二维聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的溶解与还原
实验方法原理理想的 2-DE 溶解应能达到破坏所有非共价结合蛋白质复合物和聚积体,形成各个多肽的溶解液。如不能达到这一点,样品中结合牢固的蛋白质复合物可能使 2-DE 中出现新的蛋白质点,相应地表示单个多肽的点强度将下降。此外,溶解方法必须允许可能干扰 2-DE 分离的盐、脂类、多糖和核酸等物质的去除。最后,样品中蛋白质在 2-DE过程中必须保持可溶性实验材料蛋白样品试剂、试剂盒裂解缓冲液实验步骤1.溶解样品溶解是 2-DE 成功分离蛋白质的最关键因素之一。最为普遍应用的 2-DE 蛋白质溶解方法仍然是以下几种物质的混合液(所谓“裂解缓冲液"), 9.5 mol/L 尿素, 4% (m/V) 的 NP40 、 1%(m/V) 的还原剂二硫苏糖醇 (dithiothreitol, DTT) 以及 2% (m/V) 相应 pH 范围的SCA。该配方适用于许多类型的样品,但并不是一种万能方法,其中在膜蛋白质的提取上就对此方法......阅读全文
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的溶解与还原
实验方法原理 理想的 2-DE 溶解应能达到破坏所有非共价结合蛋白质复合物和聚积体,形成各个多肽的溶解液。如不能达到这一点,样品中结合牢固的蛋白质复合物可能使 2-DE 中出现新的蛋白质点,相应地表示单个多肽的点强度将下降。此外,溶解方法必须允许可能干扰 2-DE 分离的盐、脂类、多糖和
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的溶解与还原
基本方案 实验方法原理 理想的 2-DE 溶解应能达到破坏所有非共价结合蛋白质复合物和聚积体,形成各个多肽的溶解液。如不能达到这一点,样品中结合
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳样品的溶解与还原
实验方法原理理想的 2-DE 溶解应能达到破坏所有非共价结合蛋白质复合物和聚积体,形成各个多肽的溶解液。如不能达到这一点,样品中结合牢固的蛋白质复合物可能使 2-DE 中出现新的蛋白质点,相应地表示单个多肽的点强度将下降。此外,溶解方法必须允许可能干扰 2-DE 分离的盐、脂类、多糖和核酸等物质的去
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备——样品分级
实验材料真核组织蛋白质实验步骤由于真核组织蛋白质表达的高动态范围和多样性,有时必须对蛋白质进行分级处理,以降低样品的复杂性并富集低拷贝蛋白质。蛋白质预分级可以用亚细胞分级、液相电泳、吸附色谱和选择性沉淀等方法来实现。此外,还有一种方法是根据蛋白质在一系列溶解能力还和增强的缓冲液中溶解性能不同,而实现
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备——组织样品准备
实验材料固体组织样品试剂、试剂盒溶解缓冲液仪器、耗材研钵实验步骤固体组织样品常在溶解缓冲液中破碎,最好的方法是在组织冷冻及液氮温度的条件下破碎。包裹在铝箔并贮存于液氮中的较小组织样品,可以夹在两个冷研块或基体中间用杵和研钵在液氮环境下压碎,大的组织块可在溶解缓冲液中用旋转叶片型匀浆器进行匀浆处理,但
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备
实验方法原理 由于2-DE 所分析样品的多样性,没有一种制备方法可以普遍适用于各种样品,但有几点考虑一定要提出,很有必要尽量减少可能在 2-DE 谱中导致假点 (artifactualspot) 的蛋白质修饰,在实验中,含尿素的样品一定不要加热,因为加热后尿素分解产生的异氰酸盐可能对蛋白
