斑马鱼胚胎细胞的培养——成纤维细胞饲养层
实验方法原理通过用链酶蛋白酶除去绒毛膜、用添加成分的 FGF 培养液培养细胞和采用不同的胰蛋白酶消化筛选成纤维细胞，用原肠胚期斑马龟的胚胎成纤维细胞制备饲养层 [ Sun et al., 1995a ]。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA受精后8h的胚胎FBS试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培养液D培养液Holtfreter缓冲液仪器、耗材培养瓶实验步骤鳟鱼胚胎提取物：(a)收集胚胎（受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鳟鱼种系，在 10°C 条件下饲养，或者受精后 3 天的斑马鱼，在 28°C 条件下饲养），在 -80°C 条件下冻存(b)为了制备提取物，将约 150 g 胚胎融化后，采用 Tissuemizer 匀浆器（Tekmar ) 用 10 ml LDF 在冰上匀浆 2 min(c)将匀浆通过数层纱布过滤后去除绒毛膜，然后在 4°C 条......阅读全文
斑马鱼胚胎细胞的培养——成纤维细胞饲养层
实验方法原理通过用链酶蛋白酶除去绒毛膜、用添加成分的 FGF 培养液培养细胞和采用不同的胰蛋白酶消化筛选成纤维细胞，用原肠胚期斑马龟的胚胎成纤维细胞制备饲养层 [ Sun et al., 1995a ]。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA受精后8h的胚胎FB
斑马鱼胚胎细胞的培养
成纤维细胞饲养层 原代培养 细胞系 实验方法原理 通过用链酶蛋白酶除去绒毛膜、用添加成分的 FGF 培养液培养细胞和采用不同的胰蛋白酶消化
斑马鱼胚胎细胞的培养——原代培养
实验方法原理收集胚胎，除去绒毛膜，用胰蛋白酶分散胚胎细胞，然后在胚胎成纤维细胞饲养层上培养从斑马鱼囊胚和原肠期胚获得的原代细胞。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纤维细胞饲养层人重组白血病抑制因子试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培
方案27.6－斑马鱼胚胎细胞的培养
成纤维细胞饲养层 原代培养 细胞系 实验方法原理 通过用链酶蛋白酶除去绒毛膜、用添加成分的 FGF 培养液培养细胞和采用不同的胰蛋白酶消化
斑马鱼胚胎细胞的培养——细胞系
实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2细胞（或等同物）试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培养液D培养液Holtfreter缓冲液实验步骤鳟鱼胚胎提取物：(a)收集胚胎（受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鳟鱼种系
斑马鱼胚胎DNA的制备
材料和试剂1. 蛋白酶K（罗氏03115836001）2. 1M的Tris，pH值8.33. 氯化钾4. 吐温20（10％，EMD4 biosciences，655207）5. NP40（10％，Merck，492018）设备1.
胚胎干细胞中饲养层细胞的原代培养实验材料和步骤
实验材料12.5d孕鼠、PBS、DMEM、血清、酒精、双抗、解剖器、培养箱、超净台实验步骤1.性成熟小鼠合笼（♀∶♂=2∶1）2.每天观察小鼠，见阴道栓后确定为怀孕0.5d。3.取12.5d孕鼠，断颈处死，在酒精中泡数秒消毒。控干酒精后置于一个无菌的培养皿中。4.无菌条件下暴露子宫。每打开一层要换一
原代胚胎成纤维细胞培养
实验方法原理细胞培养是模拟机体内生理条件，将细胞从机体内取出，在人工条件下培养，使细胞生存、生长、繁殖和传代，从而可以进行细胞生命过程、细胞癌变等问题的研究。由体内直接取出组织或细胞进行细胞培养叫做原代细胞培养，也有的把第1代细胞与传10代以内的细胞培养统称为原代细胞培养。一般来说，用幼嫩状态的组织
原代胚胎成纤维细胞培养
实验器材手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。实验试剂无Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞（MEF）生长培养基：高糖DMEM
原代胚胎成纤维细胞培养
原代胚胎成纤维细胞培养 实验方法原理 细胞培养是模拟机体内生理条件，将细胞从机体内取出，在人工条件下培养，使细胞生存、生长、繁殖和传代，从而可以进行细胞生命过
饲养层细胞的概念
饲养层细胞，通常是成纤维类细胞，这些细胞可以提供实验细胞更好的营养，有的分化研究则是必须有饲养层细胞。
斑马鱼的胚胎原位杂交试验实录
收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲醇，在-20C 保存，待用（两天和两天以上的胚胎需要用双氧水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成）原位
组织靶向性胚胎嵌合体—斑马鱼囊胚细胞移植
真核生物的基因调控比原核生物复杂得多。这是因为这两类生物在三个不同水平上存在着重大的差别：①在遗传物质的分子水平上，真核细胞基因组的DNA含量和基因的总数都远高于原核生物，而且 DNA不是染色体中的唯一成分，DNA和蛋白质以及少量的RNA构成以核小体为基本单位的染色质；②在细胞水平上，真核细胞的染色
饲养层细胞的功能特点
在正常机体内，细胞除了获得一些血液来的营养外，还在细胞与细胞之间互换特殊的物质，用于分裂分化和营养等。因而，在细胞体外培养中，除了正常的培养基外，先培养一层特殊的细胞，然后再在其上接种要实验的细胞，这样更能模拟体内环境。这些特殊的细胞就是饲养层细胞，通常是成纤维类细胞，这些细胞可以提供实验细胞更好的
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
