实验方法原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤法则能将盐除尽,所需时间也短,但其凝胶过滤后样品体积较大。所以,要根据具体情况选择使用。前实验中样品体积较小,凝胶达滤后样品体积不会太增加,所以选用凝胶过滤法。实验材料 Sephadex G-25葡聚糖凝胶G-25试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液碘化钾碘汞蒸馏水磺基水杨酸溶液仪器、耗材 锥形瓶量筒层析柱比色磁盘试管皮头滴管实验步骤 一、试剂与器材 1. Sephadex G-25。 2. 0.0175 mol/L,pH6.7磷酸盐缓冲液。 3. 奈氏(Nessler)试剂:于500 m......阅读全文
后基因组时代蛋白质组闪亮登场中国计量院高通量蛋白质检测技术研究取得重大突破 “高通量蛋白质分离检测关键技术研究取得的突破给我们很大鼓舞,但这只是我们大规模系统集成研究的一部分,我们正在着力于系统后续的研究。相信,在不久的将来,这套集成系统将为蛋白质组的分析提供一个完整规范的平台。”谈起不久前通过项
离子交换层析在纯化蛋白质的层析手段中使用最为广泛。它对蛋白质的分辨率高,操作简易,重复性好,成本低。按照离子交换原理,蛋白质可从大量缓冲性溶液中被分离,所以此方法尤适于蛋白质粗提物的初始纯化。在分离蛋白质时,速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分离和不稳定蛋白质的纯化。离子交換层析提供了很多加速分离
对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
一、引言 在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与修饰以及病毒的感染等都涉及到DNA与蛋白质之间的相互作用的问题。 重组DNA技术的发展,人们已分离到了许多重要的基因。现在的关键问题是需要揭示环境因子及发育信号究竟是如何控制基因的转录活性。为此需要: a、鉴定分析
试剂、试剂盒:分离缓冲液 &nbs
聚丙烯酰胺凝胶电泳仪(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的电泳技术,于1959年建立,1964年进一步从理论和实验技术上得到改进并推广应用。由于分辨率高,目前已广泛用于蛋白质等生物大分子的分析。一、PAGE工作原理:
离子交换剂的总交换容量通常以每毫克或每毫升交换剂含有可解离基团的毫克当量数(meq / mg或meq / ml)来表示。通常可以由滴定法测定。阳离子交换剂首先用HCl处理,使其平衡离子为H?。再用水洗至中性,对于强酸型离子交换剂,用NaCl充分置换出H?,再用标准浓度的NaOH滴定生成的HCl,
一、引言在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与修饰以及病毒的感染等都涉及到DNA与蛋白质之间的相互作用的问题。重组DNA技术的发展,人们已分离到了许多重要的基因。现在的关键问题是需要揭示环境因子及发育信号究竟是如何控制基因的转录活性。为此需要:a、鉴定分析参与基因表达调控的DNA元件
3月30日下午,赛默飞世尔科技蛋白质组学市场专员唐佳向大家作了题为《蛋白质组学研究方法和Thermo蛋白质组学解决方案》的报告
实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换(指与蛋白质末端离子的交换);固定在树脂上。通过提高溶液中相反离子浓度或降低蛋白质所带电荷数等方法可将蛋白质从树脂上洗脱下来。利用此法,可根据不同蛋白质电荷性质不同而将其分离开来。若已
试剂、试剂盒分离缓冲液增溶缓冲液洗脱缓冲液Laemmli 样品缓冲液胶段冲洗缓冲液酶解缓冲液肽抽提缓冲液实验步骤3.1 膜的分离因为在研磨材料时,要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋白质混合在一起,所以,最好在分离、鉴定膜蛋白前将这些胞质蛋白质去除掉。为了达到这个目的,我们需要用可穿透这些囊泡的
分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液
选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到
分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清蛋
离子交换层析法 实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋
浅述蛋白质分离纯化的新技术摘 要: 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术,综和近年来国内外的一些研究结果,结合实际应用的例子,分析了各种分离纯化方法的优点,同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。&nbs
主要研究历史在18世纪,安东尼奥·弗朗索瓦(Antoine Fourcroy)和其他一些研究者发现蛋白质是一类独特的生物分子,他们发现用酸处理一些分子能够使其凝结或絮凝。当时他们注意到的例子有来自蛋清、血液、血清白蛋白、纤维素和小麦面筋里的蛋白质。荷兰化学家格利特·马尔德(Gerhardus Joh
选择材料及预处理以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离
选择材料及预处理以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离
摘要:蛋白质是生物体的重要组成部分,在现代生物制药领域有着重要的作用,本文介绍了现代生物分离技术反胶束萃取、双水相萃取和电泳在多肽蛋白质分离中的应用和现状。关键词:蛋白质 反胶束萃取 双水相萃取 电泳一、前言随着基因工程和细胞工程的发
摘要: 蛋白质组研究目的在于从蛋白水平阐明基因的功能,这对于探索生命的奥秘具有重要的意义。蛋白质芯片是近年来兴起的一种强有力的高通量研究方法, 能够一次平行分析成千上万的蛋白样品, 具有很高的敏感度与准确性。它将成为蛋白质组学研究中的强有力的研究方法, 并最终架起基因组学与蛋白质组学的桥梁。1 研
1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 实验试剂、试剂盒 分离缓冲液增溶缓冲液洗脱缓冲液Laemmli 样品缓冲液胶段冲洗缓冲液酶解缓冲液肽抽提缓冲液实验步骤 3.1 膜的分离因为在研磨材料时,要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋
本文介绍了全自动离线二维液相色谱系统在分离复杂多肽混合物及混合蛋白质方面的应用 多维液相色谱在蛋白质组学研究领域中已成为一种成熟的用于分离复杂样品的分离技术。结合离子交换与反相色谱的二维液相常以离线或在线的形式被用于蛋白及多肽的分离中。在线方式虽具有分析自动化程度较高等优点,但比较而言离线
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品
尺寸排阻色谱(SEC)与非变性电喷雾电离质谱(Native ESI-MS)联用技术是研究天然蛋白质的有效工具。但已报道的研究大多集中于技术应用,并未验证蛋白质在所用分离条件下是否处于原始状态,也未评估SEC洗脱条件对蛋白质-固定相的相互作用和蛋白质变性的影响。近期发表在Analytical Ch
实验步骤在评价样品纯度之前,首先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
适用的凝胶总浓度:2%~5%(2)核酸相对分子量与凝胶总浓度的关系:1)核酸相对分子量范围:<1×104适用的凝胶总浓度:15%~20%2)核酸相对分子量范围:1×104~1×105适用的凝胶总浓度:5%~10%3)核酸相对分子量范围:1×105~2×106适用的凝胶总浓度:2%~2.6%用于大分子