细胞色素P450的光谱测定——比色法
实验材料肝微粒体蛋白试剂、试剂盒磷酸缓冲液Tris缓冲液蒸馏水仪器、耗材试管试管架比色池双光速分光光度计微量注射器针头单光束紫外分光光度计细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。 细胞中,细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上,作为一种末端加氧酶,参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来,对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。最新研究表明细胞色素P450还是药物代谢过程中的关键酶,而且对细胞因子和体温调节都有重要影响。 CYP参与药物代谢的总反应式可用式表达:DH+NADPH+[H+]+O2→DOH+H2O+[NADP+] 含铁离子的P450与药物分子结合,接受从NADPH—P450还原酶传递来的一个电子,使......阅读全文
细胞色素P450的光谱测定——比色法
实验材料肝微粒体蛋白试剂、试剂盒磷酸缓冲液Tris缓冲液蒸馏水仪器、耗材试管试管架比色池双光速分光光度计微量注射器针头单光束紫外分光光度计细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的
细胞色素P450的光谱测定
细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。 细胞中,细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上,作为一种末端加氧酶,参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年
底物与肝细胞色素P450结合光谱的测定
肝脏的细胞色素P450系统在药物的代谢中起着重要作用,它将药物由疏水型转化为更易排泄的亲水型。生物转化反应一般可分为细胞色素P450依赖的I相和II相结合反应。最近几年内已清楚药物的肝外代谢对体内药物总的降解起一定的作用。胃肠道内的生物转化是非常重要的,因为它可降低口服药物的生物利用度。遗传多态性、
底物与肝细胞色素P450结合光谱的测定
实验材料大鼠肝微粒体蛋白试剂、试剂盒环己巴比妥Tris缓冲液蒸馏水仪器、耗材比色杯试管双光束分光光度计微量注射器针头肝脏的细胞色素P450系统在药物的代谢中起着重要作用,它将药物由疏水型转化为更易排泄的亲水型。生物转化反应一般可分为细胞色素P450依赖的I相和II相结合反应。最近几年内已清楚药物的肝
NADPH细胞色素C(P450)活性测定
实验材料 肝微粒体蛋白试剂、试剂盒 DADPH磷酸缓冲液细胞色素C仪器、耗材 比色池秒表试管试管架紫外分光光度计
NADPH细胞色素C(P450)活性测定
NADPH-细胞色素C(P-450)是一种血红素蛋白,它是一个末端氧化酶,由于当它处于还原形式时,与一氧化碳结合形成一种亚铁羰基加成物。在可见光450nm处有最大的吸收峰,故命名为细胞色素P-450,和其他的天然血红素相同,分子中的铁原子是以与原卟啉IX呈符合物的形式存在,肝中含细胞色素P-450酶
细胞色素b5的测定——比色法
实验材料肝微粒体蛋白试剂、试剂盒连二亚硫酸钠蒸馏水仪器、耗材比色池双光速分光光度计试管试管架微量注射器针头细胞色素b5存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合,用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为555、526、423和414毫微米,
细胞色素b5的测定
细胞色素b5存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合,用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为555、526、423和414毫微米,分子量为12500,氧化还原电位+0.02V。可由同样内质网膜内的还原酶通过NADH进行还原。还原型b5与
细胞色素C溶液的含量测定方法
