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荧光素酶的种类以及应用

在细胞和基因的微观世界中研究探索,遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具,具有广泛的应用。荧光素酶(萤光素酶)以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。荧光素酶不是特定的分子,是一类中能催化产生生物发光的酶的统称,不同来源的荧光素酶各有特点,可催化底物发出不同颜色的光,有的还可以配合进行双色发光检测。这种酶最早的来源,也是最有代表性一种来自学名为Photinus pyrali'的北美萤火虫体内的萤光素酶,之所以称为萤光素酶,一方面也有助于区分需要激发光源才可以生成激发荧光的荧光蛋白,而萤光素酶是一个催化底物分解的发光反应,荧光素酶在细胞内没有背景,因此可以检测非常微弱的表达,灵敏度更高。不过,随着发光检测设备的不断推进和升级,生物发光灵敏度高,检测方便的优势使得这类酶与荧光蛋白一起渐有取代其他报告基因的趋势。于是,越来越多新的并非来自萤火虫的新荧光素酶进入市场,不再是“......阅读全文

活体生物发光成像技术的最新进展

活体动物体内光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进

小动物活体成像

小动物活体成像主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进行标记。利用一套非常灵敏的光学检测仪器,让研究人员能够直

小动物活体成像

小动物活体成像   主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进行标记。利用一套非常灵敏的光学

双荧光素酶报告基因测试

在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利。因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验             实验方法原理 萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定

单细胞凝胶电泳实验可应用于: (1)快速检测单细胞DNA损伤; (2)遗传毒性生物监测; (3)确定精子细胞中DNA片段化的程度。实验方法原理萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶,同时在所有的化学发光反应中,它的光产物具有最高的量子效

荧光素酶的作用原理及应用

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因

活体动物体内光学成像(四)

3. 标记细菌(1) 细菌侵染研究可以用标记好的革兰氏阳性和阴性细菌侵染活体动物, 观测其在动物体内的繁殖部位、数量变化及对外界因素的反应。(2) 抗生素药物利用标记好的细菌在动物体内对药物的反应,医药公司和研究机构可用这种成像技术进行药物筛选和临床前动物实验研究。4. 基因表达和蛋白质相互作用(1

荧光素酶的作用原理及应用

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因

五种小动物活体成像专用设备特点、应用及优缺点比较 一

摘要:随着小动物成像技术的发展,活体小动物非侵袭性成像在临床前研究中发挥着越来越重要的作用。本文围绕五种小动物成像专用设备,综述其特点及主要应用,比较各种设备的优势和劣势,总结小动物活体成像设备的发展趋势。动物模型是现代生物医学研究中重要的实验方法与手段,有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发

活体动物体内光学成像(五)

3. 底物荧光素(Luciferin)是如何进入小鼠体内的?需要多少? 荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的,约一分钟就可以扩散到小鼠全身。 大部分发表的文章中,荧光素的浓度是150mg/kg (见下图)。20克的小鼠需要3毫克的荧光素,价钱约两到三美元。常用方法是腹腔注射,扩散较慢

活体动物体内成像技术文献-2

12. 药物对蛋白质相互作用的影响Kinetics of regulated protein-protein interactions revealed with firefly luciferase complementation imaging in cells and living anima

双荧光素酶检测的原理和应用

一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶(Luciferase)是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称,来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏

报告基因(report gene)的应用

报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物-荧光素酶敏感性高,测定方法快速且宜于掌握,线性好,并且荧光素酶产生的

报告基因的应用

实验概要报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物-荧光素酶敏感性高,测定方法快速且宜于掌握,线性好,并且荧光素

哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验

实验材料 用感兴趣的 DNA 转染的哺乳动物培养细胞试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液荧光素酶测定缓冲液荧光素溶液不含钙盐和镁盐的磷酸盐缓冲液仪器、耗材 荧光光度计和光度计测置管橡胶棒实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。细胞裂解缓冲液25 mmol/L 双甘氨肽(pH7.8)15 mmol/L

生物发光技术研究及其应用进展

摘要:目的:了解生物发光种类、机理及其在医学、生物科学、食品、环保等领域的应用。方法:对有关的文献中生物发光种类、机理及其在上述领域的具体应用进行综述。结果:生物发光有两类,机理明确,应用广泛。结论:生物发光在很多领域的应用日趋广泛,对其深入了解和研究至关重要。生物发光是生物发光器在细胞或生物体内发

