细胞膜流动性测定实验_荧光探针标记法
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液DPH仪器、耗材荧光分光光度计离心机实验步骤1. 取对数生长期的肿瘤细胞，以pH7.2，0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。2. 取107个细胞，离心，加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。3. 25℃振荡温育30 min，再以PBS洗涤1次。4. 悬浮于4 ml PBS溶液中。5. 测定仪器为荧光分光光度计，在激发波长362 nm，发射波长432 nm，狭缝10条件下测定荧光强度。注意事项由于DPH可进入细胞内部，后来又合成了其阳性离子衍生物1-（4-三甲胺苯基）-6-苯基-1,3,5-己三烯（TMDPH）。TMDPH不能透过......阅读全文
细胞膜流动性测定实验_荧光探针标记法
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液DPH仪器、耗材荧光分光光度计离心机实验步骤1. 取对数生长期的肿瘤细胞，以pH
细胞膜流动性测定实验
荧光探针标记法 实验方法原理 常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异
细胞膜流动性测定实验
荧光探针标记法 实验方法原理 常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异
细胞膜流动性测定实验
实验方法原理 常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。实验材料 肿瘤细胞试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液DPH仪器、耗材 荧光分光光度计离心机实验步骤 1. 取对数生长期的肿瘤细
细胞凋亡检测实验——荧光探针双标记法
实验方法原理本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，
细胞膜流动性测定
荧光探针标记法 电子自旋共振法 实验材料 对数生长期肿瘤细胞 试剂、试剂盒
细胞膜流动性测定实验_电子自旋共振法
实验材料对数生长期肿瘤细胞试剂、试剂盒PBS游离5NSA仪器、耗材毛细管离心机离心管试管烧杯电子自旋共振仪膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中产生
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用介绍
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用介绍
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中
科学家发展细胞膜“缓冲荧光探针”
近日，中国科学院大连化学物理研究所副研究员乔庆龙和研究员徐兆超团队发展了组装介导的细胞膜缓冲荧光探针，实现了对细胞质膜的长时间稳定标记和超分辨动态荧光成像，观察到了质膜丝状伪足的动态运动和细胞外囊泡的分泌过程，发现了两种细胞外囊泡的融合模式，为细胞质膜的超分辨动态成像提供了工具。相关成果发表在ACS
科学家发展细胞膜“缓冲荧光探针”
近日，中国科学院大连化学物理研究所副研究员乔庆龙和研究员徐兆超团队发展了组装介导的细胞膜缓冲荧光探针，实现了对细胞质膜的长时间稳定标记和超分辨动态荧光成像，观察到了质膜丝状伪足的动态运动和细胞外囊泡的分泌过程，发现了两种细胞外囊泡的融合模式，为细胞质膜的超分辨动态成像提供了工具。相关成果发表在ACS
LSCM细胞膜流动性
细胞膜流动性 采用荧光光漂白恢复(FRAP)技术还可对细胞膜流动性进行研究。利用NBD-C6-HPC荧光探针标记细胞膜磷脂，然后用高强度的激光束照射活细胞膜表面的某一区域(1～2μm)，使该区域的荧光淬灭或漂白，再用较弱的激光束照射该区域。可检测到细胞膜上其他地方未被漂白的荧光探针流动到漂白区域时
PCR扩增标记法探针标记
PCR扩增标记法探针标记 PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板，在特异引物引导下，在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP，因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
双链DNA探针标记法介绍
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的
差示反转录PCR实验——荧光标记法
实验方法原理荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。在
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA
双链DNA探针标记法的介绍
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到
关于细胞膜的流动性的介绍
细胞膜是由磷脂双分子层和镶嵌、贯穿在其中及吸附在其表面的蛋白质组成的，磷脂双分子层疏水的尾部在内，亲水头部在外。磷脂由分子层构成了膜的基本支架,这个支架不是静止的。磷脂双分子层是轻油般的液体,具有流动性.蛋白质分子有的镶在磷脂分子层表面,有的部分或全部嵌入磷脂双分子层中,有的横跨整个磷脂双分子层
什么是荧光标记法
荧光物标记法，神经纤维的末梢可以吸收很多荧光化合物或荧光染料,经轴突逆向运输到细胞体内,从而建立逆行荧光标记法。例如:Kuypers等(1977)用这种方法在荧光显微镜下根据所用荧光物标记物特有的波长显示吸收荧光物的神经细胞。目前用于神经元标定的荧光物质有十多种。可以根据实验的要求进行单荧光物、双标
切口平移法双链DNA探针标记法
切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'
钙离子荧光探针：比值型荧光探针
前面我们介绍了荧光指示剂法可以将Ca2+检测的实验与其他技术结合使用，如可以与流式细胞仪、荧光分光光度计、或者荧光显微镜进行联合检测 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等，数量较少，可见光型数目较多，包括Fluo-3、钙黄绿素、Rhod-2等。荧光指示剂根据测光原理和数据
生物荧光标记法是什么
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
生物荧光标记法是什么
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
生物荧光标记法是什么
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记，只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针，因为携带的标记分子较少，所以标记比活性不高。
随机引物合成法双链DNA探针标记法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活
改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体
HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成Schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残留的a-和e-氨基。酶与抗体的结合反应后，再加入硼氢化钠还原成稳定的结合物。 (1) 取HRP 5mg溶
免疫电镜胶体金标记法（简称金标法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金标记法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，载于200～300网孔的镍网上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上10min至1h；（3）双蒸水洗3次，每次10分钟。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗，水流