冷冻组织及切片的准备实验

为了获得较好的结果,应当用新鲜的组织,因为在-80°C 中保存超过 24 h 的样品,其RNA 的产量和完整性将大打折扣。尽管有几个实验小组曾经报道用 LCM 技术从石蜡包埋的组织中获得了没有降解的 RNA, 但作者还是推荐使用冷冻的组织块。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料新鲜的组织试剂、试剂盒丙酮蒸馏水干冰磷酸盐缓冲液(PBS)Tek OCT 组织复合物仪器、耗材封闭容器烧杯恒冷装置解剖工具平盘组织模子载玻片刀片实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂丙酮蒸馏水干冰磷酸盐缓冲液(PBS)Tek OCT 组织复合物(Sakura FinetekUSA,Torrance,CA)2. 特殊设备封闭容器烧杯恒冷装置解剖工具平盘可以削去的一次性组织模子(Pelco International,Redding,CA)普通的无粘片剂的载玻片Sakura 刀片(IMEB,SanMarcos,CA)3. 细......阅读全文

冷冻离心机的冷冻有什么作用

  离心机就是利用离心力使得需要分离的不同物料得到加速分离的机器。冷冻离心机有分为低速、高速冷冻离心机,以及超速分析、制备两用冷冻离心机等多种型号。  转速一般不超过4000rpm,最大容量为2—4L,是实验室最常用于大量初级分离提取生物大分子、沉淀物等。其转头多用铝合金制的甩平式和角式两种,离心管

细胞冷冻保存

实验概要细胞的冷冻保存实验材料材料: 1  生长良好之培养细胞 2  新鲜培养基 3  DMSO (Sigma D-2650) 4  无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020) 5  0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061) 6  血球计数盘

冷冻细胞活化

实验概要1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。 2. 细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。实验材料材料:       37 ℃ 恒温水槽        新鲜培养基        无

冷冻切片操作

1.冷冻切片机要始终处于运行状态,即使在不做冷冻切片时也要开着致冷,不能时开时关,以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定,因固定过的组织不利于切片,而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂,起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上,OCT不要太多,以免流到固定头外,组织表

冷冻电镜

说起冷冻电镜,小编想不管是研究生还是教授大咖,可能和科研有那么一丁点联系的人对这个名字都不会陌生,因为它实在太出名了!基于冷冻电镜产出的科研成果很多都发表在Nature、Science、Cell等顶刊上(羡慕脸),堪称NSC神器。冷冻电镜技术的发展直接带动了生命科学领域,特别是结构生物学的飞速发展,

组织学——组织切片

·         Histological techniques (William H. Heidcamp)Very detailed guide to histological techniques, like  fixation, dehydration, embedment and subs

组织学——组织制备

·         Histological techniques (William H. Heidcamp)Very detailed guide to histological techniques, like  fixation, dehydration, embedment and subs

冷冻离心机冷冻效果差的原因分析

冷冻离心机因为离心腔内温度需要到零下才能达到理想的离心效果,有些外界因素会影响到离心效果,特总结如下:1.环境温度过高,离心室内温度过高;2.离心机放置得离墙太近3.制冷系统中冷媒泄露或混入空气,制冷管道受阻不畅或断裂;4.冷凝器内散热片被灰尘阻塞或冷风机不运转;5.修理后重新灌入的冷媒量过多或过少

南瓜茎的机械组织——厚角组织和厚壁组织

机械组织,它使植物有机体及其器官更具坚固性和稳定性,是植物的骨架。一般说机械组织包括厚角组织和厚壁组织(纤维和石细胞),它们多分布在皮层和维管束中。 厚角组织一般分布在茎的棱角处,是生活的细胞,用低倍物镜观察南瓜茎横切面的永久制片,见厚角组织是一束束的细胞,由于它们出现于正在生

怎么解决液氮冷冻机冷冻不循环的问题?

  一般来说液氮冷冻机内部已含有冷冻循环泵,速冻机(大型)内部是不含有冷冻循环泵,这时在装配冷冻系统时,速冻机公司需外置安接冷冻循环泵,使冷冻在吸收了被冷却设备的热量后,回流到速冻机内制冷降温,也即使冷冻供回管道形成一个循环系统。  需要注意的是无论冷冻泵是内置或外置时,建议冷冻泵的位置要较冷冻蓄水

冷冻撕裂的概念

中文名称冷冻撕裂英文名称freeze-fracturing定  义电子显微镜标本制备中的一个方法,冷冻标本在真空下断裂,暴露出膜和细胞器平面,以金属浇铸法复制这些断裂面,最终图像与自然状态下的原料图像相似。该法不用固定剂也不用脱水。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

冷冻保存细胞方法

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃(30-60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16-18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80 ℃以下, 再放入液氮中长期储存。注意:-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造

LSCM液氮冷冻法

液氮冷冻法:成年小鼠和大鼠的脑及稍大一些的组织块也可采用此方法冷冻。将组织块置于样品台的 OCT中,为防止组织块爆裂,先在液氮中迅速浸提几次,时间从1s开始逐渐增加,直至样品温度与液氮温度平衡,之后移至冷冻切片机中,使温度与切片机箱体温度一致,进行冷冻切片。

冷冻干燥原理

冷冻干燥是指通过升华从冻结的生物产品中去除水分或其他溶剂的过程。升华指的是溶剂,比如水,象干冰一样,不经过液态,从固态直接变为气态的过程。冷冻干燥得到的产物称作冻干物(lyophilizer),该过程称作冻干(lyophilization)。为什么要选择冷冻干燥传统的干燥会引起材料皱缩,破坏细胞。在

