抗体或蛋白质中硫基的引入实验

实验材料抗体或蛋白质溶液试剂、试剂盒AMSA 溶液磷酸二氢钾氮气羟胺EDTA仪器、耗材交联葡聚糖 G-25 色谱柱实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」在氮气条件下,每 1 ml 抗体或蛋白质溶液加入 0.1 ml AMSA 溶液,密封试管并在室温下缓缓搅拌 0.5 h。为移除乙酰基并暴露硫醇基团,需加入溶于 0.1 mol/L pH 7.0 Tris-HCl 的 0.2 ml 0.5 mol/L 羟胺、0.01 mol/L EDTA,调整至 pH 7.0。30℃ 放置 4 min。将混合物过柱(交联葡聚糖)并用 0.1 mol/L pH 6.0 的磷酸二氢钾及 5 mmol/L EDTA 洗脱。收集蛋白质组分(280 nm 下测定吸收值)并通过超滤浓缩至 1 ml。注意事项其他试剂:AMSA 溶液(S-乙酰疏基丁二酸酐;Mr=174.2;60 mg 溶于 1 ml N,N'-二甲基甲酰胺)0.1 mol/L 磷酸二氢钾......阅读全文

抗生素或抗真菌剂加入到细胞培养基中的目的

  1)预防污染;  2)一旦发现污染作为一种挽救手段;  3)诱导表达重组蛋白;  4)保持转染细胞的选择性压力。  在常规细胞培养中,除非特别需要,一般不推荐使用抗生素或抗真菌剂。因为抗生素对许多细胞有毒性,并且掩盖支原体、细菌污染。此外,它们可以干扰敏感细胞的代谢。  如果使用抗生素,青霉素链

单克隆抗体的纯化实验——单克隆抗体的纯化实验

1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱,用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱,采用A280监测。 3.  依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白,洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中,中和缓冲液的体积应为所

脂肪和硫基物质对面筋测定系统的影响解析

    向面粉或者是面团中加入极少量含硫基的物质就会明显地引起面筋品质变坏,使面团流散和变稀,例如谷胱甘肽。它在麦胚中含量丰富,对面筋有强烈的液化作用,使面筋测定系统中的面筋或面团完全流散或变弱。谷胱甘肽的氢硫键上的氢易脱去,同时两分子的还原型谷胱甘肽咬以-S-S-键结合,形成氧化型的谷胱甘肽(GS

细胞周期分析实验中同型对照抗体和特异性抗体的用量因素的调整依据

细胞周期分析实验中,同型对照抗体和特异性抗体的用量通常需要根据以下因素进行调整:细胞数量:如果细胞数量较多,可能需要相应增加抗体的用量以确保足够的结合。抗体亲和力:亲和力高的抗体可能需要较少的用量就能达到良好的结合效果,而亲和力低的抗体可能需要增加用量。抗原表达水平:如果目标抗原在细胞表面或内部的表

自由基显示实验

实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 铈生理溶液生理溶液多聚甲醛锇酸实验步骤 1. 组织取下后,立即在含 1 mmol/L 铈生理溶液中切成小块,孵育 5 min。2. 生理溶液漂洗 5 min。3. 4% 多聚甲醛固定、漂洗。4. 锇酸后固定、脱水、包埋等同常规。5. 电镜观察。

自由基显示实验

H2O2细胞化学法 细胞化学法             实验方法原理 实验材料 组织样品

小分子药物单克隆抗体制备

在单克隆抗体制备中,首先进行的就是抗原的设计与合成,这是制备单抗成功与否的关键。因为产生抗体的特异性与亲合性是与抗原密切相关的,合成的抗原如果可以将所需要的抗原决定簇充分暴露出来,那么机体更容易识别抗原决定簇,从而免疫的动物所产生的抗体自然会在特异性和亲合力上最大程度的与抗原决定簇拟合。所以,在制备

蛋白质组学样品前处理的方法

要回答这个问题,首先需要理解样品前处理需要达到的目的:减少人为降解和修饰,并且尽量多的释放肽段。整个过程可以分为以下流程:先从组织、体液或细胞中提取蛋白质,拿到蛋白混合溶液(根据你的研究目的,可以对蛋白先做分离,或者不分离),接下来还原烷基化(还原的过程是将蛋白的二硫键打开,然后烷基化可以修饰巯基,

