PCR扩增标记法探针标记
PCR扩增标记法探针标记 PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板，在特异引物引导下，在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP，因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理......阅读全文
PCR扩增标记法探针标记
PCR扩增标记法探针标记 PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板，在特异引物引导下，在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP，因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理
PCR扩增制备带标记探针
实验概要用标记脱氧单核苷酸部分代替PCR反应体系中的脱氧核苷酸（一般是带标记的dUTP代替dTTP），经PCR扩增后标记基团随机搀入扩增产物－DNA探针中。这样使探针浓度高，可检测标记基团量多，灵敏度高，与缺口平移法制备探针相比，具有方便简捷的特点，并且由于具高灵敏度因此在检测低丰度，低拷贝数的目的
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
双链DNA探针标记法介绍
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记，只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针，因为携带的标记分子较少，所以标记比活性不高。
双链DNA探针标记法的介绍
分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA
细胞凋亡检测实验——荧光探针双标记法
实验方法原理本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，
切口平移法双链DNA探针标记法
切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'
随机引物合成法双链DNA探针标记法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活
双标记签的PCR扩增
试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTEcDNA标签实验步骤实验方案 A 和 B一、连接混合物的 PCR 扩增1.加入 LoTE 使连接混合物的体积增至 20ul。2.按 1% 浓度稀释连接混合物。3.在 50ulPCR 反应中以 Iul 的 1% 稀释后的连接混合物作为模板：4.最后，在 PCR 的反应中
双标记签的PCR扩增
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签实验步骤 实验方案 A 和 B一、连接混合物的 PCR 扩增1.加入 LoTE 使连接混合物的体积增至 20ul。2.按 1% 浓度稀释连接混合物。3.在 50ulPCR 反应中以 Iul 的 1% 稀释后的连接混合物作为模板：4.最后，在 PCR 的反
双标记签的PCR扩增
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 实验步骤 实验方案 A 和 B 一、连
改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体
HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成Schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残留的a-和e-氨基。酶与抗体的结合反应后，再加入硼氢化钠还原成稳定的结合物。 (1) 取HRP 5mg溶
免疫电镜胶体金标记法（简称金标法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金标记法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，载于200～300网孔的镍网上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上10min至1h；（3）双蒸水洗3次，每次10分钟。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗，水流
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中产生
差示反转录PCR实验——荧光标记法
实验方法原理荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。在
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用介绍
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中
关于活性氧分子荧光探针标记法的应用介绍
众所周知，氧气是生命运动过程中不可缺少的一种气体,而细胞使用氧气时会产生副产品，以高能氧气分子形式存在的废弃物质即为自由基。自由基会对人体组织和细胞结构造成损害，我们把这种损害称为氧化应激，人体在利用氧气过程中会加重自身的压力。活性氧(ROS)是含有氧的化学活性分子，ROS是需氧细胞在代谢过程中
细胞膜流动性测定实验_荧光探针标记法
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液DPH仪器、耗材荧光分光光度计离心机实验步骤1. 取对数生长期的肿瘤细胞，以pH
什么是酶标记法？
酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ，
脉冲标记法的定义
脉冲标记法是指一次性加入示踪物，标记只持续数小时，之后在一定时间内测量示踪物在土壤-植物系统中的分配比例。
免疫标记法及其分类
免疫标记法及其分类1.荧光免疫法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示（△Mb）表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与
常用酶标记法介绍
酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出
定量PCR的技术原理及实验的具体步骤
多年以来PCR技术只作为一种高灵敏的定性技术而被应用，既制约了PCR质量控制的建立，又大大制约了PCR技术的应用，近年来定量PCR的出现为PCR的应用开拓了广阔的前景。 原理：经典PCR一般分为扩增和检测两个阶段,常用溴乙锭染色,凝胶电泳为定性检测手段。由于定性实际上就是定量的一种粗约表现，因此只要
常用DAN探针制备的方法介绍PCR－标记
PCR 技术是1985年 KarryMullis 等首先创建的可在体外迅速、大量地扩增一定长度的核苷酸序列的技术。PCR问世以来已广泛应用于分子生物学研究和疾病诊断中。此技术还应用于核酸探针的制备。Girgsi 等(1988)应用 PCR 从多序列制备了 DNA 探针。Shcow-aletr 和 S
BrdU标记法检验细胞增殖
1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。 2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4、甲
自旋标记法的方法介绍
自旋标记 （spin label）， 很多物质的分子不表现电子自旋共振（ESR），但对这些分子，人工地使之与自由基（free radical）结合从而得以用ESR法来研究，获得独特的ESR信息，这就是自旋标记法。
什么是荧光标记法
荧光物标记法，神经纤维的末梢可以吸收很多荧光化合物或荧光染料,经轴突逆向运输到细胞体内,从而建立逆行荧光标记法。例如:Kuypers等(1977)用这种方法在荧光显微镜下根据所用荧光物标记物特有的波长显示吸收荧光物的神经细胞。目前用于神经元标定的荧光物质有十多种。可以根据实验的要求进行单荧光物、双标
微卫星标记法的特点
与其它标记技术相比，具有以下特点：首先，在每个微卫星DNA 两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，尤其在亲缘关系相近的物种间是保守的，而且在一些紧密相关的物种中其重复单位和重复次数具有一定的相似性。其次，这些小的、串联排列的重复序列经常是通过核苷酸链的滑动错配或者其它未知的过程来改变它们的长度,从而导