生物发光技术研究及其应用进展

  摘要:   目的:了解生物发光种类、机理及其在医学、生物科学、食品、环保等领域的应用。   方法:对有关的文献中生物发光种类、机理及其在上述领域的具体应用进行综述。   结果:生物发光有两类,机理明确,应用广泛。   结论:生物发光在很多领域的应用日趋广泛,对其深入了解和研究至关重要。

生物发光技术研究及其应用进展

  摘要:   目的:了解生物发光种类、机理及其在医学、生物科学、食品、环保等领域的应用。   方法:对有关的文献中生物发光种类、机理及其在上述领域的具体应用进行综述。   结果:生物发光有两类,机理明确,应用广泛。   结论:生物发光在很多领域的应用日趋广泛,对其深入了解和研究至关重要。

生物发光技术研究及其应用进展

摘要:目的:了解生物发光种类、机理及其在医学、生物科学、食品、环保等领域的应用。方法:对有关的文献中生物发光种类、机理及其在上述领域的具体应用进行综述。结果:生物发光有两类,机理明确,应用广泛。结论:生物发光在很多领域的应用日趋广泛,对其深入了解和研究至关重要。生物发光是生物发光器在细胞或生物体内发

活体动物光学成像技术在中医药研究中的应用展望(一)

活体动物体内光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及d

荧光素酶和腔肠素Coelenterazine的选择及使用

荧光素酶 自然界中的荧光素酶:是自然界中能够产生荧光的酶的系统,如发光真菌,发光海星,发光鱼,发光节虫,发光甲虫等。 萤火虫荧光素酶:目前常用的萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫(Photinus pyralis),是一个61KDa的单体酶,无需表达后修饰,直接具有完全酶活性,反应需要底物荧光素以及

活体生物光学成像技术的应用

  作为一项新兴的分子、基因表达的分析检测技术,在体生物光学成像已成功应用于生命科学、生物医学、分子生物学和药物研发等领域,取得了大量研究成果,主要包括: 在体监测肿瘤的生长和转移、基因治疗中的基因表达、机体的生理病理改变过程以及进行药物的筛选和评价等。   1、在体监测肿瘤的生长和转移  

活体荧光成像系统介绍(一)

一、  技术简介活体生物荧光成像技术(in vivo bioluminescence imaging)是近年来发展起来的一项分子、基因表达的分析检测系统。它由敏感的CCD及其分析软件和作为报告子的荧光素酶(luciferase)以及荧光素(luciferin)组成。利用灵敏的检测方法,

活体动物体内光学成像(一)

活体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cy5及Cy7等)进行标记。该技术最初是由美国斯坦福大学的科学家采用了世界上最优秀的高性能CCD研发与生产制造商Roper scientific公司最

活体动物体内生物发光和荧光成像技术基础原理与应用一

活体动物体内生物发光和荧光成像技术基础原理与应用简介 文章目录:一、活体生物发光成像技术二、活体动物荧光成像技术三、生物发光成像与荧光成像的比较四、活体动物可见光成像仪器原理与操作流程活体动物体内成像技术是指应用影像学方法,对活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究的技

应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NF-κB活性(三)

荧光素酶检测设定试剂盒中的试剂使用前需在室温下孵育。向装有2 . 2 m g 冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为萤火虫酶底物。向装有440μg冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为水蛭素肠杆菌素。用萤火虫检测缓冲液按1:50比例稀释萤火虫酶底物后即为萤火虫工作液。用海肾荧光素酶缓冲液

小动物活体成像技术

1、背景和原理1999年,美国哈佛大学Weissleder等人提出了分子影像学(molecular imaging)的概念——应用影像学方法,对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。传统成像大多依赖于肉眼可见的身体、生理和代谢过程在疾病状态下的变化,而不是了解疾病的特异性分子事件。

荧光素酶报告基因检测的操作步骤

荧光素酶检测系统,可用裂解液来温和而快速地提取真核细胞中的荧光素酶,用其底物来检测荧光素酶活性。检测步骤如下:1. 加裂解缓冲液裂解转染的细胞。2. 将上述裂解物转移入微孔板或者试管中(根据检测的需要选择所用器材类型)。3. 加入含有所有酶反应成分(必须包括底物荧光素)

活体动物体内成像技术文献

1. 细胞凋亡与白血病Activation of Apoptosis in Vivo by a Hydrocarbon-Stapled BH3 HelixSCIENCE 2004,305:1466-1470 通过对BCL-2蛋白家族BID的BH3结构域进行化学修饰,使其容易穿过细胞膜,在活