冷冻切片操作
1.冷冻切片机要始终处于运行状态,即使在不做冷冻切片时也要开着致冷,不能时开时关,以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定,因固定过的组织不利于切片,而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂,起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上,OCT不要太多,以免流到固定头外,组织表面露在OCT外。4. 外固定头放在冷冻机内的速冷台上,在-25℃左右,冻10min,视组织不同而时间略有差异,组织较大或脂肪组织时间可长一些,一般情况下10min左右即 可。如果冷冻不足,则切片可呈粥糜状或切不下来;如果冷冻过分,则切片呈碎悄状或切片上呈条痕状,都得不到良好的切片。5.高速刀的角度,固定好,切片刀要快。6. 把冻好的冻头夹到切片机上,用精调修平组织,使其暴露最大切面,将微调刻度调在5μm,放下抗卷板开始切片,得到满意切片后,打开抗卷板,将组织贴在载玻片上。载玻片要放平。动作要稳,一次完成,这样才能将切片完整......阅读全文
冷冻切片操作
1.冷冻切片机要始终处于运行状态,即使在不做冷冻切片时也要开着致冷,不能时开时关,以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定,因固定过的组织不利于切片,而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂,起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上,OCT不要太多,以免流到固定头外,组织表
石蜡切片与冷冻切片的区别
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
冷冻切片应用特点
(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(
冷冻组织切片制作
实验试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇实验设备载玻片,Whatman 1#滤纸,低倍光学显微镜实验材料未受损伤的组织
冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作
实验目的1 掌握冷冻切片的方法2 掌握冷冻切片的用途实验原理 冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。速冻 可减小冰晶直径,避免组织细胞损伤。制冷 压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷 实验材料 新鲜动物肝脏实验方法 1 准备 将仪器 打开,样品台温度调至-4
冷冻切片的应用介绍
(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(
冷冻组织切片的制作
实验概要本实验介绍了冷冻组织切片制作的基本操作流程。主要试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇主要设备载玻片,Whatm
冷冻切片仪器应用介绍
以Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机为例,该机的箱面上有电子控制板,装有即时冷冻键和除霜键,启动即时冷冻键,机器马上进行工作状态,并可持续10mins。启动即时除霜键,可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉,并可持续15mins。有照明键一个,启动该键可照明工作间,有利工作及观察组织的
冷冻超薄切片术
中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定 义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片,而那些稳定的
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
什么是冷冻切片术?
是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。冷冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冷冻切片法,二氧化碳冷冻切片法,甲醇循环制冷冷冻切片法等。这些方法,随着时代的变迁,科技的发展,许多年前被认为是非常重要的技术,也逐步被淘
冷冻组织切片的制作实验
实验试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇实验设备载玻片,Whatman 1#滤纸,低倍光学显微镜实验材料未受损伤的组织
冷冻切片术技术简介
是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。冷冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冷冻切片法,二氧化碳冷冻切片法,甲醇循环制冷冷冻切片法等。这些方法,随着时代的变迁,科技的发展,许多年前被认为是非常重要的技术,也逐步被淘
冷冻超薄切片原理和使用
冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。它是把样品进行冷冻固定后,进行超薄切片,省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。样励在切片前后,不经过强烈的化学处理,约胞结构能得到很好的保存;尤其是可溶性成分小会被抽提,使得电镜图像更接近于生物
快速了解冷冻含水超薄切片
冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理,均可使生物样品受到物理和化学性损伤,引起组织和细胞内蛋白质分子变性,大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷,人们创造了冷冻
LSCM组织的冷冻包埋和切片
