荧光素酶的测定实验

实验方法原理荧光素 4-单氧酶(ATP-水解)提取于萤火虫,Photinus Pyralis。荧光素+ATP+O2→氧和虫荧光素+PPi+H2O+光光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的式中,H 是 Planck 常量;v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低([ATP]<<Km)时,Michaelis-Menten 等式就可以简化成:I=常量 ×[ATP]常量=V/Km。光密度与 [ATP] 成正比。实验材料荧光素酶试剂、试剂盒Tris-乙酸ATPMgSO4荧光素仪器、耗材分光光度计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」开始加入 0.01 ml ATP10 s 后(25℃)读光密度值(562 nm 处的放射最大值)。利用在 0.05~0.5 umol/L 之间的 ATP 制作标准曲线。一个酶单位被定义为,在 25℃ 甘氨酸-Tris pH 7.6 溶液中,含 5 pmol ATP 及 7.5 nmol......阅读全文

荧光素酶的种类以及应用

在细胞和基因的微观世界中研究探索,遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具,具有广泛的应用。荧光素酶(萤光素酶)以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。荧光素酶不是特定的分子,是一类中能催化产生生物发光的酶的统称,不同来源的荧光素酶各有特点,可催化底物发出不同颜色的光,有的还

什么是双荧光素酶

荧光素酶(Luciferase)是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光

什么是双荧光素酶

荧光素酶(Luciferase)是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光

什么是双荧光素酶

荧光素酶(Luciferase)是催化莹光素氧合而发光的蛋白酶即[让萤火虫尾部荧光素发出荧光的蛋白质]莹光素+ATP+O2-->氧合莹光素+AMP+PPi+荧光

荧光素酶检测(Luciferase-assay)

Introduction Luciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters, and/or the transfection efficiency. Aims You will be prov

二氯荧光素量子产率的测定实验

实验方法原理荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料的制备已成为这些领域的研究热点与前沿,而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它们的性能优劣。荧光量子产率(YF)即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小

二氯荧光素量子产率的测定实验

实验方法原理荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料的制备已成为这些领域的研究热点与前沿,而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它们的性能优劣。荧光量子产率(YF)即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小

“荧光素,荧光素酶,能态,基态”是什么意思

免疫荧光法免疫荧光法的基本原理是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。常用的荧光素有①异硫氰酸荧光素(fluorecein isothiocyante,FITC

荧光素钠的含量测定

照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品约25mg,精密称定,置50m1量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取荧光素钠对照品约25mg,精密称定,置5oml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2ml,置00ml

双荧光素酶报告基因实验中的质粒怎么找

(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。是检测启动子的荧光报告载体,当然是将miR的启动子序列构建

双荧光素酶报告基因检测实验技术服务

1、  实验简介Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光(波长540-600nm),且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的

双荧光素酶报告基因检测实验技术服务

1、  实验简介Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光(波长540-600nm),且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的

双荧光素酶实验一般多长时间

1个半小时。双荧光素酶实验是一种化学实验,该实验需要将荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性,来制作感兴趣的基因转录克隆体,其需要1个半小时的时间来完成该实验。因需要让荧光素酶与底物结合充分反应,该实验过程需要非常多的时间。

荧光素酶基因是怎样产生的

用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光

荧光素酶基因是怎样产生的

用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光

荧光素酶基因是怎样产生的

用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光

荧光素酶基因是怎样产生的

用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光

荧光素酶基因是怎样产生的

用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光

荧光素酶的作用原理及应用

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因

荧光素酶的作用原理及应用

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因

荧光素酶和腔肠素Coelenterazine的选择及使用

荧光素酶 自然界中的荧光素酶:是自然界中能够产生荧光的酶的系统,如发光真菌,发光海星,发光鱼,发光节虫,发光甲虫等。 萤火虫荧光素酶:目前常用的萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫(Photinus pyralis),是一个61KDa的单体酶,无需表达后修饰,直接具有完全酶活性,反应需要底物荧光素以及

双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

双荧光素酶报道系统详解

一、概述报告基因 (reporter gene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。  一般的,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。在基因表达调控的研究中,

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定

单细胞凝胶电泳实验可应用于: (1)快速检测单细胞DNA损伤; (2)遗传毒性生物监测; (3)确定精子细胞中DNA片段化的程度。实验方法原理萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶,同时在所有的化学发光反应中,它的光产物具有最高的量子效

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验             实验方法原理 萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶,

非同位素分析基因活性实验——冻融裂解细胞荧光素酶分析

实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒PBS仪器、耗材培养皿细胞刮子离心机实验步骤1.  用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。 2.  每只培养皿中加1 ml 提取缓冲液,立即用橡胶刮子刮下细抱,移至1.5 ml 微量离心管中。离心15~30 s,弃上清。3.  在细胞沉淀中

维生素B2-(核黄素)-荧光测定法实验_荧光测定法1

实验方法原理核黄素能形成一种具有黄绿色荧光的黄色溶液。它在稀溶液中,440~500 nm波长下测定的荧光强度与核黄素的浓度成正比。根据其在还原后的荧光差数,可测定核黄素的含量。实验材料核黄素试剂、试剂盒高锰酸钾溶液 荧光红钠 硫代硫酸钠 冰醋酸仪器、耗材荧光分光光度计 玻璃器实验步骤溶液配制:1.