蛋白质组学样品前处理的方法

要回答这个问题,首先需要理解样品前处理需要达到的目的:减少人为降解和修饰,并且尽量多的释放肽段。整个过程可以分为以下流程:先从组织、体液或细胞中提取蛋白质,拿到蛋白混合溶液(根据你的研究目的,可以对蛋白先做分离,或者不分离),接下来还原烷基化(还原的过程是将蛋白的二硫键打开,然后烷基化可以修饰巯基,

电工所制备出锂硫电池新型多级次石墨烯基碳硫正极材料

  日前,中国科学院电工研究所研究员马衍伟团队设计开发出一种具有多级次微观结构的新型石墨烯-多孔碳球复合纳米材料。该碳复合材料兼具石墨烯纳米片和多孔碳纳米球的优点,具有3182 m2 g-1的超高比表面积和1.93 cm3 g-1的大孔隙率。基于这种碳纳米材料,电工所制备出了高性能锂硫电池正极。  

粗甲苯中硫含量的测定(三)

S、Cl石英管可能出现的故障:⑴.入口处有积炭━━将N2、O2反接10分钟,然后适当调节入口段温度⑵.入口段发白━━清洗气路或更换N2气瓶及硅胶垫⑶.燃烧段积炭━━适当提高中间段温度,加大O2流量⑷.石英管壁起泡━━适当减少样品进样量和分析次数⑸.入口处打火━━N2、O2接反,对调,若无效则重换N2

粗甲苯中硫含量的测定(五)

4﹑硫滴定池的安装⑴ 滴定池的洗涤用新鲜的洗液浸泡整个滴定池5~10 min ,然后分别用自来水,去离子水洗涤吹干,将侧臂活塞涂以少许真空硅脂,并用橡皮筋固定。⑵ 安装参考电极A. 把少量碘放在一个小玛瑙体内,并倒入少量电解液覆盖以防止碘的挥发,然后小心研磨到大约20~40筛目。B.关闭两侧活塞,让

粗甲苯中硫含量的测定(一)

一、仪器简介及使用范围WKL-3000硫分析仪是应用微库仑分析技术,采用计算机控制微库仑滴定的最新产品,具有性能可靠、操作简易、稳定性好、便于安装等特点,可用于石油化工产品中微量硫、氯、氮的分析,广泛应用于石油、化工、科研等部门。WKL-3000硫分析仪以Windows操作系统为工作平台,其友好的用

粗甲苯中硫含量的测定(六)

⒎ 转化系统调试:完成了以上操作步骤,就可以用标样进行转化系统的分析:待基线平稳后,单击“启动”按钮,弹出图17,在主窗体中单击“标样名称”“标样浓度”、“进样体积”“气流量” 数据输入框中的“?”,用删除键删除“?”,并输入标准浓度值“10” ,进样体积数“8.4”。“”,“进样”按钮名称

粗甲苯中硫含量的测定(二)

三、主要技术指标1﹑发  生  电  流:最大:±2mA2﹑放大器输出电压:最大:±30V3﹑给定偏压范  围:0~500mv,连续可调4﹑分析范围:⑴  硫: 0.1mg/L ~ 10000mg/L⑵  氯: 0.3mg/L ~ 10000mg/L5﹑控温范围及精度:室温 ~ 1000℃ , ±1

粗甲苯中硫含量的测定(四)

⑵  氯滴定池工作原理当系统处于平衡状态时,滴定池中保持恒定Ag+浓度.样品经裂解后,有机氯转化为氯离子,再由载气带入滴定池同银离子反应:Ag++Cl-  → AgCl滴定池中银离子浓度降低,指示电极对即指示出这一信号的变化,并将这一变化的信号输入库仑放大器,然后由库仑放大器输出一相应的电流加到电解

酿酒酵母培养基的制备实验——SC培养基

试剂、试剂盒酵母氮碱基葡萄糖SC-Ura 或 SC-Trp 或 SC-Len 或 SC-His 的混合物蒸馏水琼脂仪器、耗材锥形瓶实验步骤1. 在 1 L 的带螺旋盖的瓶中或锥形瓶中将下面的成分溶于 500 ml 水中,置于振荡器上混匀。酵母氮碱基 4.0 g,葡萄糖 12.0 g,SC-Ura 或