组织的冷冻包埋和切片 组织的冷冻方法可根据固定和保存条件不同而不同,尽可能加快冷冻速度以力求减少组织在冷冻 过 程 中 冰晶 的 形 成 。组织冷冻后 ,使用冷冻切片机,将组织切成 5 ~ 15 μm 的切片,粘贴于处理过的载玻片上,室温干燥 1h 后,可进行免疫荧光抗体标记。或放入载玻片盒,- 8
冷冻组织及切片的准备实验
实验材料 新鲜的组织试剂、试剂盒 丙酮 蒸馏水 干冰磷酸盐缓冲液(PBS) Tek OCT 组织复合物仪器、耗材 封闭容器烧杯 恒冷装置 解剖工具 平盘组织模子载玻片刀片实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂丙酮蒸馏水干冰磷酸盐缓冲液(PBS)Tek OCT 组织复合物(Sakura Finet
冷冻组织及切片的准备实验
实验材料 新鲜的组织 试剂、试剂盒 丙酮 蒸馏水 干冰 磷酸盐缓冲液(PBS
冷冻组织及切片的准备实验
为了获得较好的结果,应当用新鲜的组织,因为在-80°C 中保存超过 24 h 的样品,其RNA 的产量和完整性将大打折扣。尽管有几个实验小组曾经报道用 LCM 技术从石蜡包埋的组织中获得了没有降解的 RNA, 但作者还是推荐使用冷冻的组织块。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼
冷冻超薄切片术技术简介
中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定 义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
病理制片技术——冷冻切片的制作
一、概述 冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。与石蜡切片相比,由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度 快,是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。此外由于冷冻切片的标本是未经固定的新鲜组织,因此冷冻切片也是脂肪染色、酶
冷冻切片术切片机的使用及注意事项
切片机的使用抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离,使切片平滑通过。抗卷板略高于刀面的最高点。可凭经验调整刀对组织的角度,一般新刀为20゜。操作程序:先接通电源,调定恒冷箱温度,调整切片刀的角度,调定切片厚度,标本置载台致冷达所需温度后,将其安放在切片机推进器上。即可切片。 恒冷箱视使用情况每周或每月清洁
冷冻切片术的制作方法
以Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机为例,该机的箱面上有电子控制板,装有即时冷冻键和除霜键,启动即时冷冻键,机器马上进行工作状态,并可持续10mins。启动即时除霜键,可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉,并可持续15mins。有照明键一个,启动该键可照明工作间,有利工作及观察组织的
冷冻切片的方法及注意事项
一、实验前准备1、清理实验台及仪器2、开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度(- 15~-20 ℃*)3、准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品二、取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织,用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材(24×24×2mm*),以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞
冷冻切片术的使用注意事项
新鲜的组织组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好,才能避免冰晶,常用的骤冷剂有:① CO2气(-78℃) ② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷(-80℃) ③ 液氮(-190℃)④ 液氮冷却的丙烷(-19℃)。液氮适用于组织化学,较安全。缺点:组织块易发生龟裂。固定组织为防止水解酶和其他物质的移位、弥散,常
SLEE冷冻切片机的常见问题
1. 开机两小时后(已经达到预设温度),在机器运行过程中,会时常出现达不到预设温度的情况(例如,预设温度为-22℃,但在该温度下,机器运行了大概半小时以后,出现机内温度上升至-14~17℃的现象)原因与分析:在切片时要经常开关玻璃门的,如果这个操作不是很迅速,再加上房间温度比较高,机箱内的温度是不太
冷冻切片的制作方法及注意事项
冷冻切片的方法及注意事项一、实验前准备⒈清理实验台及仪器⒉开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度(- 15~-20 ℃*)⒊准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品二、取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织,用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材(24×24×2mm*),以防形成冰晶造成切片中形成形状
LSCM冷冻组织切片的免疫荧光标记
冷冻组织切片的免疫荧光标记 将冷冻组织切片从 -80℃ 冰箱中取出,室温放置 10 min,待切片回温并干燥,浸于 PBS 中 10 min洗去OCT,可以无需 Triton 处理,即可进行免疫荧光抗体标记,操作步骤与培养细胞反应方法相同。反应在避光湿盒中进行,反应结束时用无荧光封固剂封片,4℃保存
聚焦离子束法制备冷冻含水超薄切片
低温电子断层成像三维重构(cryo-ET)技术是发展结构生物学和细胞生物学重要的研究手段。该技术可以得到更真实的接近天然状态的细胞内部高分辨率的三维结构以及蛋白质大分子定位及相互作用的信息,是蛋白质组学研究的重要辅助手段被成为“可视化蛋白质组学”(Visual Approach to Prote