实验概要小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养主要试剂75%酒精、0.05%Trypsin、SP、DPBS、细胞基础培养液 主要设备35 mm培养皿、60 mm培养皿、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、冻存管、眼科剪、眼科弯镊、离心机实验材料怀孕13.5天【将成年雌、雄小鼠放在同笼中饲养
人胚胎干细胞系:衍生与培养—小鼠胚胎饲养细胞的制备
实验步骤2.3 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备最广泛地用于支持 h E S 的伺养层细胞来自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎饲养细胞（MEFs) ，尽管它们可能是最原始的间叶细胞的前体细胞
细胞技术专题：原代胚胎成纤维细胞培养
实验器材手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。实验试剂无Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞（MEF）生长培养基：高糖DMEM
饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞
试剂和材料：1. MSCs培养基；2. 6孔培养板；3. 丝裂霉素C，100μg/ml；4. 共培养的培养基：IMDM添加10%FBS，100U/ml青霉素和100μl/ml链霉素；5. 细胞因子（干细胞因子，IL-6，Flt-3配体，促血小板生成素）；实验方法：1. 将脐带血来源的间充质干细胞（C
斑马鱼
一、概述斑马鱼是生长在印度、巴基斯坦淡水河流中的一种硬骨鱼（鲤鱼），成年鱼全身仅长4－5厘米，因全身横向分布着一道一道褐色的斑马线而得名。斑马鱼很容易在实验室饲养，一般3个月就可以达到生殖成熟期，雌鱼每次产卵200枚左右，一生可产卵数千枚，斑马鱼所产之卵经24小时即可胚胎发育成熟，仔鱼期只有1个月。
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养
实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料 孕鼠试剂、试剂盒 PBSEDTA胰酶MEF生长培养基FBS高糖DMEM仪器、耗材 眼科直剪眼科直镊眼科弯镊玻璃平皿3尼龙滤网离
小鼠胚胎成纤维细胞传代培养
实验概要小鼠胚胎成纤维细胞传代培养主要试剂0.05%Trypsin、细胞基础培养液、DPBS主要设备100 mm培养皿、15 mL离心管、倒置显微镜实验步骤（1）预先37℃温热细胞基础培养液及0.05%Trypsin。（2）用枪头吸弃培养皿中的培养液，并用DPBS冲洗一遍，然后加入2 mL 0.05
通过流式细胞仪研究斑马鱼胚胎中细胞周期分析
[精华提要]结合绿色荧光蛋白表达的细胞周期分析广泛的用于研究绿色荧光蛋白标记的细胞的细胞周期分布。这个方案是一种用绿色荧光蛋白标记的斑马鱼胚胎来分析细胞周期的方法。材料与试剂1. PBS（Invitrogen公司14040）2. 胎牛血清3. 乙醇4.
原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选
实验方法原理 在指数生长中期，用丝裂霉素C处理饲养层细胞，将细胞培养形成汇合的单层。通过胶原蛋白酶消化从活检标本分离肿瘤细胞，或者用胰蛋白酶消化从原代培养物获得肿瘤细胞，然后将肿瘤细胞接种到汇合的单层上（图24.1）。上皮性肿瘤细胞可以在3
原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选...
原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选实验饲养层技术取决于通过其他接触抑制细胞形成的单层预防成纤维细胞的过度生长。 饲养层技术并不能选择性抑制正常上皮细胞， W为正常表皮细胞和正常乳腺上皮都能在 汇合的伺养层上形成克隆。然而，神经胶质瘤研究的结果表明，在同种饲养层上选择培养等同的正常细胞是
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验
胰酶消化法1 胰酶消化法2 实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF
小鼠胚胎成纤维细胞MEF培养相关知识总结
小鼠胚胎成纤维细胞的富集1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。3、用剪刀剪开每一测的胚囊,并将胚胎
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗相关研究。实验方法胰酶消化法1胰酶消化法2实验方法原理将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基中培养，使细胞得以生存、生
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验
胰酶消化法1 胰酶消化法2 实验方法原理 将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF
以斑马鱼胚胎为模型－研究胚胎发育早期的自我保护机制
当生物体遇到药物或化学污染物入侵时，它会应激性地提高自身转化及外排能力，从而尽快将外源物降解或排出体外，从而实现自我保护，这一作用也被称作生物体的外源物抵御作用。由于该作用决定了药物或污染物在体内的停留时间，从而影响了药物药效或化学污染物毒性的发生，因而受到药物学及环境毒理学研究的广泛关注。
饲养层的准备
实验方法原理接种同源或异源细胞—比如来自小鼠胚胎的细胞。待受测细胞克隆培养之前，中等密度，用射线照射或药物作用使其失去增殖能力。实验材料第二代13天胎龄小鼠胚胎成纤维细胞丝裂霉素C仪器、耗材克隆培养用培养基X射线或6GCo源实验步骤1. 用胰蛋白酶消化原代培养的胚胎成纤维细胞（见方案 12.6、方案