单克隆抗体上清制备实验——大量制备杂交瘤或细胞系

实验步骤1. 同备择方案 1 中大规模制备 MAb 上清的步骤 1~4,但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞,或者是在细胞生长的平台期收获。2. 将细胞倒入无菌的 250 ml 锥形离心管中,于 4℃ 250 g 离心 15 min, 弃上清,置细胞沉淀于冰上。3. 将 10 瓶细胞沉淀用 4℃ 的

蛋白质工程嵌合抗体的相关介绍

  免疫球蛋白呈Y型,由二条重链和二条轻链通过二硫键相互连接而构成。每条链可分为可变区(N端)和恒定区(C端),抗原的吸附位点在可变区,细胞毒素或其他功能因子的吸附位点在恒定区。每个可变区中有三个部分在氨基酸序列上是高度变化,在三维结构上是处在β折叠端头的松散结构(CDR),是抗原的结合位点,其余部

酿酒酵母培养条件实验——液体培养基中细胞滴度的检测

实验方法原理酵母在琼脂或液体培养基中的理想培养温度是30℃,培养皿平板应倒置放入塑料盒中,于孵箱或培养室内进行培养。当孵育时间超过2或3天时,塑料盒可防止平板上的琼脂干裂。当使用液体培养基培养时,要使用旋转式或往复式摇床,至少每分钟200转,以保证充分通气;进行大体积液体培养时使用锥形瓶,培养基为瓶

分泌肽能系统干扰中的蛋白质组学分析实验

实验步骤 一、材料 1 细胞培养和裂解 (1)小鼠脑垂体 AtT20 和 AtT20 (proSAAS) 细胞系。 AtT20 .(proSAAS) 细胞系通过用包含一个新霉素抗性基因的 proSAAS 表达载体转染 A

自动定氮仪测定食用菌中的蛋白质实验

  凯氏定氮法由KJELTEC于1833年提出后,经不断改进,已演变为现在的常量法、微量法、半微量以及自动定氮仪法。目前凯氏定氮法为食品标准(GB/T5009.5-2003)中蛋白质的测定方法,但该法前处理消化费时,大批量样品的消化和测定较为困难,操作繁琐,蒸馏容易倒吸,并且滴定时易受人为视觉误差的

常见5种蛋白质中氨基酸的分析实验

  在生命科学的基础研究中,分离、提纯蛋白质是重要而繁锁的工作。生物体中各种蛋白质的氨基酸组成(或构筑)不尽相同。鉴定纯蛋白的最基本方法之一是测定其氨基酸的组分及含量。几年来,我们对一些蛋白质样品(达电泳纯)进行氨基酸分析,为鉴定蛋白质的结构与纯度提供了一项指标。有些蛋白质是国内首次提取或报道。现将

Western-Blot中抗体的选择

Western Blot又称为蛋白质印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。基本原理:聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离,分离后的蛋白被转移到固相支撑物(杂交膜)上,抗体特异性识别目标蛋白,通过酶促反应或者化学发光等

8000万美元之后,复星医药或加码1.4亿美元引入新技术

  1月16日,复星医药举行与Kite Pharma战略合作启动仪式,宣布将与Kite Pharma在华成立合资企业,引进其癌症治疗技术和产品,为中国淋巴癌患者带来全球领先治疗手段。  稍早之前,复星医药公告称将投资不超过8000万美元与Kite设立合资企业,开拓中国(包括中国大陆、香港及澳门)癌症

蛋白质的纯化实验

不发生电泳现象,蛋白质粒子带负电荷,在电场中向负极移动,蛋白质粒子带正电荷;在等电点偏碱性溶液中,在电场中向正极移动,可以将蛋白质进行分离纯化。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis).蛋白质的分离纯化的一般原则①高回收率②高纯度③高活性④方便与快捷⑤经济蛋白质的分离纯化的一般步骤①

蛋白质的分离实验

凝胶层析法 IEF(等电点聚焦电泳)法             实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯

蛋白质的分离实验

实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤法则能将盐除尽

蛋白质的纯化实验

胶体过滤法             实验材料 Sephacryl S-300胶体 试剂、试剂盒

蛋白质的纯化实验

实验材料 Sephacryl S-300胶体试剂、试剂盒 缓冲液buffer A-150仪器、耗材 色析管柱铁夹试管铁架水平仪收集器浓缩用离心机 浓缩用离心管实验步骤 一、仪器设备色析管柱 (Pharmacia C column, 1.6×100 cm)、铁架、铁夹及水平仪;部分收集器(frac