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备
可溶性样品 组织样品准备 细胞 样品分级 实验方法原理 由于2-DE 所分析样品的多样性,没有一种制备方法可以普遍
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备——可溶性样品
多种用于蛋内质组学研究的蛋白质分离方法得到了发展,如基因芯片技术的应用. 蛋白复合物的质谱直接分析、亲和标签的使用以及大规模酵母双杂交筛选系统。但是,二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 (two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2-DE) 依然是大
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品制备——细胞
实验材料细胞试剂、试剂盒培养基实验步骤对体外悬浮培养生长的细胞或周期性细胞样品(如红细胞、淋巴细胞),理想的方法是通过离心收集,用磷酸盐缓冲液清洗并溶于样品缓冲液。对于在固体基质中培养的细胞,应首先去除培养基质,用 PBS 或等渗蔗糖溶液清洗细胞层,后者是减少可能干扰一向 IEF 的盐的特别有效的方
ICP样品溶解方法
在ICP的测试中,样品前处理占有非常重要的地位,特别是对于不是很精通ICP 仪器及化学分析的用户,往往对一个样品有无从下手的感觉,本人参考了大量的 ICP 分析方法汇编,把样品处理一节整理出来,以供大家参考,内容均来自己网上或有关化学期刊,本人不可能对每个样品都去验证,如果有错误,敬请大家原谅,在工
ICP原理和样品溶解、制备
1. 将样品引入ICP光源的方法 1)液体样品引入ICP光源 A) 将液体雾化成气溶胶状态引入ICP光源,常用的有气动雾化和超声波雾化。 B) 将液体以电热蒸发或直接插入技术来引入ICP光源。 2)固体样品引入ICP光源 A) 电弧式火花融蚀,用放电方式将固体样品的表面产生气溶胶引入I
样品预处理中样品溶液的制备方法溶解法
采用适当的溶剂将样品中的待测组分全部溶解。(1)水溶法用水作为溶剂,适用于水溶性成分,如无机盐、水溶性色素等。①酸性水溶液浸出法。溶剂为各种酸的水溶液,适用于在酸性水溶液中溶解度增大且稳定的组分。②碱性水溶液浸出法。溶剂为碱性水溶液,适用于在碱性水溶液中溶解度增大且稳定的成分。(2)有机溶剂浸出法适
电泳还原与非还原区别
聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式:非变性电泳(Native-PAGE)和变性电泳(SDS-PAGE)。非变性电泳,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开;而变性电泳(SDS-PAGE)仅根据蛋白质亚基分子量的不同
电泳还原与非还原区别
聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式:非变性电泳(Native-PAGE)和变性电泳(SDS-PAGE)。非变性电泳,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开;而变性电泳(SDS-PAGE)仅根据蛋白质亚基分子量的不同
简介溶解氧水质样品采集
(1)用溶解氧瓶取水面下20~50cm的河水、池塘水、湖水或海水。注意不得使水样曝气或有气泡残存在采样瓶中。可用水样冲洗溶解氧瓶后,延瓶壁直接倾注水样或用虹吸法将细管插入溶解氧瓶底部,注入水样后至溢出瓶容积的1/3~1/2,用尖嘴噻慢慢盖上不留气泡。 (2)在河岸边取下瓶盖,用移液管吸取1ml
样品溶解性差,怎么处理?