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。供试品溶液精密量取含铁量项下的供试品溶液1ml置50ml量瓶中,用鉴别(2)项下的磷酸盐缓冲液稀释至刻度,加连二亚硫酸钠约15mg,摇匀。测定法取供试品溶液,在约550nm的波长处,以间隔nm找出最大吸收波长,测定吸光度,按细胞色素C的吸收系数(E1)为23
细胞色素c活力测定方法概况
细胞色素c氧化晦 (Cytochrome e oxidase,COX)亦称细胞色素氧化酶,存在于真核生物细胞的线粒体上,主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量,是线粒体电子传递链末端氧化。COX单体为2-亚铁血红素,23)铜蛋白,相对分子质量为150~200kuKD)COX的每个单体由至少13条不同的
细胞色素C的细胞色素的基本介绍
细胞色素种类较多,可以用光谱学、血红素基团的精确结构、抑制剂的敏感度以及还原电势的大小来分辨。 根据辅基的不同,可以将细胞色素大致分为三类: 分类辅基 细胞色素a 血红素a(原血红素) 细胞色素b血红素b(甲酰血红素) 细胞色素d 二氢卟酚(Chlorin)的衍生物 细胞色素c不是根
培养细胞的活力测定(四唑盐比色法)
培养细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成,从形态上区别死、活细胞是困难的。方法:四唑盐(MTT)比色法四唑盐(MTT)商品名为噻唑蓝四唑盐比色法的原理:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,
细胞色素C的制备及含量、活力测定
一、实验目的 (1)通过细胞色序C的制备,了解制备蛋白质制品的一般原理和步骤 (2)掌握制备细胞色素C的操作技术及含量的测定方法 二、实验原理 细胞色素是一类含有铁 啉基团的电子传递蛋白,只存在于需氧细胞中。细胞色素在线粒体内膜上起传递电子的作用。细胞色C (cytoch
细胞色素C的制备及含量、活力测定
一、实验目的 (1)通过细胞色序C的制备,了解制备蛋白质制品的一般原理和步骤(2)掌握制备细胞色素C的操作技术及含量的测定方法二、实验原理 细胞色素是一类含有铁 啉基团的电子传递蛋白,只存在于需氧细胞中。细胞色素在线粒体内膜上起传递电子的作用。细胞色C (cytochrome c) 是细胞色素一
氨基比林N脱甲基酶活性测定_NASH比色法
许多药物在肝内被依赖细胞色素P-450药酶系统所代谢,药物的氨(N)脱甲基反应是一个共同的代谢途径。先是α-碳原子的羟化随甲醇胺中间产物分解,释放出甲醛。所以如果生成的甲醛能够被测定,则为测定N-脱甲基酶活性提供了一个适当的方法。根据Hantzsch反应原理,溶液中甲醛可以采用NASH比色法测定。实
细胞色素C注射液的含量测定方法
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液精密量取本品1ml,置50ml量瓶中,用磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.38g与磷酸氢二钠31.2g,加水适量使溶解并制成1000ml,调节pH值至7.3)稀释至刻度加连二亚硫酸钠约15mg,摇匀测定法取供试品溶液,在约550nm的波长处,以间隔0.5
注射用细胞色素C的含量测定方法
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。供试品溶液取本品5支,各加磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.38g与磷酸氢二钠31.2g,加水适量使溶解并制成1000ml,调节pH值至7.3)适量使溶解,并全量转移至同100ml量瓶中,用上述磷酸盐缓冲液稀释至刻度,摇匀。精密量取2ml,置10ml量瓶中,用上
细胞色素试剂盒测定中试剂准备
细胞色素试剂盒测定中试剂准备:在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再 进行测定,证试剂盒温度要和室温一致。如果把试剂盒从冰箱拿出来直接做实验会造成一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因为在后面的孵育反应步骤中,造成孵育时间不够。其次,ELISA实验中洗板用的洗液需每日更换
混合功能氧化酶的组成
