设到 30°C 的振荡水浴，预设到 4°C 和 65°C 的水浴实验材料 非重组质粒载体含感兴趣 cDNA 或基因的重组质粒培养细胞或新鲜组织试剂、试剂盒 氯仿DNA变性溶液乙醇甘油贮
连缀转录分析实验
实验方法原理 离心机和转头，沸腾的水浴锅， Dounce 匀浆器，晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管，聚丙烯管，刀片，预设到 30°C 的振荡水浴，预设到 4°C 和 65°C 的水浴 实验材
连缀转录分析实验
核连缀分析用于确定某个克隆的基因是否受转录调控。理论上，核连缀分析应该在检测稳定状态 mRNA 水平变化的杂交实验之后，而在启动子分析之前进行。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理离心机和转头，沸腾的水浴锅， Dounce 匀浆器，
简述反转录病毒的结构特征
（1）所有的反转录病毒都有一个结构特征,即粗大的球形颗粒,大小为 80~100 nm。并有完好的突起的外膜。 （2）反转录病毒颗粒的化学成分几乎是一样的,RNA 占 2%,蛋白质占 60%~70%,其中 5%~ 7% 是复杂的糖蛋白,脂类为 30%~40%,碳水化合物为 1%~2%。 （3）
关于反转录病毒的基本介绍
逆转录病毒（Retrovirus）,又称反转录病毒,属于RNA病毒中的一类,它们的遗传信息不是储存在脱氧核糖核酸（DNA）,而是储存在核糖核酸（RNA）上。逆转录病毒基因组为二倍体,两条相同的单股正链RNA,其两端为长末端重复序列（LTR）,内含有较强启动子和增强子,对病毒DNA的转录调控具有重
反转录病毒感染的介绍
反转录病毒的感染能否实现,取决于细胞的特性,细胞的分裂时相以及与病毒有关的受体是否存在。而病毒的感受性则由细胞基因所决定。只有在许多条件都具备时,肿瘤因子才能感染细胞。首先,病毒吸附在细胞表面。在这一过程中,细胞受体及膜蛋白起主导作用,细胞没有相应的受体就不会被病毒感染。在敏感的细胞里,吸附的病
逆转录病毒的特点
1）病毒为球形，直径100~120纳米，衣壳20面体立体对称，有包膜；2）基因组为二倍体（唯一基因组非单倍体的病毒），两个相同+ssRNA；3）含有逆转录酶和整合酶；4）复制通过DNA中间体，并与宿主细胞的染色体整合（唯一会主动整合的病毒）；5）具有gag、pol、env编码基因，以及长末端重复序列
逆转录病毒的分类
逆转录病毒亚科该亚科中常见的病毒肿瘤病毒亚科 （禽类）rous肉瘤病毒（RSV），rous 相关病毒（RAV），其他鸡肉瘤病毒,禽白血病病毒（ALV）（哺乳类）鼠肉瘤病毒（MSV），鼠白血病毒（MLV），鼠内源性病毒，猪肉瘤病毒，牛白血病病毒，猪白血病病毒，鼠乳腺瘤病毒（灵长类）灵长类肉瘤病毒，猴