1.对于固体样品应进行研磨处理,针对不同样品加入适量的增溶剂或者萃取剂,常见的有:甲酰胺、醇类。部分样品需要配加热搅拌,增加样品的溶解性,但温度不宜过高,甲醇在60℃容易挥发。 2.对于在甲醇中溶解性不好,甚至不溶的样品,建议使用禾工科学仪器研制的卡氏加热顶空进样器(简称卡氏炉)进样,该进样器将样品
还原型血红蛋白溶解度试验
几种血红蛋白溶解度如下: HbA的溶解度 88%=100% HbS杂合子 35%=68% HbS纯合子 6%=23% HbS和HbC双重杂合子为 36%=44% HbC杂合子 83%=100% 【临床意义】 各种异常血红蛋白中以HbC的溶解度最大。还原型HbS较其他种异常血红蛋白的溶解
非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳
中文名称非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳英文名称nonreductive polyacrylamide gel electrophoresis定 义不含巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)等还原剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳。在这种电泳中蛋白质的二硫键不会被还原打开,与还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果对比,可以分析蛋白
粉末样品不溶解如何测原子吸收
正好我现在在做原子吸收,对这方面比较了解,我来回答你的问题吧!建议你称取适量的样品于聚四氟乙烯的消解罐中,加5ml浓硝酸,在加热板180摄氏度加热大约15分钟,直到无红棕色气体冒出为止。然后取下冷却一段时间,补加3ml浓硝酸,放入微波消解仪中消解。微波消解仪的预置您应该知道吧?分四步,分别是压力和时
化学氧化与还原
一、反应原理 利用某些溶解于废水中的有毒有害物质在氧化还原反应中能被氧化或还原的性质,把它们转化成为无毒无害的新物质,或者转化成容易从水中分离排除的形态(气体或固体),从而达到处理的目的,这种方法称为废水处理中的氧化还原法-氯浓度在线监测仪。 氧化还原法的实质是:在氧化还原反应中.参加化
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳原理介绍
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离).这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析 蛋白质最有效的一种电泳手段.通常第一维电泳是等电聚焦,在细管中(φ1~3 mm)中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子
样品空白与空白样品的差异
1、二者在取样上存在不同,一个是取纯水,另一个是取待测样品。2、二者所用的分析方法不同,一个采用参照分析法,在分析的过程中不加任何显色剂成分,另一个则完全靠分析方法操作。3、校正内容不同,一个是校正样品本身在某一波长下的吸光度,而另一个则校正试剂以及纯水中所含的待测成分与相应的干扰成分。
中药样品的取样与样品保存
中药及其制剂的分析检验,一般多采取估计取样,即将整批中药抽出一部分具有代表性的供试品进行分析、观察,得出规律性“估计”的一种方法。对检测结果进行数据处理和分析,最后做出科学的评价。取样时应注意以下两点。(1)取样要具有一定的代表性;取样的基本原则应该是均匀、合理。为使供试品能准确地反映整批中药及其制
聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品处理方法
根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。1、还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或β-巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳——样品的准备
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液磷酸缓冲液贮液咪唑缓冲液贮液过硫酸铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液SDSTEMED实验步骤一、样品缓冲液的配制根据 SDS 电泳的原理,样品缓冲液中必须含有 3~4 倍于蛋白的 SDS 和足以断裂二硫键的还原试剂(2%~3% 二硫苏糖醇或 4%~5% β-巯基乙醇 )。
还原型血红蛋白溶解度测定的正常值
HbA的溶解度 88%-100% HbS杂合子 35%-68% HbS纯合子 6%-23% HbS和HbC双重杂合子为 36%-44% HbC杂合子 83%-100%
还原型血红蛋白溶解度测定的临床意义
异常结果: HbA的溶解度 小于88% HbS杂合子 小于35% HbS纯合子小于6% HbS和HbC双重杂合子小于36% HbC杂合子小于83% 根据各种杂合子的溶解度不同,可助于诊断各种血液病,如贫血。 需要检查的人群:血液病患者。
氧化还原反应的应用与意义
氧化还原性的强弱判定物质的氧化性是指物质得电子的能力,还原性是指物质失电子的能力。物质氧化性、还原性的强弱取决于物质得失电子的能力(与得失电子的数量无关)。从方程式与元素性质的角度,氧化性与还原性的有无与强弱可用以下几点判定 :(1)从元素所处的价态考虑,可初步分析物质所具备的性质(无法分析其强
氧化还原反应的研究与发展
应具有一些相似特征,提出了氧化还原反应的概念:与氧化合的反应,称为氧化反应;从含氧化合物中夺取氧的反应,称为还原反应。随着化学的发展,人们发现许多反应与经典定义上的氧化还原反应有类似特征,19世纪发展化合价的概念后,化合价升高的一类反应并入氧化反应,化合价降低的一类反应并入还原反应。20世纪初,成键
如果样品溶解度太低如何上制备HPLC?
(1) 了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质,通过调节溶剂的pH值等, 以达到较好的溶解度。(2)样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂(如丙酮等)以助溶。 (3)不是一定要用流动相来溶解样品,对溶解度差的样品,可以选择甲醇,THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO,对一般的化合物溶解