混合功能氧化酶系包括细胞色素P-450,NADPH细胞色素P-450还原酶、细胞色素B-5NADH-细胞色素B-5还原酶、芳烃经化酶、环氧化物水化酶以及磷脂等。其中以细胞色素P-450最为重要,它与分子氧形成“活性氧”复合体,能氧化进人肝、肺的外源性化学物质。
关于混合功能氧化酶的组成介绍
混合功能氧化酶系包括细胞色素P-450,NADPH细胞色素P-450还原酶、细胞色素B-5NADH-细胞色素B-5还原酶、芳烃经化酶、环氧化物水化酶以及磷脂等。其中以细胞色素P-450最为重要,它与分子氧形成“活性氧”复合体,能氧化进人肝、肺的外源性化学物质。
细胞色素的定义
卟啉环以四个配价键与铁原子相连,形成四配位体螯合的络合物,一般称为血红素。根据血红素辅基的不同结构,可将细胞色素分为a、b、c和d类。b类细胞色素的辅基是原血红素即铁-原卟啉Ⅸ。卟啉环上的侧链取代基为4 个甲基,两个乙烯基和两个丙酸基与血红蛋白、肌红蛋白辅基的结构相同。a 类细胞色素辅基的结构是血红
叶绿体色素的定量测定
【原理】根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的光密度D与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即:D=kCL式中:k为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,k为该物质的比
叶绿体色素的定量测定
实验方法原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的光密度D与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即:D=kCL式中:k为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,k为该物质
比色法测定COD
比色法测定COD您也可以通过COD水质检测仪查看样品吸光度的变化来了解重铬酸盐的消耗量。由于三价铬(Cr 3+)和六价铬(Cr 6+)的颜色样品吸收特定波长。通过在光度计或分光光度计中测量样品在600nm波长处的吸光度,可以量化消化后样品中三价铬的量。或者,可以使用420nm六价铬的吸光度来确定消化
细胞色素的特征分布特点
真核细胞真核细胞(动物、植物、酵母、脉孢菌)的线粒体膜和某些细菌的细胞质膜上的氧化磷酸化电子传递链中,细胞色素包括:Cyt a、Cyt a3、Cyt b、Cyt c、Cyt c1,除Cyt c外其他都是紧密结合在线粒体内膜上,Cyt c1因呈现水溶性,故与线粒体内膜结合不紧密。它们的氧化还原电位(电
细胞色素C的用途
1.细胞呼吸激活药。对组织中细胞的氧化、还原过程具有迅速的酶促作用。用于急救或辅助治疗中因各种原因引起的组织缺氧。对抗癌药物引起的白血球降低,四肢循环障碍,肝疾患,肾炎亦有一定的治疗作用。 2.适用于治疗由脑缺氧、心肌缺氧和其他组织缺氧引起的一系列症状。本品尚能促进受损肝细胞再生、骨髓造血机能
细胞色素的结构特点
a 类细胞色素辅基的结构是血红素A,它与原血红素的不同是在于卟啉环的第八位上以甲酰基代替甲基,第二位上以羟代法呢烯基代替乙烯基。d类细胞色素仅在细菌中发现,它的辅基为铁二氢卟啉,与其他细胞色素不同。c类细胞色素的辅基是血红素以其卟啉环上的乙烯基与蛋白质分子中的半胱氨酸巯基相加成的硫醚键共价结合(见图
细胞色素的主要类型
所有需氧生物,不论是细菌或高等动物甚至是人都存在有细胞色素,所有细胞色素在可见光区域都有三个吸收峰,分别称为α、β、γ峰。各种还原型细胞色素的β峰及γ峰的波长都比较接近,唯有α峰的波长有较大的差别。根据α峰波长的不同,可将动物体内的细胞色素分成a、b、c三族,a族包括a,a3,b族包括bK,bT,b
细胞色素C的概况
本品为生物氧化过程中的电子传递体。其作用原理为在酶存在的情况下,对组织的氧化、还原有迅速的促酶作用。通常外源性细胞色素C不能进入健康细胞,但在缺氧时,细胞膜的通透性增加,细胞色素C便有可能进入细胞及线粒体内,增强细胞氧化,能提高氧的利用。 来自三羧酸循环中产生的琥珀酸辅酶A,其肽链仅有104个
细胞色素C的概况
本品为生物氧化过程中的电子传递体。其作用原理为在酶存在的情况下,对组织的氧化、还原有迅速的促酶作用。通常外源性细胞色素C不能进入健康细胞,但在缺氧时,细胞膜的通透性增加,细胞色素C便有可能进入细胞及线粒体内,增强细胞氧化,能提高氧的利用。 来自三羧酸循环中产生的琥珀酸辅酶A,其肽链仅有104个