冷冻机简介

  冷冻机是指一种用压缩机改变冷媒气体的压力变化来达到低温制冷的机械设备。所采用的压缩机,因其使用条件和压缩工作介质的不同,它又不同于一般的空气压缩机。按冷冻机结构和工作原理上的差别,它与空气压缩机类似,也可分为活塞式、螺杆式、离心式等几种不同形式。冷冻机是压缩制冷设备中最重要的组成部分之一。冷冻机

程序冷冻仪Planer

   英国Planer公司是世界上最早的研制及生产程序冷冻仪(Control Rate Freezer)的专业公司。多年来Planer公司一直处于程序冷冻保存领域的领先地位。胚胎,精子,干细胞, 血袋, 骨髓等生物样品的长期保存,冷冻是唯一的保存方法。保存是否成功取决于样品解冻后的成活率。   

快速冷冻的定义

中文名称快速冷冻英文名称quick freezing定  义将样品置于-196℃液氮中使之迅速冷却的过程。多用于生物样本的标本制作。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

神奇的冷冻研磨

【摘要】对于一些脂肪、水分含量高的样品,一般的研磨方式无法达到理想的效果,且看IKA®采用的冷冻研磨手段是如何解决这一难题的。在实验室前处理过程中,我们常常会遇到一些难以处理的样品,水分含量高的、油性的,譬如糖果、巧克力,蜜饯等。如果直接研磨,高速运转的马达会带来温度的上升,往往使得这些样品出现粘结

细胞的冷冻保存

1. 注意事项:1.1. 欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。1.2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。不宜将冻存细胞放置在0℃~-60℃这一温度范围内过久,低温损

什么是液氮冷冻

液氮冷冻治疗是一种冷冻生物学的综合效应。正常细胞在极度冷冻的状态下,会发生不可逆转的损害。它就是通过极度冷冻的状态下,将病区细胞迅速杀死,使得病区得到正常的恢复,一般用来治疗鸡眼、疣、神经性皮炎以及皮肤病等。严重的寒冷性荨麻疹、冷球蛋白血症、雷诺氏症,及少数年老、体弱、对冷冻治疗不能耐受者。糖尿病伴

冷冻电镜成像

冷冻电镜成像冷冻的样品冷冻输送器转移到电镜的样品室,在电镜成像之前,需确认样品中的水处于玻璃态。由于生物样品对高能电子的辐射敏感,成像时必须使用低剂量技术(

冷冻切片应用特点

(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(

病毒冷冻保藏技术

实验概要Snap freezing, or flash freezing, is the process by which samples are lowered to temperatures below -70°C very rapidly using dry ice or liquid

什么是冷冻蚀刻?

冷冻蚀刻是指将标本置于-100˚C的干冰或-196˚C的液氮中进行冰冻,然后用冷刀将标本断开,升温后冰在真空条件下迅即升华,暴露出断面结构。蚀刻后,向断面以45度角喷涂一层蒸汽铂,再以90度角喷涂一层碳,加强反差和强度。然后用次氯酸钠溶液消化样品,把碳和铂的膜剥下来,此膜即为复膜(replica)。

冷冻电镜原理

冷冻电镜原理冷冻电子显微学解析生物大分子及细胞结构的核心是透射电子显微镜成像,其基本过程包括样品制备、电子显微镜成像、图像处理及结构解析等几个基本步骤。冷冻电镜解析结构步骤  图片来源:中科院计算所透射电子显微镜成像过程中,电子束穿透样品,将样品的三维电势密度分布函数沿着电子束的传播方向投影至与传播

冷冻电镜原理

冷冻电镜原理冷冻电子显微学解析生物大分子及细胞结构的核心是透射电子显微镜成像,其基本过程包括样品制备、透射电子显微镜成像、图像处理及结构解析等几个基本步骤(图3.1)。在透射电子显微镜成像中,电子枪产生的电子在高压电场中被加速至亚光速并在高真空的显微镜内部运动,根据高速运动的电子在磁场中发生偏转的原

冷冻电镜分类

冷冻电镜分类目前我们讨论的冷冻电镜基本上指的都是冷冻透射电子显微镜,但是如果我们以使用冷冻技术的角度定义冷冻电镜的话,冷冻电镜主要可以分为冷冻透射电子显微镜、冷冻扫描电子显微镜、冷冻蚀刻电子显微镜。 冷冻透射电子显微镜冷冻透射电镜(Cryo-TEM)通常是在普通透射电镜上加装样品冷冻设备,将样品冷却

冷冻蚀刻电镜技术

冻蚀刻(Freezeetching)技术是从50年代开始发展起来的一种将断裂和复型相结合的制备透射电镜样品技术,亦称冷冻断裂(Freezefracture)或冷冻复型(Freezereplica),用于细胞生物学等领域的显微结构研究。

液氮罐细胞冷冻

液氮罐细胞冷冻  细胞冻存是细胞生存的重要要领之一。使用冻存技能将细胞置于-196~C液氮中低温生存,可以使细胞临时离开生长状态而将其细胞特性生存起来,如许在必要的时间再苏醒细胞用于实行。并且适度地生存肯定量的细胞,可以防备因正在造就的细胞被污染或其他不测变乱而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此

什么是冷冻撕裂?

中文名称冷冻撕裂英文名称freeze-fracturing定  义电子显微镜标本制备中的一个方法,冷冻标本在真空下断裂,暴露出膜和细胞器平面,以金属浇铸法复制这些断裂面,最终图像与自然状态下的原料图像相似。该法不用固定剂也不用脱水。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)